小鼠胚胎干细胞向脂肪细胞分化过程中PPARγ2基因的表达模式

将PPARγ2基因启动子和报告基因荧光素酶相连接克隆于特定载体构建成表达质粒,电穿孔转染小鼠ES细胞,筛选阳性克隆.诱导ES细胞向脂肪细胞分化,通过定量检测荧光素酶活性跟踪PPARγ2基因的表达情况,以此研究脂肪细胞分化过程中该基因的表达模式.结果显示PPARγ2基因在未分化的ES细胞和EB形成的前两天中不表达,从EB形成的第3天开始表达,直至脂肪细胞分化完成.该基因在已完成分化的脂肪细胞中的表达远强于在分化中的前脂肪细胞中的表达.首次报道了从小鼠ES细胞到脂肪细胞分化过程中PPARγ2基因的表达模式,支持了PPARγ2基因为脂肪组织特异性表达基因的已有报道,并为脂肪细胞分化机理研究提供了线索.     

利用捕获载体解析小鼠基因在生物发育过程中的功能

利用特殊构建的捕获载体(trapping vector)随机插入胚胎干细胞(ES细胞)的基因组,被插入基因的转录过程被迫中止,用这样的ES细胞制作出小鼠,可以得到被插入基因的小鼠变异系,通过对变异小鼠的表现型分析。阐明该基因在生长发育过程中的功能和作用。     

小鼠宫内移植恶性肿瘤H22的实验研究

为了观察恶性肿瘤细胞处于宫内中晚期胚胎环境对胎鼠发育影响及恶性肿瘤的生物学行为,将8×106的H22细胞数量移植到胎鼠的羊膜腔(D9-D12)和腹腔(D13-D18),观察移植H22后的胎鼠分娩、新生鼠发育状况和荷瘤情况.结果发现,被移植H22的胚胎(D9-D18)能够继续在孕鼠子宫中发育至分娩,新生鼠无发育异常,新生鼠继续发育成熟,发育同正常鼠比较无异常,且一直无腹水荷瘤,H22荷瘤标志物AFP放射免疫法(radio-immunityRI)测定为阴性,RT-PCR法检测AFP阴性.     

几个影响黄瓜子叶体细胞胚胎发生的因素

黄瓜品种“叶三旱”是体细胞胚胎发生的理想基因型 ;愈伤组织诱导阶段和胚胎发生阶段分别采用 9%和 6 %的蔗糖浓度 ,可促进体细胞胚胎发生 ;胚诱导培养基中添加 6 BA 0 .5mg·L-1,体细胞胚胎发生率较高 (达到 6 7.8% ) ;愈伤组织诱导阶段甘露醇与蔗糖配合使用 ,可提高体细胞胚胎发生率 (高达 82 .2 % )。     

小鼠不同阶段胚胎玻璃化冷冻保存的比较研究

The cryopreservation of different embryo stages collected from ICR, C57BL/6 and F1 of DBA*C57BL/6 was carried out by using vitrification method. The morphology, in vitro development and birth rates of these embryos were compared after frozen-thawed. The results showed that more than 75% of the morphology from 2-cell embryos to morula stages from different strains was normal, the normal morphology rates of 8-cell embryos being the highest, while those of blastulas being the lowest. The in vitro development rates became higher as the embryos developed. The morphology of in vivo and in vitro fertilized frozen 2-cell embryos showed no difference, but the development rate of in vivo fertilized frozen 2-cell embryos was significantly higher than that of in vitro ones. Embryos that underwent 3 times frozen-thawing remained normal morphology. The pregnant rate and birth rate of frozen 2-cell embryos after embryo transfer were 64% and 40% respectively, but lower than those of fresh 2-cell embryo transfer.     

西施舌的核型分析

以西施舌囊胚期胚胎为材料,5—10μg／ml秋水仙素海水处理2h,50％海水蒸馏水低渗0．5h,热片法制片,对西施舌的核型进行分析。结果表明,西施舌的二倍体数目2n＝38,核型为14m 16sm 8st,NF＝68。染色体实际长度CL为1．10—3．47μm,染色体总长度TCL为80．72μm。整个核型的染色体长度依次减小,相邻各对之间差异不明显。其中l、3、7、10、11、16和19号为中着丝粒染色体;5、6、8、9、13、14、17和18号为亚中着丝粒染色体;2、4、12和15号为亚端着丝粒染色体。     

趋化因子与哺乳动物生殖

趋化因子(chemokine)通过其G蛋白偶联的受体介导白细胞在各种组织内迁移。最近发现,白细胞介素—8(IL-8)、单核细胞趋化蛋白—1(MCP—1)、调节激活的正常T细胞表达和分泌的蛋白(RANTES)、调节生长的原癌基因α(GRO-α)、粒细胞趋化蛋白—2(GCP—2)等趋化因子在卵泡发育、闭锁、排卵、类固醇激素生成、黄体功能、月经周期、着床、子宫颈成熟、早产和子宫内膜异位症等生殖过程中具有重要的调节作用。     

小鼠不同阶段胚胎玻璃化冷冻保存的比较研究

采用玻璃化冷冻法对ICR、C57BL/6、DBA~*C57BL/6杂交F1代三种品系小鼠的不同阶段胚胎进行冷冻保存,比较胚胎解冻后形态良好率、体外发育率和移植后的出生率,结果表明解冻后各品系小鼠胚胎从2细胞到桑椹胚形态良好率在75%以上,其中8细胞胚胎形态良好率在83%以上,而囊胚的形态良好率仅在40%左右。解冻后胚胎体外培养的发育率随胚胎发育阶段的提高而提高,桑椹胚的发育达93%以上。体外受精2细胞冷冻胚与体内受精2细胞冷冻胚比较,二者形态良好率差异无显著意义(74%∶75%),但体内受精冷冻胚的发育率明显高于体外受精冷冻胚(76%:40%,p<0.01);胚胎经过三次反复冻融后形态良好率无显著差别;冷冻2细胞胚移植后的受孕率与仔鼠出生率分别达64%和40%,但均低于新鲜2细胞胚。     

3个不同品系小鼠ES细胞的绿色荧光蛋白标记

用电穿孔法将线性化的质粒pEGFP—N3分别导入来自129／ter、C57BL/6J和BALB／c3个品系的小鼠胚胎干细胞：MESPU—13、MESPU—35和MESPU—62中,经G418筛选、荧光显微镜镜检、阳性克隆扩增、流式细胞仪分选、再扩增以及核型分析等过程,分别得到核型大于85％的被EGFP稳定标记的细胞株5个(129／ter2个、C57BL/6J1个、BALB／c2个),分别命名为MESPU—13／G1和MESPU—13／G2、MESPU—35／G1、MESPU—62／G1和MESPU—62／G2。从不同品系中各选一个增殖生长快、形态典型的标记细胞株,进行碱性磷酸酶染色、oct4群基因产物的表达检测、类胚形成和体内分化鉴定,结果表明所得到的核型正常的、稳定标记的ES细胞系具有原ES细胞的典型特征。     

TDZ：一种有效的植物生长调节剂

人工合成的苯基脲衍生物TDZ（N-苯基-N′-1,2,3-噻二唑-5-脲）是已被广泛用于植 物组织培养形态发生的高效生物调节剂。它能诱导外植体从愈伤组织形成到体细胞胚胎发生 的一系列不同反应,具有生长素和细胞分裂素双重作用的特殊功能。近年来通过研究TDZ启 动的形态发生事件,人们正逐渐揭示出其内在作用机理。许多研究报告指出TDZ通过调节内 源植物生长激素起作用,或者是诱导逆境产生起间接作用。它还能调节细胞膜结构、能量水 平、营养吸收和同化作用。本文将探讨TDZ几种可能的作用机理,并概述近年来有关TDZ诱导的植物离体形态发生效应研究进展。