穿心莲内酯对白假丝酵母菌菌丝的影响

目的探讨中药有效成分穿心莲内酯（Andrographolide,AG）对白假丝酵母菌菌丝的影响。方法利用稀释涂布法观察AG对固体培养基上白假丝酵母菌菌落形态的影响;倒置显微镜观察AG对白假丝酵母菌芽管及菌丝形态的影响;采用xTT还原法评价AG对白假丝酵母菌菌丝活性的影响;采用实时荧光定量PCR（qRT—PCR）检测白假丝酵母菌菌丝形成相关基因SUN41、CSHl以及CaPDE2表达量变化。结果AG能影响白假丝酵母菌菌落的形态;倒置显微镜观察表明AG能够抑制白假丝酵母菌菌丝及芽管的形成;qRT-PCR检测显示AG能使SUN41和CSHl基因表达下调和使CaPDE2上调。结论穿心莲内酯可能通过影响SUN41、CSHl与CaPDE2基因的表达而抑制白假丝酵母菌菌丝的形成。     

穿心莲内酯联合氟康唑抗耐药白假丝酵母菌作用机制研究

目的探讨穿心莲内酯联合氟康唑抗耐药白假丝酵母菌作用及其机制。方法采用微量稀释法检测穿心莲内酯（AG）及联合氟康唑（FLC）对耐药白假丝酵母菌的MIC;采用罗丹明6G（Rh6G）检测AG对耐药白假丝酵母菌CDR外排功能的影响;利用罗丹明123评估AG对耐药白假丝酵母菌MDR外排功能的影响：采用二氢罗丹明检测AG单用及联合FLC对耐药白假丝酵母菌活性氧（ROS）的影响;采用实时荧光定量PCR（qRT—PCR）检测AG联合FLC对耐药白假丝酵母菌外排泵相关基因CDR1、CDR2和MDR1表达的影响。结果AG联合FLC抗耐药白假丝酵母菌呈相加作用;AG对CDR外排功能无影响;AG可抑制MDR外排功能;AG联合FLC能显著提高耐药白假丝酵母菌细胞ROS水平;AG与FLC联合作用于耐药白假丝酵母菌可下调CDR1和MDR1的表达量,上调CDR2的表达量。结论AG联合FLC抗耐药白假丝酵母菌具有相加作用,其机制可能与抑制外排泵及相关基因表达,提高胞内ROS水平有关。     

植物穿心莲营养成分的研究

对植物穿心莲的营养成分进行了分析,结果表明,穿心莲中含有多种营养成分,丰富的矿质元素和维生素以及β-胡萝卜素。穿心莲中至少含有17种氨基酸。旨在为开发利用植物资源提供科学依据。     

磁场处理山豆根药液对小白鼠肠推进运动的影响

用经0.1T和0.25T磁场处理山豆根药液灌小白鼠胃,分别测定它们对小白鼠肠推进运动的影响。实验结果显示:0.25T磁场处理山豆根药液对小白鼠肠推进活动有明显促进作用,而0.1T磁场处理山豆根药液对小白鼠肠推进活动不明显,实验表明达到一定强度磁场才影响山豆根药液的药效。     

病毒诱导基因沉默鉴定穿心莲内酯生物合成关键酶ApCPS功能

该研究采用病毒诱导基因沉默技术(VIGS),以生长到第8片真叶期的穿心莲植株为实验材料,沉默参与穿心莲内酯生物合成的ent-柯巴基焦磷酸合酶基因(ApCPS),用半定量和荧光定量PCR检测病毒诱导沉默后ApCPS及其上游基因的表达,用HPLC法检测ApCPS沉默后穿心莲内酯的积累变化,同时检测茉莉酸甲酯(MeJA)处理后ApCPS及上游基因的表达,以全面分析穿心莲内酯代谢以及ApCPS在穿心莲内酯生物合成中的作用机制,验证其在植物体内的功能。结果显示:(1)ApCPS基因被成功沉默,基因表达显著下调,进而引起上游牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶基因(GGPS)的表达下调,而3-羟-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶基因(HMGR)和1-脱氧木酮糖-5-磷酸合成酶基因(DXS)的表达未受影响。(2)ApCPS基因沉默15d后穿心莲内酯积累量显著下降,表明ApCPS是穿心莲内酯生物合成关键酶基因,且能够负反馈影响上游基因表达。(3)茉莉酸甲酯(MeJA)显著诱导ApCPS及上游基因HMGR、DXS和GGPS的表达,表明穿心莲内酯生物合成基因受到MeJA的广泛调控。该研究首次使用VIGS证明ApCPS参与到穿心莲内酯生物合成,为利用该技术鉴定穿心莲内酯生物合成途径中其他基因功能奠定了基础。     

穿心莲体内血清指纹图谱建立

为了建立穿心莲药材含药血清指纹图谱,对大鼠血清进行一系列的考察,分辨给药后血中产生的药源性成分,从而分析其物质基础.本实验采用HPLC-DAD技术,筛选出穿心莲给药大鼠最佳取血时间,最佳血清处理方法以及最佳检测波长,建立穿心莲血清指纹图谱,初步分析其血中成分来源.通过筛选,确定血清药品制备方法为:给药后lh后,血清采用甲醇沉淀法,检测波长为275 nm.含药血清色谱图中有10个共有峰.本研究建立的方法,准确、可靠,可用于穿心莲血清指纹图谱的研究.     

玄参的化学成分研究

利用正、反相硅胶以及各种色谱技术进行分离,经理化性质和光谱分析鉴定中药玄参(Scrophularia ningpoensis)有效成分。从玄参(S. ningpoensis)根的乙醇提取物中分离了8个化合物,分别鉴定为14-去氧-12(R)-磺酸基穿心莲内酯（14-deoxy-12(R)-sulfo andrographolide, Ⅷ）、肉桂酸（cinnamic acid,Ⅰ）、对羟基肉桂酸（p-hydroxycinnamic acid,Ⅱ）、丁二酸（succinic acid,Ⅲ）、β-谷甾醇（β-sitosterol, Ⅳ）、胡萝卜甙（daucosteol,Ⅴ）、葡萄糖（gluose,Ⅵ）、熊果酸(ursolic acid,Ⅶ)。Ⅷ为在玄参中首次发现的天然化合物。     

磁场处理中草药穿心莲药液对小白鼠肠推进运动的影响

本探讨了磁场处理中草药穿-心莲药液对小白鼠肠推进运动的影响。结果表明：经0.1T和0.25T磁场处理中草药穿-心莲药液与未经磁场处理的穿心莲药液相比较。具有显促进小鼠小肠的炭末推进率。     

穿心莲内酯衍生物抗H2O2诱导胰岛RIN-mβ细胞凋亡的蛋白组学研究

采用蛋白组学方法筛选穿心莲内酯衍生物(AL-1)抗过氧化氢诱导胰岛RIN-mβ细胞凋亡的差异蛋白质分子并探讨其作用分子机制.结果显示:AL-1浓度依赖性地提高H₂O₂处理的胰岛RIN-mβ细胞的存活率.经蛋白组学研究分析,成功地鉴定了18个与凋亡、应激等相关的蛋白,包括Prohibitin、Shmt2、RhoGDP-dissociationinhibitor-1、Galectin-1、Cyt b5、Hsps等;与对照组(H₂O₂)相比,处理组(AL-1+H₂O₂)中,有9个表达上调的蛋白和9个表达下调的蛋白.AL-1通过调控与细胞凋亡、应激等相关的蛋白发挥其抗H₂O₂诱导的凋亡作用.     

利用大孔树脂同时制备穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯

采用大孔吸附树脂色谱法,以不同体积分数乙醇水溶液进行洗脱,分离富集穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯,并配以HPLC进行同步监控.结果表明,穿心莲中这2种主要有效成分分别得到了富集.40%乙醇水溶液洗去目标物以外的杂质后,45%乙醇洗脱液中富含穿心莲内酯,含量为46.99%,55%乙醇洗脱液中富含脱水穿心莲内酯,含量为79.74%.