脂肪细胞分化过程中影响PAI-1基因转录表达的Dex和C/EBPs顺式调控元件的分析(英)

在研究胰岛素(Ins)、地塞米松(Dex)和甲基异丁基黄嘌呤(Mix)对脂肪细胞分化过程中PAI-1基因表达的影响基础上,为进一步探讨Ins、Dex调控PAI-1基因转录表达的调控机制,应用DNA重组技术,构建含萤光素酶（luciferase）报告基因和PAI-1启动子不同长度片段的嵌合质粒,转染3T3-L1前脂肪细胞并测定报告基因荧光素酶的活性.结果表明,小鼠PAI-1基因起动子－690至－850碱基序列之间有一个Dex的正调控元件.用计算机软件进行分析发现：Dex顺式元件位于PAI-1启动子的－750至－770碱基序列.其组成为：5′ GGTAACCTCTGTTCTCAT 3′.同时还发现在PAI-1启动子的－720至－740碱基序列中,存在一个C/EBPs的结合元件5′CCAAT3′并用凝胶电泳迁移实验对这些元件进行了鉴定.表明Dex正是通过激活转录因子（糖皮质激素受体,GR）和C/EBPα一起与各自的顺式元件结合来促进PAI-1基因的表达.     

Initiator--保守的核心启动子元件

真核生物中蛋白质编码基因的核心启动子元件有4类：传统的TATA盒,上游核心启动子元件BRE,下游启动子元件DPE起始子（initiator,Inr).Initiator元件指的是一段富含嘧啶的序列－PyPyA 1NT/ApyPy,转录起始点位于其中的＋1位。研究表明它被多种转录因子识别和结合,包括TAFⅡ250,TAFⅡ150,TFⅡ－I,YY1和RNA聚合酶Ⅱ等,反映出initiator调控的复杂性。Initiator多存在于人类的管家基础,癌基因,生长因子基因和转录因子基因中,在这些基因的转录起始过程中有发挥着关键作用。     

酵母单杂交系统分离胡萝卜生长素应答元件结合因子

高等植物胚根发育过程中, 生长素是植物细胞进行分裂、延伸和分化的信号, 对根的形成等起着不可缺少的促进作用. 生长素应答元件(AuxRE)存在于很多生长素诱导基因的启动子中, 并具有对生长素作用的应答活性. 本研究构建了特定发育时期的胡萝卜体细胞胚cDNA-AD融合表达文库, 同时构建了含有生长素应答元件的重组报告质粒. 以生长素应答元件为诱饵, 通过酵母单杂交系统筛选获得1个阳性克隆, 该阳性克隆在酵母中表达的AxRF1蛋白能够在体外结合实验中与生长素应答元件结合, 对AxRF1是否有可能参与胡萝卜体细胞胚中生长素诱导基因的表达调控进行了讨论.     

锌指结构：最普遍的核酸识别元件

锌指是最大的DNA结合蛋白家庭,是识别DNA最有效、最成功的一种结构元件。其模块性结构特点及与核酸作用的相对简单性,使其成为研究蛋白-核酸相互作用的理想材料,以及人为设计筛选新的核酸结合蛋白的最佳元件。     

检测植物体瞬间长度变化的三种电磁装置

本文介绍三种测量植物体瞬间伸长变化的方法：线性可变差动变压器法、霍尔元件法和电涡流法。分别阐明了三种方法的工作原理、仪器设计和操作方法,并给出了具体的测定实例。主要用于测量刺激对茎伸长的瞬间效应,但也适用于检测植物器官的微量位移,如叶片或根的向性移动     

神经元限制性沉默因子对人胰岛素基因转录调控作用的研究

为了研究神经元限制性沉默因子(NRSF)调控神经元及胰岛细胞中神经特异性基因的表达,进一步寻找胰岛细胞中可能存在的其他NRSF调控基因.先用生物信息学手段对相关基因进行了分析.筛选及序列比对发现,人胰岛素核心启动子区有一段与NRSE相似的序列,提示,它可能受NRSF调控.构建了含NRSF基因的慢病毒载体,将其稳定转染于INS-1细胞.构建了3种荧光素酶报告载体:含有人胰岛素启动子-荧光素酶(hInsP-LUC)的慢病毒载体,pGL3-Basic载体和含有2拷贝NRSE样基序-荧光素酶(NRSE-LUC)的报告载体.利用稳定转染及瞬时转染实验观察NRSF对报告载体中荧光素酶活性的影响.利用电泳迁移率变动分析实验观察NRSE样基序与NRSF蛋白的结合情况,并通过竞争结合实验、引入特异性抗体实验证实探针与蛋白质结合的特异性.RT-PCR检测证实,感染空病毒的INS-1细胞不表达NRSF,感染含目的基因慢病毒的INS-1细胞能表达NRSF.将含有hInsP-LUC的慢病毒载体稳定转染于上述2种细胞,荧光素酶活性分析结果显示,NRSF的过表达能明显降低胰岛素启动子的活性.瞬时转染hInsP-LUC报告系统于上述2种细胞,结果也显示NRSF能明显抑制胰岛素启动子-荧光素酶的活性.将含有NRSE-LUC的报告载体瞬时转染于上述2种细胞,结果表明过表达NRSF的INS-1细胞组的荧光素酶相对值比对照组有明显下降.电泳迁移率变动分析实验进一步证实,此NRSE样序列可以与NRSF蛋白特异结合,这种特异结合可以被标准的NRSE序列所竞争.结果表明,人胰岛素启动子中含有NRSE样序列,该序列通过与NRSF蛋白结合从而抑制人胰岛素启动子的转录活性.这一研究工作有助于进一步了解NRSF在胰岛细胞中的调控作用.     

木质素过氧化物酶基因5'端上游调控序列的分析

黄孢原毛平革菌（Ｐｈａｎｅｒｏｃｈａｅｔｅｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ）能产生降解木质素的胞外木质素过氧化物酶（ＬＩＰ） 和锰过氧化物酶（ ＭｎＰ）同工酶。为研究ＬＩＰ基因的转录调控机理, 对ＬＩＰ基因（ ＧＬＧ３ 和ＧＬＧ６） 的５′端上游序列进行亚克隆, 获得６ 个亚克隆ＤＮＡ 片段, 然后应用凝胶迁移率变动分析技术筛选能与菌体蛋白质专一性结合的ＤＮＡ片段。结果表明： ＬＩＰ基因ＧＬＧ６ 的５′端上游有一个约６７０ ｂｐ 的ＤＮＡ 片段能与总蛋白质组分专一性结合, 其核苷酸序列分析表明该片段可能含有蛋白质结合的序列特征。研究结果初步显示, 黄孢原毛平革菌可能存在有与ＬＩＰ基因上游某些顺式调控元件相互作用的蛋白质, 调控着ＬＩＰ基因的转录表达。     

植物基因的调控机制探讨

在高等植物中,绝大多数基因的表达是以一定的时间和空间顺序进行调控的,有的基因只在某些特异的组织中表达,有的只在某一特异的发育阶段表达,还有的则只在植物体受到一定的生理刺激后才表达。     

真核生物mRNA稳定性的分子机制

真核生物ｍＲＮＡ稳定性的分子机制钟珍萍＊吴乃虎（中国科学院发育生物学研究所,北京１０００８０）近十年的工作表明,决定细胞中某种ｍＲ－ＮＡ丰度的主要因素有两类：第一,基因的转录以及前体ＲＮＡ分子的加工等步骤的速率;第二,成熟ｍＲＮＡ在细胞中的稳定性。生物学家们曾一度认为ｍＲＮＡ合成速率是决定ｍＲＮＡ丰度乃至蛋白产量的关键性因素,ｍＲＮＡ稳定性这一问题并未引起重视。直到８０年代,对此才有一个新的...     

植物谷氨酰胺合成酶基因以及基因表达

植物谷氨酰胺合成酶基因以及基因表达印莉萍,刘祥林,林忠平（首都师范大学生物系北京１０００３７）（中科院植物所北京１０００４４）一引言谷氨酰胶合成酶（ＧＳ）是植物同化氨途经中的关键酶,其在氮代谢中所处地位可与碳代谢中的Ｒｕｂｉｓｃｏ相媲美。氨的同化初始发生在ＧＳ／ＧＯＧＡＴ循环中。在此循环里ＧＳ（ＥＣ６．３．１．２）与谷氨酸合成酶（ＧＯＧＡＴ;ＥＣ１．４．１．１４）联合将ＮＨ转给α－酮戊二酸生成谷氨酸.