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941.
1998年,Fire等[1]在研究控制线虫的基因表达方法时,意外地发现由正义和反义RNA退火形成的双链RNA(double-stranded RNA,ds RNA)引起的基因表达的抑制程度远远高于单独应用正义或反义RNA. 相似文献
942.
943.
对虾白斑综合症病毒囊膜蛋白VP28的表达及其抗病毒感染作用 总被引:1,自引:0,他引:1
根据GenBank上WSSV囊膜蛋白基因vp28的序列,设计并合成引物,PCR扩增得到vp28基因,成功构建重组表达载体pET22b-vp28并转化大肠杆菌BL21(DE3).基因工程菌株37℃IPTG诱导,表达产物经Western-blot和SDS-PAGE检测显示有与预期大小32kDa相符合的目的蛋白.用Ni2+-柱纯化的目的蛋白分别直接注射螯虾和包被饲料投喂螯虾,实验结果表明vp28在大肠杆菌中的表达产物有显著提高虾体抗WSSV感染力的作用,而且注射效果更好. 相似文献
944.
家蚕抗菌肽CD高效表达及其抗BmNPV感染作用 总被引:2,自引:0,他引:2
通过大肠杆菌JM109诱导家蚕,提取其脂肪体总mRNA后,通过RT-PCR 得到 cDNA,根据GenBank上家蚕抗菌肽 Cecropin D 的cDNA序列,设计并合成引物,然后PCR扩增得到 Cecropin D肽基因并克隆到pGEM-T载体中,经过EcoRΙ和 Xho I 酶切,连接并将Cecropin D肽基因插入pET32a表达载体中.用重组质粒pET32a- ecropin D 转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下,融合蛋白Trx-Cecropin D 以可溶形式得到高效表达,经SDS-PAGE检测显示分子量为23kDa与预期大小相符,表达量约为总蛋白的30%.融合蛋白经Ni2+ 柱纯化后通过肠激酶切割后释放为 Trx(18kDa)和 Cecropin D (5kDa),最后通过超滤管分离得到重组抗菌肽.通过抑菌实验测得重组CecropinD对于革兰氏阴性及阳性菌均有抑菌活性.并将重组Cecropin D 与家蚕病毒BmNPV作用混合4h后,一起投喂家蚕,发现病毒感染力有明显降低,说明其有抗病毒感染作用. 相似文献
945.
乙脑病毒持续感染株preM区序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
为了研究乙型脑炎病毒持续感染株preM区域基因序列变异及其意义,我们将两种乙脑病毒野生株(JaGAr-01株和Nakayama株)分别感染人肝癌KN73细胞,经过多次细胞传代后建立乙脑病毒持续感染模型,收集感染细胞经反复冻融获取变异病毒.利用preM区特异引物进行RT-PCR法得到两种病毒的preM区基因片段,应用基因测序反应进行序列分析,并对两种病毒株preM区序列进行比较.preM区基因测序结果显示,与JaGAr-01野生株比较,JaGAr-01持续感染变异株(JaG-per)有1个核苷酸上碱基发生变异(第26位U→G)并导致相应氨基酸发生置换(第9位亮氨酸→精氨酸);Nakayama持续感染变异株(Nak-per)与其野生株相比则有11个核苷酸上碱基存在差异(第26位U→G,第37位G→A,第39位C→U,第45位U→C,第51位U→C,第99位U→C,第126位U→C,第165位C→U,第189位C→U,第195位C→U,第198位U→C),但仅有其中第26位、第37位、第39位的碱基变异引起相应编码的氨基酸发生置换(第9位亮氨酸→精氨酸及第13位缬氨酸→异亮氨酸).对比还发现变异后的JaGAr-01持续感染株与Nakayama持续感染株的基因序列相同.认为乙脑病毒持续感染变异株preM区存在基因变异,这种变异可能与该区参与病毒持续感染及维持病毒生物学特性有关. 相似文献
946.
人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染是造成器官移植失败的重要原因。建立灵敏、特异的检测方法可为及早发现感染、及时给予抗病毒治疗提供依据。以离子交换和分子筛方法纯化重组表达的HCMVpp65(rp65hp)抗原,经两步纯化后,rp65hp纯度达到95%。免疫家兔制备的抗血清,ELISA抗体滴度高达1∶2560000;免疫印迹证明能与HCMVpp65抗原特异反应。将HCMV病毒感染细胞,以纯化的多克隆抗体建立了间接免疫荧光法,成功地检测到细胞中的病毒。因此,该方法为临床检测HCMV病毒活动性感染奠定了良好的基础。 相似文献
947.
948.
949.
950.