一种简便有效的菌落原位杂交法

本方法采用国产定量滤纸代替硝酸纤维素膜进行菌落杂交筛选。省去了真空烤膜和预杂交操作。末端标记的寡核苷酸探针杂交所得结果具有较好的特异性和较强的放射活性。     

肿瘤坏死因子的研究进展

<正>肿瘤坏死因子(TNF或TNF-α)的研究进展日新月异,与数年前相比可谓面目一新,当初仅了解TNF的抗肿瘤活性,但后来发现TNF对多种正常细胞具有广泛的生物学活性。其生物学活性不仅与结构类似,结合同一种受体的淋巴毒素(LT或TNF-β)相近,且与结构迥异、结合不同细胞受体的白细胞介素1(IL-1)具有广泛的功能重叠性。 TNF及其分泌调节 TNF由分子量17kd的亚单位构成,依动物种类及分离方法的不同,可为2聚体,3聚体或4聚体,还不清楚多聚体是否为体现生物学活性所必需。人TNF为非糖基化蛋白,而几乎所有动物的TNF都为糖蛋白。 小鼠TNF分子由156个氨酸残基构成。家兔TNF在N端缺2残基,为154个残基。而人TNF由于在第73位插入一组氨酸,由157个氨酸残基构成。     

军团菌致病因子及其DNA诊断

<正>军团菌(Legionella)通过人呼吸道吸入,引起呼吸器官感染。嗜肺性军团菌(L·Pneumophila)的典型症状是肺炎,且多发展成重症肺炎,但是由L·feeleii引起的庞带蒂亚克(pontiac)热并不引起肺炎,表现为皮疹,发热,头痛、关节痛等剧烈全身症状,常疑为病毒性疾病,一般数天即可治愈。 由于对L·feeleii的病原因子尚不完全了解,本文从迄今为止有关嗜肺性军团菌的报导中,就有关病原因子的内容作一介绍。另外,军团菌属自命名以来,在约10年的时间内,共报导了包括亚种在内的27个菌种,这些菌种从外形上无法鉴别,因此,本文后半部分将介绍用DNA进行检测和检定的快速诊断法。     

放线菌结瘤植物根与根瘤中有机氮化物的组分及其上运形式

杨梅、沙棘和赤杨三种放线菌结瘤植物根瘤、根部有机氮化物的组分中,都含有占总有机氮化物50％以上的尿囊酸,说明在它们的根瘤中合成了大量的酰脲;同时,三种植物结瘤植株的茎木质部提取物中也含有大量的尿囊酸,表明根瘤将其合成的酰脲向植物地上部位运送。三种植物的根瘤还将其合成的特定的氨基酸及酰胺向地上部位转运,其中杨梅根瘤将固定的氮素以Asn和Gln的形式输出,而根部则以Arg的形式向上转运;沙棘根瘤以Ash,Gln及Ser,赤杨根瘤以Cit的形式合成并转运固定的氮素;后两种植物的无根瘤植株,以NH_4~+为氮源时,在转运的氨基酸组分中Arg的比例明显提高。     

低、高频电针诱导原癌基因c－fos／c－jun和阿片肽基因表达及其关系的比较研究

本工作对低频（２Ｈｚ）和高频（１００Ｈｚ）电针引起大鼠中枢Ｆｏｓ／Ｊｕｎ表达和三类阿片肽基因表达进行了详细的比较研究,并用针对ｃ－ｆｏｓ／ｃ－ｊｕｎ的反义寡核苷酸（ＯＤＮｓ）对电针引起的Ｆｏｓ／Ｊｕｎ表达进行选择性阻断,然后观察阿片肽基因表达是否受到影响,以确定Ｆｏｓ／Ｊｕｎ复合物在电针引起阿片肽基因表达中的作用。主要结果如下：（１）２Ｈｚ和１００Ｈｚ电针引起脑内不同部位的Ｆｏｓ／Ｊｕｎ表达;（２）２Ｈｚ电针使前脑啡肽原（ＰＰＥ）ｍＲＮＡ表达大幅度增高,１００Ｈｚ电针也能增加ＰＰＥｍＲＮＡ的转录,但不如２Ｈｚ电针的作用显著;但１００Ｈｚ电针能使某些脑区的前强啡肽原（ＰＰＤ）基因转录加速,而２Ｈｚ电针没有这一作用;（３）用ｃ－ｆｏｓ／ｃ－ｊｕｎ反义ＯＤＮｓ特异地阻断Ｆｏｓ／Ｊｕｎ表达后,电针引起的ＰＰＤ转录加速被明显阻断,而ＰＰＥ表达不受影响。提示Ｆｏｓ／Ｊｕｎ是电针引起ＰＰＤ（而非ＰＰＥ）基因表达的转录因子。     

大豆结瘤突变体成分的初步分析及其对硝酸还原酶活性和结瘤的影响

超结瘤大豆（Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍ ａｘ （Ｌ．） Ｍｅｒｒ．） ｎｔｓ ３８２ 和不结瘤大豆Ｎｏｄ ４９ 的叶和根组织水提取物经Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５ 过滤、洗脱,再根据洗脱物对硝酸还原酶（ＮＲ）活性的影响可划分为４ 个组分（ｆｒａｃｔｉｏｎ）样品,即ｎｔｓ ３８２（Ｎｏｄ ４９） Ｆ１、ｎｔｓ ３８２（Ｎｏｄ ４９） Ｆ２、ｎｔｓ ３８２（Ｎｏｄ ４９） Ｆ３ 和ｎｔｓ ３８２（Ｎｏｄ ４９） Ｆ４。其中, ｎｔｓ３８２ Ｆ２ 和Ｆ４ 抑制ＮＲ 活性作用在接种ＵＳＤＡ１１０ 后明显下降, 但接种的ｎｔｓ ３８２ Ｆ２ 却能提高大豆Ｂｒａｇｇ 的结瘤数达一倍, 而接种的ｎｔｓ ３８２ Ｆ３ 和Ｆ４ 的作用不明显。ＮＲ 活性抑制因子不是刺激结瘤的因子, 刺激结瘤的因子主要分布在接种的ｎｔｓ３８２ Ｆ２ 部分中。与这一现象相反, Ｎｏｄ ４９ Ｆ２ 和Ｆ４ 抑制ＮＲ活性的作用在接种后更强, 且也抑制大豆ｎｔｓ ３８２ 的结瘤, 其中Ｎｏｄ ４９ Ｆ４ 抑制结瘤的作用基本不能逆转。抑制结瘤因子主要分布在接过种的Ｎｏｄ ４９ Ｆ４ 部分中     

重组人GM—CSF基因在昆虫细胞中的表达

利用苜蓿夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＮＰＶ）带β－Ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ基因标记的非融合蛋白基因转移载体ｐＢｌｕｅＢａｃ将人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ｈＧＭ－ＣＳＦ）基因成功地插入病毒ＡｃＮＰＶ的基因组中．ｈＧＭ－ＣＳＦ基因在感染重组病毒的草地夜蛾（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）培养细胞Ｓｆ９中得到表达,感染后的Ｓｆ９细胞培养液能刺激人骨髓细胞在体外形成典型的集落,表达水平可达２．７×１０５５ＣＦＵ／ｍｌ。以ｈＧＭ－ＣＳＦ单抗所作的ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｔｉｎｇ表明,表达的ｈＧＭ－ＣＳＦ对是３种糖基化程度不同的产物,分子量分别约为１５ｋｄ,１８ｋｄ和２０ｋｄ。     

缩短的人巨噬细胞集落刺激因子（M—CSF）在大肠杆菌中…

本文用聚合酶链反应（ＰＣＲ）获得了一个缩短的人巨噬细胞集落刺激因子ｃＤＮＡ基因,并克隆在质粒ｐＡＥＴ３ｄ中,在Ｔ７启动子指导下,在大肠杆菌ＢＬ２ＬｙｓＥ中获得了和一个６组氨酸短肽标签的融合表达。重组的融合Ｍ－ＣＳＦ表达量占菌体总蛋白的１２％,表达产物一部分以不溶性包涵体形式存在,另一部分则以可溶性蛋白存在。经过金属螯合新和层析一步纯化,所得的融合（Ｈｉｓ）６－Ｍ－ＣＳＦ在还原型ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上基     

促葡萄糖转运蛋白基因家族的分子进化研究

葡萄糖转运蛋白是一个在结构上相似功能上不同的多基因家族（ＧＬＵＴ１－ＧＬＵＴ５）。由于这一组蛋白和体内的葡萄糖利用有关,因此被认为是糖尿病胰岛素抵抗（抗性）的一个候选基因。本文比较了不同种生物这一基因家族的氨基酸和核苷酸顺序;推测了亲水性和疏水性分布;计算了蛋白质和核苷酸的进化距离,并在此基础上构建了分子进化树。研究表明：这一基因家族具有高度的同源性、极为相似的亲水性和疏水性分布以及结构的对称性。提示这一基因家族起源于一个共同的祖先并可能通过基因的重复而形成。这一进化机制可能有利于氨基酸结构的稳定及抵抗突变的作用。由于邻元法构建的进化树其分支长度存在差异,提示在这一基因家族的进化过程中,各分支上的进化速率并不相同。蛋白质进化距离和核苷酸进化距离所构建进化树的差异提示了在基因组中可能存在隐匿替换。两种方法构建的进化树都提示了ＧＬＵＴ１、３、４在结构和功能上要更为保守。