马抗SARS-CoV免疫球蛋白制备的研究

用纯化灭活的SARS—CoV抗原免疫马匹,采集血浆加入S／D灭活／去除病毒,用硫酸铵盐析沉淀提取抗SARS—CoV IgG,再经胃酶切、柱超滤等工艺制备马抗SARS-CoV免疫球蛋白。研制的马抗SARS—CoV免疫球蛋白制品中和抗体效价达1：6400以上、F(ab’）2纯度在90％以上。建立了高效、稳定、效果好的马抗SARS—CoV免疫球蛋白生产工艺,为SARS的治疗和预防提供了可靠的保证,也为传统抗血清的更新换代提供了技术平台。     

鼠疫菌V抗原基因在大肠杆菌中的克隆及表达

从鼠疫杆菌野毒株总DNA中利用PCR方法扩增出V抗原编码基因,将此基因克隆到大肠杆菌的表达质粒pET42b(+)中,经IPTG诱导后,在大肠杆菌BL21(DE3)细胞中成功地表达出鼠疫菌V抗原蛋白。目的蛋白表达量占菌体总蛋白的32.8%。     

K^＋营养对NaCl胁迫下盐地碱蓬生长及叶片液泡膜V—H^＋—ATP和V—H^＋—PPase活性的影响

对溶液培养的盐地碱蓬（Suaeda salsa L.)幼苗进行不同浓度NaCl胁迫并改变培养液中K^ 浓度,以了解K^ 营养对NaCl胁迫下盐地碱蓬幼苗生长及叶片液泡膜V－H^ -ATPase、V－H^ -PPase活性的影响。提高培养液K^ 浓度可明显增加盐胁迫下碱蓬植株的鲜重、干重,促进盐地碱蓬叶片及根部组织K^ 积累。盐地碱蓬叶片液泡膜V－H^ -ATPase至少由A、B、C、D、E及c亚基组成,其表达量在缺K^ 处理（12μmol/L K^ )下随盐胁迫浓度的增加而减小,而在正常K^ （6mmol/L)培养下则随盐胁迫浓度的增加而增加;盐地碱蓬叶片液泡膜V－H^ -PPase分子量为72kD,在缺K^ 和正常K^ 供应情况下,V－H^ -PPase均有较高表达。V－H^ -ATPase及V－H^ -PPase活性变化与其亚基表达量变化基本成正相关。结果表明：K^ 对盐生植物碱蓬的耐盐性有重要作用,盐胁迫下,K^ 可能参与了V－H^ -ATPase和V－H^ -PPase活性调控。     

膜联蛋白Ⅰ的结构和功能

膜联蛋白Ⅰ(annexin Ⅰ)是annexins蛋白超家族中的一员,是结构相关钙离子依赖的磷脂结合蛋白.具有annexins超家族所共有的中心结构域和承担各自独特功能的N端结构域.通过调控细胞内磷脂囊泡的聚集、炎症反应和磷脂酶A2的活性而参与细胞信号传导、细胞分化和细胞凋亡等细胞重要的生命过程.     

Annexin Ⅱ和Annexin Ⅳ在大肠癌中的表达及其临床意义

目的:探讨Annexin Ⅱ和Annexin Ⅳ在大肠癌中的表达及其临床意义.方法:用免疫组化SP法分别检测Annexin Ⅱ和AnnexinⅣ在60例大肠癌组织中的表达.结果:(1)Annexin Ⅱ和AnnexinⅣ在大肠癌组织中的阳性表达率分别为65%(39/60)和60%(36/60);(2)Annexin Ⅱ和Annexin Ⅳ阳性和阴性病例的平均生存期、五年生存率和中位生存期比较,差异具有显著性(P＜0.05);(3)大肠癌组织中Atmexin Ⅱ和Atmexin Ⅳ的表达一致率为68.33%(41/60),存在显著相关性(P＜0.01);(4)大肠癌不同临床时期(Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ)Annexin Ⅱ和Annexin Ⅳ阳性表达比较,差异具有显著性(P＜0.01).结论:Annexin Ⅱ和Annexin Ⅳ与大肠癌的临床分期和预后有关.     

人膜联蛋白V在大肠杆菌中的表达、纯化与鉴定

目的：构建人膜联蛋白V的原核栽体并诱导其表达。方法：以IPTG诱导His融合人膜联蛋白V的表达,并应用Ni—NTA Superflow纯化。结果：PCR扩增产物碱基数量与目的片段大小一致,插入片段的序列与发表的人膜联蛋白V基因编码序列一致。在IPTG诱导下,重组大肠杆茵DH5a高效表达分子量约36kDa的目的产物。结论：人膜联蛋白V编码序列已被克隆至His融合表达载体pET-28a（＋）上,并在大肠杆菌DH5α中表达：     

抗肿瘤药敏实验中组织标本延时保存的研究

在肿瘤的治疗中临床抗肿瘤药敏试验非常重要,为肿瘤病人化学治疗方案的选择提供个体化的客观依据,加强了化疗针对性,提高了化疗效果.但药敏试验中细胞原代培养对肿瘤组织标本的细胞活力要求较高.     

四磨汤对脾虚便秘小鼠肠道细菌丰度及功能基因的影响

目的探讨四磨汤对脾虚便秘小鼠肠道细菌丰度及功能基因的影响,为其疗效机制提供依据。方法采用番泻叶泄泻、饥饱失常和控制饮食等复合因素建立小鼠脾虚便秘模型,造模成功后,治疗组小鼠分别用四磨汤和枳术汤灌胃,模型组和正常组小鼠用无菌水灌胃。造模结束和治疗结束后分别提取小鼠肠道微生物总DNA,进行16SrDNA V4区测序。结果脾虚便秘造模降低了小鼠肠道细菌丰度,四磨汤治疗后,小鼠肠道细菌丰度整体水平上与模型组比较差异不显著。基于功能基因分析,造模降低了小鼠细胞信号传导、能量代谢、脂质代谢和一些辅酶、维生素代谢等的作用,提高了核苷酸代谢、碳水化合物代谢、氨基酸代谢和酶类等的水平。四磨汤口服液治疗后,小鼠的肠道细菌功能基因碳水化合物代谢、能量代谢、氨基酸代谢、核苷酸代谢、脂质代谢、多糖生物合成、遗传信息复制、翻译和跨膜运输等方面要显著高于其余各组。结论脾虚便秘小鼠降低了肠道细菌能量、糖类和脂质代谢,四磨汤可能通过提高肠道细菌能量和营养物质的代谢,提高遗传信息的复制、转录、翻译和跨膜转运水平来达到治疗脾虚便秘的效果。基于功能基因的角度分析为小鼠肠道细菌的改变提供了依据。     

应用LCM和蛋白质组学技术筛选肺腺癌的差异表达蛋白质

为筛选肺腺癌(lung adenocarcinoma,AdC)发病相关蛋白质,首先采用激光捕获显微切割技术(laser capture microdissection,LCM)分别从AdC组织和正常支气管上皮(normal bronchial epithelium,NBE)组织中切割并收集AdC细胞和NBE细胞,再应用双向凝胶电泳技术(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)分离经LCM收集的细胞蛋白质,通过PDQuest软件分析差异表达的蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定差异表达蛋白质,组织芯片免疫组化方法检测差异蛋白质膜联蛋白A4(annexin A4)在30例AdC组织、配对的癌旁组织和淋巴结转移癌组织中的表达水平。研究结果显示,通过蛋白质组学方法建立了LCM收集的AdC和NBE细胞的2-DE图谱,质谱鉴定得到了33个差异表达蛋白质,其中21个蛋白质在AdC细胞中表达上调,12个蛋白质在AdC细胞中表达下调。组织芯片免疫组化结果显示,与癌旁肺组织相比,annexin A4在AdC组织中的表达水平显著上调,且在AdC淋巴结转移癌组织中的表达明显高于其原发癌组织。上述结果提示annexin A4与AdC的发病及淋巴结转移相关,有望成为诊断AdC及预测AdC转移的分子标志物。     

磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶介导的草酰乙酸回补途径对谷氨酸棒杆菌V1氨基酸代谢的影响

【目的】谷氨酸棒杆菌是工业生产氨基酸的主要菌株,以缬氨酸高产菌株谷氨酸棒杆菌V1为研究对象,探讨磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PCK)介导的草酰乙酸回补途径对菌株生理特性以及主要氨基酸代谢流量的影响。【方法】通过基因工程手段,在谷氨酸棒杆菌V1中过表达pepc(编码PEPC)和pck(编码PCK),比较重组菌与出发菌关键酶活性、发酵特性以及主要氨基酸积累量变化。【结果】构建两株重组菌V1-pepc(强化草酰乙酸回补途径)和V1-pck(弱化草酰乙酸回补途径),重组菌生长均较出发菌延缓,总生物量、葡萄糖和硫酸铵消耗基本不变;过表达pck,PCK活性提高22.8%,丙氨酸、缬氨酸、谷氨酸、精氨酸积累量分别提高了11.8%、17.2%、27.8%和19.5%;过表达pepc,PEPC活性提高27.5%,同时PC活性降低12.9%,天冬氨酸族和谷氨酸族氨基酸的整体流量变化不大,丙氨酸族氨基酸的整体流量降低了14.7%。【结论】丙氨酸族氨基酸受此回补途径影响较大,天冬氨酸族氨基酸受此影响较小。