Affinity chromatography—dependent selection （ACDS） of genomic DNA fragments bound specifically to bacterial synthesized Myc／Myn proteins

This paper describes an approach to seek for mouse c-Myc/Myn proteins-bound specific sequences among genomic DNA.cDNA fragment of myn gene was obtained through RT-PCR technique from RNA of NIH3T3 cells.DNA fragments encoding BR/HLH/LZ structure of Myc and Myn proteins were cloned in frame into pGEX-2T vector respectively.Fusion GST-Myc and GST-Myn synthesized in E.coli hosts showed affinity to CACGTG E-box DNA and subsequently interacted with genomic fragments prepared through whole-genome-PCR.A PCR-assisted procedure which combines protein-DNA interaction and affinity chromatography was designed to enrich Myc/Myn bound DNA.At least two genomic DNA fragments obtained exhibit specifical binding capacity to Myc/Myn complex but not to GST alone.Significance of the work and of the technique itself as well asidentification of the DNAs are discussed.     

受体丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶

近几年证实有几种受体具有丝氨酸／苏氨酸激酶活性,它们都为单一的跨膜蛋白,胞外部位较小,胞内含有公认的丝氨酸／苏氨酸激酶的共同序列,为一类新发现的受体型激酶,TGF－β受体I,II型为典型的受体丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶,它们在传递胞外信息时可能要比受体酷氨酸激酶复杂,需要几种受体共同作用才能完成。     

毛喉萜对人胃癌细胞BGC－823中蛋白激酶C及其亚类的影响

以人胃癌细胞ＢＧＣ－８２３为模型,研究了毛喉萜（ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ）对胃癌细胞中蛋白激酶Ｃ活性及其亚类基因表达的作用,同时也观察了毛喉萜对癌基因ｃ－ｊｕｎ及抑癌基因ｐ５３表达的影响．结果表明,２×１０~（－５）ｍｏｌ／Ｌ毛喉萜处理ＢＧＣ－８２３细胞７２ｈ,细胞质、膜和细胞核ＰＫＣ活性下降,ＰＫＣ亚类β,γ基因表达被抑制,癌基因ｃ－ｊｕｎ的表达也明显降低,而抑癌基因ｐ５３表达升高,上述变化可能是毛喉萜抑制胃癌细胞增殖等生理效应的重要分子事件。     

钙离子和蛋白激酶C对大鼠缺血海马脑片谷氨酸堆积的影响

采用大鼠海马脑片体外缺血模型观察钙离子和蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）对神经元胞外谷氨酸（ＧＬＵ）堆积的影响,结果显示：海马脑片在体外“缺血”１０ｍｉｎ,ＧＬＵ在胞外的浓度增加４倍（从３２±４升高到１１３±１０ｐｍｏｌ／（ｍｉｎ．ｍｇＰｒ）．ｎ＝６）．Ｎ型钙通道拮抗剂蝙蝠葛苏林碱（ＤＳＬ）或无钙培养液均能有效抑制这种浓度的升高（Ｐ＜０．０１）．提示缺血１０ｍｉｎ引发的ＧＬＵ浓度升高是受Ｃａ２＋内流调控的．当脑片在缺血状况下孵育３０ｍｉｎ,ＤＳＬ只部分抑制这种ＧＬＵ堆积,而无钙培养液则无影响,但这额外的ＧＬＵ堆积可被ＰＫＣ抑制剂Ｈ－７完全阻断,而被ＰＫＣ激动剂ＰＤＢ所加强;且不受钙调蛋白抑制剂Ｃａｌｍｄａｚｏｌｉｕｍ和８－溴－ｃＡＭＰ影响．提示缺血３０ｍｉｎ,胞外ＧＬＵ的堆积受钙内流和ＰＫＣ双重调控。     

大鼠大脑皮层中钙调神经磷酸酶活力的时空变化

以ＰＮＰＰ为底物测定了超离心制备的大鼠出生后早期和成年大脑皮层亚细胞各组分中钙调神经磷酸酶的活力。实验结果表明：（ｌ）钙调神经磷酸酶活力广泛地存在于胞液和突触部分,并且各亚细胞组分有明显差异。成年大鼠大脑皮层中ＣａＮ活力相对最高水平是在突触体,突触质,胞液,重的和轻的突触膜部分。（２）大鼠大脑皮层突触体中ＣａＮ活力在出生后第２周和第３周出现高峰的平台期,这与突触发生的高峰期是一致的。在胞液和重的突触膜中ＣａＮ活力最高水平是在出生后的第７ｄ,而在突触质和轻的突触膜中是在第２０ｄ。总之,这些发现证实,在脑发育期间,ＣａＮ活力是依照区域和时间性控制的,提示ＣａＮ可能参与了突触功能作用。     

蛋白激酶C在血小板聚集中的作用

利用￣（３２）Ｐ－ＮａＨ２ＰＯ４标记猪血小板,以蛋白激酶Ｃ的４０ｋＤ底物为蛋白激活的标志．用血小板激动剂在聚集浓度范围内处理血小板,结果表明,除了不能使猪血小板聚集的肾上腺素外,凝血酶等激动剂都使血小板４０ｋＤ底物蛋白磷酸化明显增加,同时３８ｋＤ,２６ｋＤ蛋白质磷酸化也明显增加,且４０ｋＤ底物磷酸化与血小板聚集有平行增加关系．蛋白激酶Ｃ在血小板聚集中可能起着重要的调节作用。     

乌龟胚胎发育过程中钙,镁代谢的研究

本文对乌龟胚胎发育过程中钙,镁代谢特征进行了研究。结果表明：卵壳为乌龟胚胎发育提供５４．０７％的钙,１２．２６％的镁：其余的４５．９３％钙,８７．７４％的镁由 卵内容物（卵黄＋卵清）提供。     

低温逆境中黄瓜幼苗细胞内钙离子水平变化的细胞化学研究

采用改进的焦锑酸钙沉淀的细胞化学方法,探讨了Ｃａ＾２＋在黄瓜幼苗细胞中超微结构定位分布及在低温逆境条件下Ｃａ＾２＋水平的动态。结果表明：在适宜温度下生长的黄瓜幼苗,其细胞中Ｃａ＾２＋主要定位于液泡及细胞间隙内,说明液泡是植物细胞内的主要钙库,并显示质外体中存在大量的Ｃａ＾２＋分布。当黄瓜幼苗在１℃下冷胁迫２８ｈ后,质膜内侧钙沉淀颗粒明显增加,同时观察到液泡内Ｃａ＾２＋分布变得比较集中,并趋向于液泡     

两种钙藻热解产出的气态和液态烃类

在２００℃至４００℃高温和还原条件下分别对仙掌藻和乳节藻两种钙质藻类进行热模拟降解实验,分离获得气态和液态烃类化合物。随着热解温度升高,两种钙藻产烃气量明显上升,其中甲烷与乙烷气的增加最多,同时两种钙藻产出的乙烷与乙烯比值都有规律地增加,但仙掌藻产烃气量高于乳节藻。这表明钙质藻类可能是天然气的一种重要母质来源。虽然这两种钙藻随温度增加热解产出的可溶有机质及族组分的变化规律不明显,但它们的正烷烃分布特征具有相类似的变化。未经热解时它们都以Ｃ１７为主峰的低碳数正烷烃占优势;当热解温度从２００℃增加到４００℃时,它们都又表现出以Ｃ２５或Ｃ２３为主峰的较高碳数正烷烃占优势的分布特征。这与富含钙藻化石的沉积岩样品中正烷烃的分布特征相一致,说明Ｃ２５或Ｃ２３为主峰的较高碳数正烷烃占优势的分布特征可能是钙藻热解有机质的一种判识标志．     

丹皮酚对NG108—15细胞电压门控K^＋,Na^＋,Ca^2＋流的抑制

利用克隆系ＮＧ１０８－１５细胞在膜片箝全细胞记录下,观察了丹皮酚对钾,钠和钙流的作用,结果表明,ＰＡ对延迟整流钾电流、钠电流、Ｔ型和Ｌ型钙电流均有明显的抑制效应,作用迅速,呈量－效关系,有相当好的可逆性。