纳米羟基磷灰石表面修饰及其转染细胞的研究

目的:探讨羟基磷灰石-聚乙烯亚胺(nHA-PEI 10KD)纳米颗粒的癌细胞基因转染效率.方法:通过透射电子显微镜(TEM)观察HA-PEI(10KD)纳米颗粒的形态及粒径,Zeta电位仪测定nHA-PEI和HA在酸、碱、中性环境中的电位,用琼脂糖凝胶电泳检测nHAP-PEI(10KD)与DNA结合的能力,MTT比色法检测nHAP-PEI(10KD)对nepG2细胞的毒性,选用增强型绿色荧光蛋白质粒pEGFP1与nHA-PEI结合后,分别转染真核细胞HepG2、Hela、SW620,计算其转染率.结果:nHA-PEI(10KD)分散程度好,粒径60-80nm,在PH7.2时,Zeta电位42.87mV,能转染实验中的细胞,转然效果最好的是HepG2细胞,其次Hela、SW620,转染率高于PEI(10KD)、nHA,但低于脂质体.结论:通过阳离子PEI修饰HA,可有效将增强型绿色荧光蛋白质粒转入HepG2细胞,HA-PEI(10KD)纳米颗粒复合物有望成为基因传递的有效栽体.     

基于代谢组学的南方菟丝子和金灯藤质量比较研究

目的:比较研究南方菟丝子和金灯藤的化学成分,对差异性成分进行定量.方法:采用基于UPLC-QTOF-MS/MS的代谢组学方法对南方菟丝子和金灯藤中小分子化学轮廓进行表征,利用多变量数据统计方法发现各自的特征性成分,整合HPLC-UV方法对45批南方菟丝子和金灯藤商品药材差异性成分进行定量分析.结果:南方菟丝子和金灯藤化...     

A light initiated chemiluminescent immunoassay for procalcitonin

Human procalcitonin （PCT） is the prohormone form of calcitonin which was first identified in 1981 . It is a glycopmtein composed of 116 amino acids without hormonal activity and is mainly produced by parafollicular cells （C cells） in the thyroid gland. PCT is enzymatically cleaved into lower molecular weight peptides, including the N-terminal with 57 amino acids, C-terminal with 21 amino acids, and calcitonin with 32 amino acids. The concentration of PCT is very low in normal human plasma, but is increased in the plasma of patients with sepsis and infection . Furthermore, PCT is mainly induced during severe systemic inflammation caused by bacterial infections, but not by non-bacterial infection. Therefore, PCT is considered as an important marker of serious systemic infection and septicemia.     

不同酯化度和分子量的果胶解酒效果的比较研究

为研究不同酯化度和分子量的果胶在解酒方面的效果差异,取ICR小鼠160只,按果胶种类进行分组,通过解酒和防醉酒实验观察不同分子量和酯化度果胶的解酒效果差异。结果发现解酒效果依次为:低酯低分子果胶中剂量组低酯低分子果胶低剂量组低酯高分子果胶高酯高分子果胶组海王金樽组半乳糖醛酸组=葡萄糖组生理盐水组;而防醉酒效果依次为:低酯高分子果胶中剂量组海王金樽组低酯高分子果胶低剂量组葡萄糖组=低酯低分子果胶高酯高分子果胶组=半乳糖醛酸组生理盐水组。实验结果表明果胶的解酒和抗醉酒效果与其酯化度和分子量相关,低酯高分子果胶具有更好的解酒和抗醉酒效果,且其抗醉酒效果呈现出量效关系。     

白芸豆球蛋白的提取及其氨基酸组成研究北大核心CSCD

本文研究了白芸豆球蛋白的提取工艺、分子量和氨基酸组成。结果表明,白芸豆球蛋白最佳提取工艺为NaCl浓度2.5 g/100 mL,料液比1∶22(g/mL),提取温度55℃,提取时间5 h,在此条件下的球蛋白提取率为31.46%;用60%的硫酸铵,在4℃下盐析1 h,球蛋白的盐析得率为73.55%;球蛋白的SDS-PAGE电泳图谱中有6条蛋白亚基条带,其相对分子质量分别为97.52、47.35、33.84、29.62、26.28和21.99 ku,其中有5条与白芸豆分离蛋白的亚基条带相吻合;球蛋白的氨基酸组成种类齐全,必需氨基酸含量接近FAO/WHO推荐模式,是一种优质植物蛋白质资源。     

蛋白质沉淀剂对棉铃虫谷胱甘肽S-转移酶的部分纯化

通过用聚乙烯亚胺（PEI）、硫酸铵、聚乙二醇（PEG）沉淀技术和GSH-Sepharose 4B亲和柱对棉铃虫Helicoverpa armigera (Hübner)幼虫中谷胱甘肽S-转移酶进行了部分纯化研究。结果表明PEG10000和PEG20000的纯化效果优于硫酸铵的沉淀效果。通过PEI沉淀去核酸后,再用硫酸铵沉淀,中肠和脂肪体GST活性分布在70%～75％和60%～65％沉淀段,比活力分别为1 081.49和596.41 nmol/(min·mg),纯化倍数分别为2.53和2.2。在6种PEG中,PEG10000和PEG20000的纯化效果较好。在中肠和脂肪体中PEG10000沉淀的GST活性峰分别在40%～45％和30%～40％,GST比活力分别为795.11和1 080.18 nmol/(min·mg),纯化倍数分别是2.4和3.97。PEG20000沉淀中肠和脂肪体GST的活性峰分别在25%～40％和25%～45％,比活力分别是767.57和945.96 nmol/(min·mg),纯化倍数分别是2.81和3.05。用GSH-Sepharose 4B纯化中肠GST,GST比活力达到5 888.44 nmol/(min·mg),纯化倍数达到107.38。     

枯草杆菌NX-2聚谷氨酸解聚酶的克隆表达及其降解性质研究

利用PCR技术从γ-聚谷氨酸产生菌Bacillus subtilis NX-2的基因组DNA上扩增出聚谷氨酸内切解聚酶基因(ywtD),克隆后测序,对该基因编码区进行了序列分析,比对结果表明本文扩增的ywtD基因编码与文献报道的序列相似性为99.0%,碱基的差异均表现为碱基取代,仅有一个碱基取代导致编码氨基酸的变化,即第349位密码子由GCC变为GTC。将ywtD基因克隆入表达载体pET15b中,该载体转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经0.5mmol/L IPTG诱导,外源解聚酶蛋白获得高效表达。利用酶的初提液对聚谷氨酸进行降解,结果显示经72小时解聚酶作用后,γ-PGA分子量从700kDa降到20kDa,此后随作用时间的延长,聚谷氨酸分子量趋于定值。     

新一代医用刚质聚合物外科植入动物实验研究

目的:研究新一代医用刚质聚合物的植入动物后的变化情况,方法:根据美国材料协会(ASTM)标准中有关用于外科植入的聚合物材料相容性评价实施标准,对新一代医用刚质聚合物进行外科植入动物试验。结果:试验样品和对照样品周围组织出现的变化同步。结果:新一代刚质聚合物与已在临床上应用的聚合物具有相同的生物相容性。同样可作为人工材料应用于临床。     

SDS-PAGE法测定His-tag融合蛋白分子量产生偏差的原因

Ｈｉｓｔａｇ／ＮｉＮＴＡ系统是新发展起来的一个亲和纯化重组蛋白的有用工具,现常用于基因编码产物的特性研究中。ＳＤＳＰＡＧＥ是实验室测定蛋白质分子量通常采用的方法,而许多实验室用此方法检测Ｈｉｓｔａｇ融合蛋白时却常发现测得的分子量偏大,产生偏差的原因尚未阐明。为弄清这一问题,本实验室在研究一个Ｈｉｓｔａｇ融合蛋白Ｐ７３Ｈｉｓ时,首先用ＳＤＳＰＡＧＥ法测得其分子量确实比理论计算值大,然后对其进行Ｃ末端氨基酸顺序测定、电喷雾质谱分析,结果证实其实际分子量与理论值一致。酶切去除包括Ｈｉｓｔａｇ在内的部分肽段使ＳＤＳＰＡＧＥ法测量蛋白分子量的偏差大大降低,证实Ｈｉｓｔａｇ确实是造成偏差的原因之一。推测由于Ｈｉｓｔａｇ中的碱性氨基酸的作用造成蛋白在ＳＤＳＰＡＧＥ中迁移变慢,而导致偏差。这一现象值得引起有关研究者的注意。     

乌拉尔图小麦(Triticum urartu)1Ay高分子量麦谷蛋白亚基基因编码区的克隆与鉴定

应用简并性引物和基因组PCR反应从乌拉尔图小麦(Triticum urartu)不同种质材料中获得并测定了表达型和沉默型1Ay高分子量麦谷蛋白亚基基因全长编码区的基因组DNA序列.表达型1Ay基因编码区的序列与前人已发表的y型高分子量麦谷蛋白亚基基因编码区的序列高度同源,由其推导的1Ay亚基的一级结构与已知的高分子量麦谷蛋白亚基相似.在细菌细胞中,表达型1Ay基因编码区的克隆序列可经诱导而产生1Ay蛋白,该蛋白与种子中1Ay亚基在电泳迁移率和抗原性上类似,表明所克隆的序列真实地代表了表达型1Ay基因的全长编码区.但是,本研究所克隆的沉默型1Av基因的编码区序列因含有3个提前终止子而不能翻译成完整的1Ay蛋白.讨论了表达型1Ay基因在小麦籽粒加工品质改良中的潜在利用价值以及lAy基因沉默的机制.