宁夏地区一株奶牛源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌流行株的高通量测序分析

【背景】耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA)是一种常见的条件性致病菌,由MRSA感染导致的奶牛乳腺炎给奶牛养殖户带来了重大的经济损失。【目的】了解宁夏地区奶牛源MRSA流行株基因组序列特征,为MRSA感染的防治提供理论依据。【方法】采用琼脂扩散法对分离株ld11进行抗菌药物敏感性试验,同时运用Illumina高通量测序平台对其基因组DNA进行高通量测序,使用网络数据库对获得的测序序列进行处理分析。【结果】药敏试验结果显示分离株ld11对头孢噻呋、磺胺异恶唑、氨苄西林、红霉素、庆大霉素、苯唑西林、克林霉素、四环素和多西环素耐药,数据分析显示分离株ld11携带耐药基因aadD、spc、str、blaZ、mecA、cat(pC194)、erm(A)、norA、tet(k)和tet(M),二者之间有很好的相关性;分离株ld11携带的耐药基因多于MRSA参考菌株,且分离株ld11和MRSA252的亲缘关系较近。COG功能分析和GO注释结果显示,与维持菌体基本功能和菌株生长增殖相关的基因占优势;KEGG通路分析结果显示,属于代谢通路的基因占比最多。从该菌株基因组序列上共检测到4个基因岛、9个疑似的CRISPR序列和1个完整的前噬菌体序列。【结论】揭示了宁夏地区奶牛源MRSA流行株的部分基因组序列信息,为MRSA菌株间基因组序列信息的比较分析及MRSA感染的防控提供参考依据。     

固氮红细菌(Rhodobacter azotoformans) YLK20去除无机氮的影响因素

【背景】不产氧光合细菌(Anoxygenicphototrophicbacteria,APB)作为一类重要的微生物资源,在水产养殖水体氮污染的修复方面已有广泛研究与应用。养殖水体环境复杂,含多种有机物,尤其是有机氮显著影响菌体除氮功效。【目的】在高浓度无机三态氮(氨氮、硝氮和亚硝氮)共存体系中,阐明小分子有机碳、有机氮和盐度对固氮红细菌(Rhodobacter azotoformans) YLK20去除无机三态氮的影响规律及机制,挖掘针对性强和适应性广的高效除氮菌株。【方法】采用RAST和KEGG方法分析YLK20基因组碳氮代谢途径及耐盐机制;采用次溴酸钠氧化法、紫外和N-(1-萘基)-乙二胺分光光度法分别测定氨氮、硝氮和亚硝氮含量。【结果】基因组显示,YLK20拥有EMP、HMP、TCA、固氮、氨化、氨同化和反硝化碳氮代谢途径,含有soh B、nha C、bet B和gbs A等多种耐盐基因。丙酮酸钠、乙酸钠、柠檬酸钠、乙醇和甘露醇是YLK20生长和去除无机三态氮的良好有机碳,葡萄糖和果糖的存在降低了无机三态氮去除能力,蔗糖体系中硝氮和亚硝氮能被良好去除,但氨氮去除能力较低。在高浓度蛋白胨(3.21 g/L)和尿素(1.43 g/L)体系中,YLK20仍能高效去除无机三态氮。YLK20能在3%盐度内生长良好,低盐度时该菌株能良好去除无机三态氮,高盐度时亚硝氮去除能力受到严重抑制。YLK20对海水和淡水实际养殖水体中的无机三态氮有良好去除效果。【结论】YLK20主要通过氨同化和反硝化途径去除无机三态氮,尤其在高浓度有机氮环境中也能高效去除;该菌株适应盐度范围广,兼可适用于淡水和海水养殖水体;该菌株生长和无机三态氮去除影响因素、规律及除氮机制的阐明,可为APB微生物制剂的合理应用提供指导。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分子分型及流行现状

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA)是一类重要的人畜共患病原菌,在全球范围内引起了相当高的发病率和死亡率。运用有效、可靠的分子分型技术对MRSA的分子流行病学特征进行调查分析,将非常有助于MRSA感染性疾病的防控和治疗。本研究对MRSA的多种分子分型技术的原理和方法学评价以及流行现状进行了概述,为MRSA的分子流行病学研究提供了一定的参考依据;本研究指出每种分型方法都有其特有的分型优势,同时又具有分型限制性。在对MRSA菌株进行分型分析时,应该根据现实需要选择多种分型方法对菌株进行多方位研究,保证分型结果的可靠性,为MRSA的分子流行病学分析提供更加准确详实的依据。     

高温杀菌对预浸泡豆杆的杀菌效果及品质影响

本研究以预浸泡豆杆为研究对象,研究高温杀菌对预浸泡豆杆中微生物的杀灭效果及其品质的影响,以期获得具有良好感官品质和理化品质的产品。结果表明:当温度≥105℃和时间≥10 min时,样品的菌落总数由初始的8.72×108cfu/g减少到50 cfu/g以内,样品的大肠菌群从1.6×105MPN/g减少到3 MPN/g以内,致病菌均未检出。杀菌温度和杀菌时间对预浸泡豆杆中脂肪含量、pH、弹性影响差异不显著(p>0.05),对水分含量、蛋白质、色差、硬度和咀嚼性影响显著(p<0.05),综合微生物、理化指标、色泽、质构的变化结果,经105℃、15 min和110℃、10 min处理后的预浸泡豆杆既能满足产品卫生要求也可以较好的保留产品原有的品质。     

熊去氧胆酸联用思美泰对妊娠期肝内胆汁淤积症重症患者瘙痒程度、妊娠结局及肝功能的影响

目的:探讨熊去氧胆酸联用思美泰对妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)重症患者瘙痒程度、妊娠结局及肝功能的影响。方法:选取2016年6月到2017年12月期间在我院接受治疗的ICP重症患者76例,根据随机数字表法将患者均分为研究组(n=38)和对照组(n=38)。对照组采用熊去氧胆酸进行治疗,研究组采用熊去氧胆酸联用思美泰进行治疗。比较两组患者治疗前、治疗7d后的Ribaha皮肤瘙痒程度评分、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆汁酸(TBA)、血清总胆红素(TB)的水平,比较两组患者的妊娠结局。结果:治疗7d后两组患者的瘙痒程度评分均明显降低,且研究组低于对照组(P0.05)。治疗7d后两组患者的AST、ALT、TBA、TB水平均明显降低,且研究组患者的AST、ALT、TBA、TB水平低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。两组患者的新生儿窒息发生率和新生儿体质量比较无统计学差异(P0.05),研究组患者早产、胎儿窘迫、羊水胎粪污染的发生率低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:熊去氧胆酸联用思美泰可有效缓解ICP重症患者的瘙痒程度,改善肝功能和妊娠结局,临床疗效显著,具有积极的临床意义。     

右美托咪定对低血红蛋白全麻患者脑氧饱和度及术后认知功能的影响*

目的:探讨右美托咪定对低血红蛋白全麻患者脑氧饱和度及术后认知功能的影响。方法:选取择期在全麻行开腹妇科手术、血红蛋白8～9 g/dl的患者30例,ASA分级Ⅰ～Ⅱ级,将其随机分成两组:生理盐水组(N组)和右美托咪啶组(D组),每组15例。两组麻醉诱导后,均行七氟醚复合瑞芬太尼静吸复合麻醉维持。D组在麻醉诱导前经15 min静脉输注右美托咪定0.5μg/kg,继之以0.3μg·kg~(-1)·h~(-1)的速率输注至术毕,N组给予等容量生理盐水。分别于入室时(T_0)、吸氧后3 min(T_1)、手术开始即刻(T_2)、手术开始后10 min(T_3)、20 min(T_4)、30 min (T_5)、手术结束即刻(T_6)以及患者苏醒拔管后5 min(T_7)记录平均动脉压(Mean Arterial Pressure,MAP)、心率(Heart Rate,HR)、血氧饱和度(Percutaneous Oxygen Saturation,SpO_2)、呼吸末二氧化碳分压(End-Tidal Carbon DioxidePartial Pressure,PETCO_2)、脑氧饱和度(Regional Cerebral Saturation Of Oxygenation,rSO_2)、脑电双频指数(Bispectral Index,BIS)以及腋温。并于术前1 d、术后1 d以及术后3 d,记录蒙特利尔认知评估量表(Montreal Cognitive Assessment,MoCA)数值以及术后认知功能障碍(Postoperative Cognitive Dysfunction,POCD)的发生率。结果:与N组比较,D组在T_2～T_6时的rSO_2升高,HR降低(P0.05),两组各时点MAP、SpO_2、PETCO_2、BIS以及腋温比较差异无统计学意义(P0.05)。与N组比较,D组术后1天、术后3天MoCA评分均显著升高,且术后认知功能障碍的发生率明显降低(P0.05)。结论:右美托咪定能够提高低血红蛋白患者的脑氧饱和度,改善患者脑氧供需平衡,降低术后认知功能障碍的发生率。     

氢化泼尼松联合泵注甲氧明预防老年患者髋关节置换术骨水泥反应的临床效果观察

目的:观察氢化泼尼松联合泵注甲氧明预防老年患者髋关节置换术骨水泥反应的临床效果。方法:将腰硬联合麻醉下行髋关节置换术的60例老年患者随机分为观察组(A组)与对照组(B组),观察组在骨水泥植入前静脉给予氢化泼尼松0.5 mg/kg,并以3μg·kg-1·min-1持续泵注甲氧明,对照组在相同时点给予地塞米松0.1 mg/kg。记录和比较两组患者骨水泥植入前(T0)、植入时(T1)、植入后3分钟(T2)、植入后5分钟(T3)、植入后10分钟(T4)及植入后30分钟(T5)时的动脉收缩压(SBP)、平均动脉压(MAP)、心率(HR)、血氧饱和度(SPO_2)及中心静脉压(CVP)、动脉血PH值、动脉氧分压(PO_2)、动脉二氧化碳分压(PCO_2)及血乳酸(Lac)水平的变化。结果:与T0时比较,对照组T2、T3时SBP、MAP及PO_2明显下降,HR显著上升,而同时点观察组SBP、MAP及PO_2较对照组明显升高,HR较对照组显著降低(P0.05),观察组各时点SBP、MAP及HR比较差异无统计学意义(P0.05)。与T0时比较,对照组T3、T4时血清Lac水平显著升高(P0.05),同时点观察组与之比较明显降低(P0.05)。观察组各时点pH、PO_2、Lac及PCO_2均无明显变化(P0.05)。结论:老年患者行髋关节置换术在骨水泥植入前预防性给予氢化泼尼松及泵注甲氧明能使患者血流动力学平稳,改善机体微循环及组织氧供。     

活性氧诱导细胞凋亡

细胞凋亡是细胞主动的衰老和死亡方式。细胞凋亡过程极其复杂,其生化机制还不十分清楚。用活性氧如H_2O_2、ONOO及脂质过氧化物等可直接诱导某些细胞发生凋亡,抗氧化剂对细胞凋亡有抑制作用。细胞内产生活性氧的部位主要是线粒体电子传递链、黄嘌呤—黄嘌呤氧化酶途径、磷脂酶A_2激活的花生四烯酸代谢途径及精氨酸-NO合成酶途径。外源性活性氧或通过内源性活性氧的生成,导致细胞内氧化还原状态的失衡,诱导某些基因的表达,引起凋亡。     

白腐真菌Trametes sp. SQ01漆酶的新功能:转化2-羟基-6氧-6-苯基-2,4-己二烯酸

【目的】利用白腐真菌Trametes sp.SQ01漆酶转化2-羟基-6氧-6-苯基-2,4-己二烯酸(HOPDAs),可以帮助我们进一步了解漆酶新的催化特性及解决多氯联苯降解过程中HOPDAs的积累问题。【方法】利用紫外可见光谱分析法,研究了漆酶对8种不同取代基的HOPDAs的转化情况,并对漆酶的稳态动力学参数进行了测定。【结果】漆酶可以在没有任何中介物的条件下催化HOPDAs,并生成无色的物质,尤其是漆酶可以催化3,8,11-3Cl HOPDA,而这一物质几乎不能被BphD和Rhodococcus sp.R04转化。稳态动力学分析表明,在5种HOPDAs中,10-Cl HOPDA是漆酶的最适底物,其Km与HOPDA和8-Cl HOPDA相近。尽管3,10-2F HOPDA并不是漆酶的最适底物(Km=17.02μmol/L),但是它的转化效率(kcat/Km)是最高的。【结论】漆酶可以有效转化多种HOPDAs,这为多氯联苯的降解提供一种新的思路。     

火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶基因克隆、表达纯化和酶学性质研究

【目的】在大肠杆菌中表达火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶,纯化得到重组火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶,在此基础上系统研究火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶的酶学特征。【方法】构建8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶重组表达质粒,将重组质粒转化Escherichia coli Rosetta(DE3),利用IPTG诱导表达重组蛋白,通过Ni2+亲和层析柱纯化重组蛋白;最后利用含8-氧鸟嘌呤损伤的寡核苷酸作为底物,测定8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶的酶学性质。【结果】在大肠杆菌中成功诱导表达了重组火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶,经Ni2+亲和纯化后蛋白纯度大于95%。在体外鉴定了重组火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶的酶学性质。结果表明重组火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶可以切除DNA中的8-氧鸟嘌呤(8-Oxo-G,GO)损伤碱基,并且具有AP裂解酶活性。重组火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶催化反应的最适pH值和温度分别是pH 8.5和55°C。除Zn2+对火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶的酶促反应有明显的抑制作用外,实验中测定的其它二价离子(Mn2+,Mg2+,Ca2+,Ni2+,Co2+,Cu2+)对其没有明显的影响。离子强度在50-100 mmol/L范围内对其酶促反应影响不大,超过100 mmol/L时有明显的抑制作用。与8-氧鸟嘌呤互补的碱基差异对火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶切除8-氧鸟嘌呤损伤的效率影响不大;但与单链DNA相比,双链DNA是优选底物,切割效率如下:GO/C≈GO/G≈GO/T≈GO/AGO/-。【结论】在大肠杆菌中成功表达,并Ni2+亲和纯化了火球菌8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶,生化研究表明制备的重组蛋白具有8-氧鸟嘌呤DNA糖苷酶活性,可能负责切除火球菌基因组DNA中的8-氧鸟嘌呤损伤。