活性炭色谱法分离苯丙氨酸、酪氨酸

根据活性炭对苯丙氨酸、酪氨酸的选择性吸附特性和二者在活性炭吸附中的差异,通过活性炭吸附与氨水、乙醇二步解吸的活性炭色谱法从多种氨基酸的猪血粉水解液、棉籽蛋白水解液中成功地分离提取了苯丙氨酸、酪氨酸。活性炭色谱法工艺对提取法、发酵法生产苯丙氨酸具有实用价值。还为联合离子交换色谱法分离水解液中其他氨基酸改善了物料条件,从而较好地解决了树脂毒化问题、氨基酸交叉重选问题,并使洗脱溶液中杂质少、纯度高,易于结晶。     

正常人及肝细胞癌患者肝脏及血浆中丙酮酸激酶同工酶免疫测定

 分别从人肝及鼠肝中高度纯化L型和M_1型丙酮酸激酶(Pyk),制备相应的免抗血清。从抗血清中纯化IgG并水解成F(ab')_2,进而还原成Fab',后者与辣根过氧物酶(HRP)交联成Fab'-HRP,再利用这两种复合物建立了各自的高灵敏夹心ELISA来免疫定量L及M_2型(与鼠M_1-Pyk有交叉免疫)Pyk,结果发现:正常人肝中95％的Pyk为L型,M_2-Pyk仅占5％,而肝细胞癌中L-Pyk降至正常肝的3.5％,M_2-Pyk却增至正常的14.6倍,以致M_2-Pyk占总量的95.5％。免疫组化研究进一步证实定量的结果,正常人肝L-Pyk染色呈强阳性。M_2-Pyk染色较弱,而肝细胞癌恰好相反,L-Pyk染色明显减退,而M_2-Pyk不仅癌组织染色很深,癌周组织也明显深于正常,而且愈近癌巢,染色愈深。测定血浆Pyk,发现正常人L-Pyk占89.9％,M-Pyk(以M_2计)仅占10.1％。肝细胞癌患者血浆L-Pyk略见降低,为正常值的79.6％,p值在0.02～0.05之间,但血浆M型Pyk明显升高至正常的4.59倍,占Pyk总量的39.6％,并证明主要来源于肝癌组织中的M_2,故M_2-Pyk有可能成为肝细胞癌诊断的新指标。     

小肠平滑肌胰岛素受体的特征及其蛋白激酶活性

 本实验对狗小肠平滑肌中胰岛素受体的结构和特征进行了分析研究。通过麦胚凝集素琼脂糖和两次Sepharose-CL-6B凝胶层析从平滑肌中纯化胰岛素受体,达到电泳纯。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳证明胰岛素受体是由两个亚基组成的,分子量分别为135kD和90kD。磷酸化实验证明平滑肌胰岛素受体具有胰岛素依赖性蛋白激酶活性,能催化自身的β亚基磷酸化和底物的磷酸化。Scatchard分析表明胰岛素和受体的结合呈(?)协同效应,最大结合率为13μg胰岛素/mg蛋白质。     

酪氨酸对大鼠子宫胞浆雌,孕激素受体的影响

采用放射受体分析法,测定了动情周期不同阶段及去卵巢大鼠子宫胞浆雌二醇和孕酮受体含量,并观察了子宫腔内注射酪、丝、苏三种氨基酸对子宫胞浆雌。醇、孕酮受体含量的影响。结果表明：（１）Ｌ－酪氨酸对动情前期、动情期、间情期大鼠子宫胞浆雌二醇和孕酮受体都具有明显的降低作用。（２）Ｌ－酪氨酸也降低去卵巢大鼠子宫胞浆雌二醇和孕酮含量,即这一作用不是通过影响卵巢激素分泌实现的。（３）Ｌ－苏氨酸仅可降低动情期和间情期大鼠子宫胞浆孕酮受体含量,而对相应周期雌二醇受体没有明显作用。（４）Ｌ－丝氨酸和Ｌ－苏氨酸对去卵巢大鼠子宫胞浆雌二醇和孕酮受体均无影响。     

CDKs功能的分子结构基础

真核细胞的细胞周期主要由一些相关联的Ser/Thr蛋白激酶所调控,它们都包含有一个催化亚单位CDK(cyclin-dependent kinase)和一个调节亚单位周期蛋白(cyclin)。细胞周期中的重要事件,如细胞生长,DNA复制以及细胞分裂都分别受不同的cyclin-CDK复合物     

HL—60细胞诱导分化过程中蛋白质酪氨酸磷酸化水平的改变

对ＲＡ、ＨＨＴ和ＷＢ６５２诱导ＨＬ－６０细胞过程中,细胞浆和膜溶脱部分的蛋白质酪氨酸磷酸化水平变化进行了对比研究。结果发现,在胞浆部分主要有四种含有Ｐ－Ｔｙｒ的蛋白,而且８０ｋＤ蛋白酪氨酸磷酸化水平随着诱导发生变化。诱导前后内源性蛋白上Ｐ－Ｔｙｒ百分含量也发生了改变。     

PKC,PKA和TPK在血小板激活中的作用

利用＾３２Ｐ－ＮａＨ２ＰＯ４标记猪血小板,然后,以ＰＭＡ,凝血酶,ＰＧＥ１腺苷等处理,结果表明,随着ＰＭＡ激活ＰＫＣ,血小板发生聚集,３５μｍｏｌ／ＬＰＧＥ１或１ｍｍｏｌ／ＬｄｂｃＡＭＰ不能抑制５０ｎｍｏｌ／ＬＰＭＡ诱导的血小板聚集,腺苷却能抑制ＰＭＡ诱导的血小板聚集（ＥＣ５０＝０．１ｍｍｏｌ／Ｌ,ｄｂ－ｃＡＭＰ,腺苷都不能抑制１００ｎｍｏｌ／ＬＰＭＡ诱导的４０ｋＤ蛋白磷酸化,ＰＫＡ激活不能抑制Ｐ     

磷脂酰肌醇—4—激酶的免疫分析

在化猪肝微粒体磷脂酰肌醇－４－激酶（ＰＩ－４－Ｋ）的基础上,制备该酶的免疫血清,提纯ＩｇＧ,并建立了ＰＩ４－Ｋ的ＥＬＩＳＡ,进行不同组织中ＰＩ４－Ｋ的免疫沉淀分析和免疫定量。结果证明：猪肝微粒体ＰＩ４－Ｋ的抗血清或抗体ＩｇＧ可沉淀猪肾和猪肺的微粒膜,猪肝细胞膜和人中性粒细胞细胞膜ＴｒｉｔｏｎＸ－１００增溶液（ＴＸＳＭ）中的ＰＩ４－Ｋ表明不同组织,不同亚细胞和不同种属的ＰＩ４－Ｋ有相似的抗原性。猪肝