三种提取RNA的方法对汉滩病毒检测敏感性影响的研究

分别采用标准法、ＧＰ法和ＭＢＰ法抽提汉滩病毒ＲＮＡ,结合套式ＰＣＲ比较这三种方法的敏感性。结果表明,所用引物对这两株病毒具有相同的特异性。这三种提取ＲＮＡ的敏感性差异不大,敏感性从高到低依次为：ＧＰ、ＭＢＰ和标准法,检测汉滩病毒的效价分别为０．０１、０．０１和０．１ＴＣＩＤ５０／２００μｌ;提取ＲＮＡ的时间长短分别为：标准法为２．５ｈ,ＧＰ为１ｈ,ＭＢＰ为０．５ｈ,可见ＭＢＰ用时最少。使用ＧＰ和ＭＢＰ提取ＲＮＡ时,可以在室温下进行,不需要低温离心。所以,ＭＢＰ最适合于实验室和临床病原体的快速检测,特别是对采集的环境样品的快速检测     

巴西人参皂苷的纯化富集及其体外促雄激素活性研究

目的：探讨巴西人参提取物中齐墩果酸型皂苷类化合物对小鼠睾丸间质细胞（TM3细胞）雄激素合成与分泌的促进作用,并根据细胞试验筛选出活性较强的组分。方法：以AB-8与XAD1600两种大孔吸附树脂分离富集得到的不同组分为试材,分别采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法、酶联免疫吸附法、硝酸还原法、羟胺法、硫代巴比妥酸法检测不同组分在不同浓度下对TM3细胞增殖活率、睾酮（T）含量、二氢睾酮（DHT）含量、环磷酸鸟苷（cGMP）含量、一氧化氮（NO）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）含量的影响。结果：经AB-8大孔吸附树脂分离得到的70%乙醇组分较其他组分具有更强的促进TM3细胞雄激素分泌的活性,再以XAD1600大孔吸附树脂对70%乙醇组分进一步纯化富集,获得的GP-1与GP-2组分均可显著促进TM3细胞T、DHT、cGMP的分泌量（P <0.05,P <0.01）,并提高SOD酶活性（P <0.01）,降低MDA含量（P <0.05,P <0.01）,且GP-2组分效果优于GP-1组分。结论：巴西人参各分离纯化组分可以显著促进TM3细胞雄激素的合成与...     

量化肿瘤浸润免疫细胞的分析方法研究进展

免疫细胞一直被认为是维持机体平衡的重要调节因子,对肿瘤浸润免疫细胞进行量化分析有望揭示免疫系统在肿瘤中的多方面作用。本文总结了量化肿瘤浸润免疫细胞的计算方法及相关的分析工具,包括基于标志基因富集分析方法和反卷积分析方法开发的算法模型与工具,列举了它们在揭示疾病发病机制以及药物治疗反应、确定肿瘤潜在生物标志物、辨别肿瘤免疫分型中的应用,提出了它们当前存在的局限性,并针对这些局限性问题进行了分析和展望,以促进该领域的发展。     

沙枣果总黄酮类化合物的富集研究

通过对9种型号大孔吸附树脂静态筛选,最终确定AB-8型大孔吸附树脂用于沙枣果总黄酮化合物的富集,并通过动态实验,确定沙枣果总黄酮最优富集条件为：样品浓度2.43 mg·mL^-1,上样速率2 BV·h^-1,乙醇浓度70%,洗脱速率2 BV·h^-1。在最优工艺条件下,沙枣果总黄酮浓度由9.73%增加到49.52%;其中金丝桃苷含量由0.53%增加到3.07%,提高5.79倍。本研究为沙枣果总黄酮的开发利用提供了理论依据。     

抑制RANKL诱导破骨细胞分化的DNA适配子的筛选

目的:筛选能高特异性、高亲和力结合RANKL蛋白并有效抑制RANKL对破骨细胞诱导分化作用的DNA适配子。方法:首先,采用原核系统表达并纯化RANKL蛋白,通过SELEX(Systematic evolution of ligands by exponential)技术从人工合成的单链随机寡核苷酸文库中筛选能高特异性、高亲和力结合RANKL蛋白的DNA适配子。然后,用RNAfolding sever software分析适配子空间结构,以ELISA检测DNA适配子和RANKL亲和力大小并筛选出亲和力最高的一组DNA适配子用以验证DNA适配子对RANKL诱导破骨细胞分化的抑制作用。结果:(1)成功在原核系统表达并纯化RANKL蛋白;(2)筛选出能高特异性、高亲和力结合RANKL蛋白的12个DNA适配子。(3)与对照组相比,不同浓度DNA适配子能明显抑制TRAP阳性破骨细胞数量(P0.05),且浓度越高抑制效果越明显。结论:成功筛选出的DNA适配子能特异性结合RANKL蛋白并有效抑制RANKL对破骨细胞的诱导分化功能。     

黑河中游春玉米叶片水δD和δ18O的富集过程和影响因素

植物水的稳定同位素分馏过程是水在土壤-植物-大气连续体中循环的重要环节。以往研究由于叶片水¹⁸O同位素比值(δ¹⁸O _l,b)和氘(D)同位素比值(δD_l,b)(合称δ_l,b)实测数量少只能作为模型验证数据, 导致δ_l,b富集机制研究多集中于模型研究, 缺乏基于野外试验条件的δ_l,b富集的控制机制研究。叶片水δD_l,b和δ¹⁸O _l,b的富集程度(ΔD_l,b和Δ¹⁸O _l,b, 合称Δ_l,b)通常表示为δ_l,b与茎秆水D同位素比值(δD_x)和¹⁸O同位素比值(δ¹⁸O_x) (合称δ_x)之差, 即Δ_l,b = δ_l,b - δ_x。该研究以黑河中游沙漠绿洲春玉米(Zea mays)生态系统为研究对象, 重点采集和分析了季节和日尺度δ_l,b和δ_x数据, 配套开展了大气水汽δ¹⁸O和δD (合称δ_v)等辅助变量的原位连续观测, 探讨了季节和日尺度上的δ_l,b富集特征及其影响因素。结果表明: 叶片水δ_l,b和Δ_l,b的季节变化趋势不明显, 而受蒸腾作用影响表现出白天富集夜间贫化的单峰日变化特征。对于D来说, 无论季节尺度上还是日尺度上, 大气水汽δ_v和相对湿度是δD_l,b和ΔD_l,b的主要环境控制因素; 而对于¹⁸O来说, 无论季节尺度上还是日尺度上, 相对湿度是δ¹⁸O _l,b和Δ¹⁸O _l,b的主要环境控制因素。由于D和¹⁸O在热力学平衡分馏上有约8倍差异, 直接分析叶片水ΔD_l,b和Δ¹⁸O_l,b与影响因素的差异性, 有助于理解叶片水δD和δ¹⁸O富集过程以及对模型发展有一定的指导意义。     

基于适体技术的桔青毒素检测方法的建立

桔青毒素（citrinin,CTN）是以玉米、谷物、奶酪等为主要成分的食品和动物饲料中常见的、由桔青霉菌产生的酮类真菌毒素,可引起人和动物的慢性中毒或癌症,一直缺少灵敏的快速检测方法。本文通过指数富集适体系统进化技术（简称SELEX）对可能与CTN结合的特异性适体进行了筛选,经过15轮循环,得到17条适体。通过二级结构分析、亲和力检测发现适体13（Apt-13）对CTN有较好的亲和度,解离常数Kd为0.06μmol/L。进一步利用非荧光标记染料PicoGreen,利用其与双链DNA结合的原理,建立了桔青毒素非标记荧光检测方法,30min完成检测,最低检测限达到国家标准（50ppb）且与其他毒素无交叉反应。本研究建立的基于适体的桔青毒素检测技术成本低,可以替代传统的基于抗体的检测方法,为霉菌毒素的精准检测技术的开发提供了实验证据。     

菹草对底泥中重金属污染的修复效果

以沉水植物菹草为研究对象, 通过生态缸模拟试验, 研究菹草的种植密度对底泥中不同重金属富集能力的影响, 探索沉水植物菹草对不同重金属污染的修复效果。结果表明: (1)250 株⋅m–2 密度组的菹草体内Cd、Cu、Pb 元素的平均增量最大, 分别达到30.02 mg⋅kg–1、271.2 mg⋅kg–1、226.48 mg⋅kg–1, 富集效果较好; 167 株⋅m–2 密度组菹草体内Zn元素的平均增量最大, 达到423.08 mg⋅kg–1, 可见该密度下对Zn 的富集效果最好。(2)菹草对四种重金属富集能力而言,在实验的三个密度组中对Zn 的富集效果都是最好的, 生物富集因子BSAF 分别为7.77、9.57、8.16; Cd、Cu、Pb 在250 株⋅m–2(每缸30 株)密度组下BSAF 分别达到最高7.63、6.33、3.93。(3)回归分析的曲线估计, 可知菹草植株中的重金属含量(y)与底泥中的重金属含量(x)是一种线性回归的关系。回归方程通式为y= –ax+b, 决定系数R2 都接近1, 回归模型的显著性均达到显著水平。     

超支化聚合物新材料富集糖肽方法的研究

目的：将自合成的超支化聚合物固定到氨基硅球上形成一种新型的糖肽富集材料,用于糖肽的高效分离与富集。方法：阴离子开环聚合法合成的超支化聚缩水甘油,经高碘酸氧化成为超支化聚甘油醛（hyperbranched polyglycerol-aldehydes,HPG-ALD）后固定于氨基硅球上,再用己二酸二酰肼修饰得到的酰肼材料应用于糖肽富集。结果：经扫描电镜（Scanning Electron Microscope,SEM）、热重分析（thermogravimetric analysis,TGA）等手段证明材料被成功合成。同时,使用制备成功的新材料来富集标准糖蛋白和糖肽都获得了良好的富集效果。结论：实验证明超支化缩水甘油酰肼材料（hyperpolymer-assisted hydrazide functionalized microspheres,HHMs）可用于低丰度糖蛋白/糖肽的富集。     

免疫磁珠纯化小鼠精原干细胞的研究

精原干细胞（spermatogonial stem cells,SSCs）富集纯化是利用SSCs进行基因修饰新方法等研究的前提基础。采用免疫磁珠分选法,使用干细胞抗体CD90.2进行小鼠SSCs的纯化富集,并采用流式细胞分析法和定量PCR验证了磁珠分选效率。流式细胞分析结果：免疫磁珠分选后SSCs纯度为50.11%。荧光定量PCR检测结果：磁珠分选后支持细胞特异表达基因 GATA4 显著下调（6倍）、SSCs表达基因 GFRα-1 上调（6.5倍）、生殖干细胞特异表达基因 OCT4 极显著上调（5.9倍）,3个基因相对表达量的变化说明,免疫磁珠分选效率为6倍。流式细胞分析法所产生的偏差可能是受到了未解离磁珠及SSCs本身转基因荧光的影响。