钝顶螺旋藻富集转化硒及硒在藻体中的分布

钝顶螺旋藻在４℃、避光、隔离空气条件下,对硒的吸附量死体显著高于活体。藻体对硒的最大富集量为６２７．４μg.g^-1(DW),培养基中硒浓度在３００μg.ml^-1以下时有机硒转化率大于８０％。藻体中的硒主要分布在水溶性组化率大于８０％。藻体中的硒主要分布在水溶性组分中,占总硒的６５％以上,蛋白质硒占有机硒的７１．９％,多糖、核酸也有一定量硒分布。     

硒蛋白的分子生物学研究进展

已有35种硒蛋白被分离和表征,但许多硒蛋白及其功能仍未完全阐明.硒半胱氨酸(Sec)作为参入蛋白质的第21种氨基酸,由硒蛋白mRNA上的UGA编码.在原核生物,Sec参入硒蛋白的复杂机制已经较为明确,需要四种基因产物（SELA、SELB、SELC和SELD）和一个存在于硒蛋白mRNA上的被称为Sec插入序列(SECIS)的茎环(stem loop)样二级结构.在真核生物,硒蛋白生物合成途径可能在SECIS的结构和位置、特异的延伸因子及其他RNA-RNA或RNA-蛋白质因子之间的相互作用等方面与原核生物不同.另外,哺乳动物硒蛋白mRNA上的UGA翻译为Sec的过程低效,特定位点的UGA密码子不同功能(终止密码和Sec密码)的调控可能是硒蛋白表达低效的关键.     

重组人源性抗HBsAg Fab抗体纯化方法的比较研究

抗HBsAg Fab抗体被认为在预防和治疗HBV引起的肝病中具有重要的作用。为了建立稳定的、适于生产应用的重组人源性抗HBsAg Fab抗体的纯化工艺,本实验对不同纯化方法进行了比较研究。比较了抗Fab抗体亲和层析、ScFv单克隆抗体亲和层析和离子交换层析等3套纯化工艺在酵母发酵生产的重组人源性抗HBsAg Fab抗体纯化中的效率。结果显示,抗Fab抗体亲和层析柱纯化酵母表达的重组Fab,纯度为96．8％,但回收率偏低,只有30％～40％。ScFv单克隆抗体亲和层析纯化的重组Fab,纯度为97．5％,回收率达75％～85％。该工艺能很好的适应较小规模的生产应用。离子交换层析纯化的重组Fab,纯度为97％,回收率为75％～85％。该工艺能很好的适应较大规模的生产应用。以上结果表明,应用ScFv单克隆抗体亲和层析和离子交换层析纯化技术均能很好的纯化出重组人源性抗HBsAg Fab抗体,这两种纯化工艺不仅大大节约纯化成本,且纯化效率和回收率有很大提高。为莺组Fab抗体的工业化生产应用奠定了基础。     

原核表达MurA蛋白并制备其多克隆抗体用于免疫磁珠快速检测单增李斯特菌

【目的】制备MurA多抗,结合免疫磁珠与选择平板进行单增李斯特菌的快速检测,建立单增李斯特菌的免疫磁珠快速检测方法。【方法】构建MurA的原核表达载体,转化大肠杆菌进行优化表达。镍柱纯化表达产物,质谱鉴定重组蛋白,再免疫小鼠,制备其多克隆抗体。用所获多抗制备免疫磁珠,建立单增李斯特菌免疫磁珠-选择性培养基检测方法,并对人工污染牛奶样品进行检测。【结果】在大肠杆菌中高效表达了分子量约为72 kD的可溶性融合蛋白,质谱鉴定其为MurA蛋白;免疫小鼠获得的抗血清效价达1:10 000,与伤寒沙门氏菌、副溶血弧菌、大肠杆菌及属内其它病原菌均无交叉;所建立的免疫磁珠-选择性培养基检测法可检出浓度为103 CFU/mL及以上的单增李斯特菌,仅与英诺克李斯特菌存在一定交叉反应;牛奶样品单次仅需9 h增菌就能被检出,较常规增菌时间缩短39 h;检测限为0.4 CFU/mL。【结论】表达并纯化得到高纯度的单增李斯特菌MurA蛋白,制备的鼠源多克隆抗体亲和力高,特异性好;建立了快速检测单增李斯特菌的免疫磁珠联合选择性培养基法,在灵敏度不变的情况下,实现24 h内成功对牛奶样品的检测,较国标法减少42 h以上。     

ABC-ELISA法检测牛乳过敏小鼠模型中的特异性IgE

目的:建立并优化一种有效检测特异性IgE的方法,以取代皮内试验快速诊断过敏症。方法:用乳清蛋白皮下注射BALB/c小鼠建立牛奶过敏模型,获得小鼠抗血清进行方法学研究。结果:乳清蛋白的最适包被量为500ng,用pH9.4的碳酸盐缓冲液作为包被液,4℃包被过夜效果最佳,选用0.2%的白明胶/1%的BSA封闭效果最好,生物素化抗鼠IgE抗体的最佳反应浓度为1∶1000。结论:建立了检测特异性IgE的生物素-亲和素系统改良的ABC-ELISA法,该法特异、灵敏、安全、简便,可用于临床诊断过敏症。     

重组人源性抗HBsAg Fab抗体的肽质量图谱分析

重组人源性抗HBsAg Fab抗体具有较好的特异性和抗原结合活性,为了更好的阐明毕赤 酵母表达的重组人源性抗HBsAg Fab抗体的性质,用基质辅助激光解析飞行时间质谱(MALDI- TOF-MS)对重组Fab抗体的分子质量和肽质量图谱进行了分析。结果显示,毕赤酵母表达的重组 人源性抗HBsAg Fab抗体的分子质量为50678．49Da,与根据其一级结构计算的理论分子质量相 比多2763．84 Da,显示酵母表达的重组Fab抗体为糖蛋白。用胰蛋白酶酶解重组Fab抗体后进行 MALDI-TOF-MS分析显示,大部分的酶解肽段均能检测出来。结果表明毕赤酵母表达的重组Fab 抗体与预期的结构一致。