TAT-Cloan-DH-EGFP融合蛋白的原核表达及其在舞毒蛾幼虫体内的跨膜转导

【目的】为了探究滞育激素经昆虫取食的生物效应, 需设计一种能够加速跨膜运输的融合蛋白, 克服经昆虫消化道的降解作用。【方法】本研究以分月扇舟蛾Clostera anastomosis滞育激素基因Cloan-DH和TAT穿膜肽编码序列为基础, 构建TAT-Cloan-DH融合基因; 然后以增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein, EGFP）为标签, 构建在pET-22b载体中。在0.2 mmol/L IPTG诱导下, 在大肠杆菌Escherichia coli BL21 Rosetta(DE3)中表达出TAT-Cloan-DH-EGFP融合蛋白。 再分别将表达有TAT-Cloan-DH-EGFP和EGFP融合蛋白的大肠杆菌BL21菌体拌入人工饲料,经舞毒蛾Lymantria dispar幼虫持续取食0, 8, 24, 48, 72和90 h后, 随机挑选试虫进行组织固定并制作石蜡切片, 选取中肠所在体段切片进行组织荧光分析。【结果】37℃ 0.2 mmol/L IPTG诱导条件下, 表达的TAT-Cloan-DH-EGFP融合蛋白的分子量为61 kD, 主要以包涵体形式表达, 融合蛋白约占细胞总蛋白含量的18.1%; 随着试虫取食含TAT-Cloan-DH-EGFP融合蛋白饲料的增加, 虫体组织的绿色荧光强度逐渐增加, 取食72 h后, 组织荧光强度达到最高。【结论】实验结果说明融合蛋白TAT-Cloan-DH-EGFP可以通过消化道横向跨膜运输, 到达虫体其他组织, 且该过程与蛋白的摄入量成比例。     

植物向重力反应中PIN-FORMED介导的生长素极性运输调控

植物的向性,即植物对光或重力等环境刺激信号产生的定向生长反应。在向重力性反应中,植物器官将重力感知为定向环境信号,来控制其器官的生长方向以促进生存。植物激素生长素及其极性运输在植物向重力反应中起着决定性的调控作用。质膜定位的生长素输出蛋白PIN-FORMED(PIN)通过动态的亚细胞极性定位,改变生长素运输的方向以响应环境刺激,由此植物器官间建立的生长素浓度梯度是细胞差异化伸长和器官弯曲的基础,来调控植物的形态建成和生长发育过程。本文主要讨论发生在植物重力感受细胞内早期重力感知和信号转导机制的最新研究进展、PIN介导的生长素极性运输、PIN的极性定位以及质膜蛋白丰度的调控机制等。     

外源性物质提高精子受精能力研究进展

受精是一个复杂的生物学过程,精子必须具备良好的运动功能,同时需经获能和顶体反应才能实现受精。通过添加外源性物质,来改善精子体外存活时间,提高精子的运动能力,尤其是冷冻保存精子解冻后的受精能力,被认为是借助实验手段在体外改善精子功能,从而提高受精率的一个有效途径。可添加的外源性生物活性物质种类很多,通常有咖啡因、氨基多糖类物质、己酮可可碱、生殖激素类物质、细胞因子、维生素、抗氧化剂、牛黄酸和一些酶类物质等。本文对精子常用的外源性添加物质的研究进展进行了总结,在此基础提出了寻找新的外源添加物质的思路和途径。     

高渗震动对杜氏盐藻细胞跨膜K+运输的影响

杜氏盐藻细胞吸收K 的Km为 2 .86mmol/L ,Vmax为 1 .39μmol/1 0 8cells .h。钒酸钠和DES、CCCP、Li 抑制藻细胞对K 的吸收。高渗震动促进藻细胞H 的分泌 ,降低K 的吸收速率 ,CCCP和Li 减弱了高渗震动对藻细胞K 吸收的抑制。高渗震动对藻细胞K 分泌有轻微的抑制作用。     

人精子蛋白SP22的cDNA克隆、表达及纯化分析

精子蛋白SP2 2与生殖功能密切相关。睾丸附睾毒物氯醇硝唑作用于大鼠生殖系统时 ,精子表面SP2 2大量脱落至附睾液中 ,导致生育力降低。深入研究发现SP2 2与生育力存在量的关系。从人睾丸组织中提取总RNA ,通过RT-PCR克隆出人睾丸组织中的SP2 2基因 ,连入pGEM Teasyvector进行cDNA克隆测序。再亚克隆到pET-2 8a-c( + )vectors成功构建pET-2 8a-c( + )vectors SP2 2表达载体 ,并转化BL2 1 (DE3) ,以IPTG诱导表达 ,对诱导剂浓度、诱导时间进行优化后以镍离子亲和层析纯化目的蛋白。蛋白表达量占菌体总蛋白 30 %。所得蛋白可推动SP2 2的蛋白结构活性、睾丸组织中的定位分布及在男性不育、癌症等疾病检测中的应用研究。     

基因异常和染色体结构

DNA(脱氧核糖核酸)携带有细胞为制造蛋白质所必需的信息。一条染色体就是一个紧紧缠绕着的线状DNA分子。一条染色体的DNA伸直时其长约为5cm。正常体细胞(不是卵或精子)有23对染色体,这些染色体都具有特征性的形状。有时胚胎细胞中的染色体的形状会发生明显改变,以至能在显微镜下辨认出它们的异常。例如,染色体的一些部分会在所谓的交换过程中相互交换。交换发生在减数分裂期间,这时卵和精它     

人精子与金黄地鼠卵体外受精标准问题及某些操作经验

自Yanagimachi^[6]首创人精子穿入去透明带金黄地鼠卵以侧定人精子受精力的技术以来,该技术日益得到国内外有关实验室的重视与愈来愈广泛的应用。因为这是一种研究医学遗传学、生殖生物学、优生优育、药物致畸等学科与临床应用的有用工具。     

平阳霉素诱发人精子染色体畸变—评价化学物质致断性的一种离体测试系统*

人精子经已知的致断剂平阳霉素处理后与去透明带地鼠卵受精,继而制备人精子染色体进行核型分析。平阳霉素20μg, 40μg, 60μg/ml各剂量组均诱发出了多种类型的染色体结构畸变;其畸变精子率依次为39%、44%, 52.4%,其断裂均数依次为1.90, 2.70, 3.86,与对照组的畸变精子率4%和断裂均数0.07分别进行比较,差异非常显著(P<0.01)并存在明显的剂量依赖关系。本研究为检测化学物质对人精子中染色体的致断作用提供了一种新的离体测试系统。     

海藻糖和果糖联合应用提高了乌骨羊冷冻精子质量

该文探讨了海藻糖和果糖联合应用对乌骨羊精子冷冻保存的影响.在含有82.65 mmol/L果糖的Tris-檬酸-卵黄稀释液中分别添加0、5、10、15、25、50和100 mmol/L海藻糖,并将其分别命名为T0、T5、T10、T15、T25、T50和T100,采用两步稀释法对来自12只乌骨羊的27份精液进行冷冻保存.在...     

生长素极性运输在水稻根发育中的作用

生长素极性运输(PAT)在植物生长发育尤其是极性发育和模式建成中起重要作用.采用2种PAT抑制剂TIBA(2,3,5-triiodobenzoic acid)和HFCA(9-hydroxyfluorene-9-carboxylic acid)处理水稻(Oryza sativa L. cv.Zhonghua)幼苗,结果表明:PAT影响水稻根发育包括主根的伸长、侧根的起始和伸长以及不定根的发育.PAT的抑制导致主根变短、侧根和不定根数目减少.外源附加生长素(NAA)可以部分恢复不定根的形成但不能恢复侧根的形成,表明在侧根和不定根的形成上可能具有不同的机制.切片结果表明,30μmol/TIBA处理后并不完全抑制侧根原基的形成,进一步研究表明生长素由胚芽鞘向基部的运输在水稻不定根的起始和伸长中起关键作用.