JNK1基因沉默对3T3-L1脂肪细胞高分子量脂联素表达的影响

利用短发夹RNA(short hairpin RNA,sh RNA)构建慢病毒载体,利用慢病毒感染3T3-L1细胞,沉默3T3-L1脂肪细胞的JNK1基因,观察其受抑制后二硫键A氧化还原酶样蛋白(disulfide-bond A oxidoreductase-like protein,Dsb A-L)和高分子量(high molecular weight,HMW)脂联素表达的影响。建立携带sh RNA-JNK1的慢病毒载体,用q PCR和Western blotting从基因和蛋白水平筛选出最佳干扰效果的sh RNA-JNK1慢病毒。利用筛选出的sh RNA-JNK1慢病毒沉默3T3-L1脂肪细胞JNK1基因,通过Western blotting检测Dsb A-L、HMW脂联素的表达,并探讨了JNK1基因沉默是否干扰了AMPK通路的活化。在3T3-L1细胞中筛选出对JNK1沉默效果最佳的sh RNA-JNK1组,抑制率达到60%以上(p0.001)。用sh RNA-JNK1慢病毒感染3T3-L1脂肪细胞,用Western blotting检测,结果 AMPK、P-AMPK、Dsb A-L和HMW表达明显增加(p0.001);在3T3-L1脂肪细胞中sh RNA-JNK1慢病毒逆转了AMPK抑制剂Compound C对AMPK、P-AMPK、Dsb A-L和HMW脂联素表达的抑制。3T3-L1脂肪细胞中,沉默JNK1基因后可促进Dsb A-L和HMW脂联素的表达,且JNK1有可能通过AMPK通路实现对脂联素多聚化的调控。     

植物染色体N带的研究

本文研究了大麦、小麦、黑麦、蚕豆、洋葱等染色体的 N 带带型鉴定技术。采用了两种 N 带技术:第一,将染色体标本在5%三氯醋酸(90℃,6分钟)-0.1NHCI(60℃,6分钟)处理,Giemsa染色;第二,染色体标本经 IM NaH_2PO_4(92—94℃,3.5—8.5分钟)处理,Giemsa 染色。试验证明 N 带技术简单、快速,带型清晰。带型分析表明,N 带并非专一地显示核仁组织者。将上述植物的 N 带与 C 带比较,在有些植物中虽然有些 N 带区与 C 带区一致,但也有些区域仅显示出 N 带而无 C 带或仅显示 C 带而无 N 带。为此,N 带技术与 C 带技术的结合使用,将对染色体鉴别十分有价值。N 带同 C 带一样也是细胞遗传学中一个有用的标记。     

中华眼镜蛇心脏毒素(CardiotoxinⅢ)的克隆及其在大肠杆菌和酵母中的表达

心脏毒素cardiotoxinⅢ（CTXⅢ）是中华眼镜蛇毒主要组分之一,根据Genbank中已有的CTXs序列设计特异性引物,从中华眼镜蛇毒中克隆出208bp的CTXⅢ片段,并将该基因片段分别克隆至大肠杆菌His—patch ThioredoxinB载体中,重组CTXⅢ经渗透休克分泌至胞外。将CTXⅢ基因插入酵母pPIC9K分泌型表达载体重组表达,N端带有3个氨基酸（GYT）残基的重组CTXⅢ（rCTXⅢ）分泌量达9．5mg／L,经一步凝胶过滤纯化,其纯度达90％以上,纯化率达65％。经细胞毒性实验检测,纯化的rCTXⅢ 12h的IC50为4．66μg／ml,证实重组蛋白具有良好的生物学活性。