gAd重组质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达

为了建立人脂联素球状结构域(gAd)原核高效表达体系,分离纯化gAd并检测其生物活性,从淋巴细胞中提取人基因组DNA,PCR扩增出含有脂联素编码序列的片段,通过T-A克隆的方法克隆入pMD18-T载体中,然后设计适当的引物引入起始密码、终止密码以及相应的酶切位点,把脂联素球状结构域(gAd)基因亚克隆到表达载体pBV220,将序列鉴定正确的重组质粒转化入大肠杆菌DH5α中,用42℃温控诱导目的蛋白的表达;超声破菌,分离纯化包涵体,8mol/L尿素溶解,采用梯度稀释法复性重组蛋白,动物实验测定其活性。结果在大肠杆菌中成功实现了gAd稳定的以包涵体形式的高效表达,表达量约占全菌蛋白的20%,经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定分离得到的包涵体具有较高纯度,复性后具有降低家兔血糖和游离脂肪酸的作用。为进一步研究gAd的生物学活性、作用机制奠定了基础。     

大蒜植物络合素合酶基因转化对酵母重金属抗性的提高

重金属污染是全球面临的亟待解决的生态问题。利用植物对重金属的富集作用来清除环境重金属污染即植物修复已成为重要的环境生物技术之一。这一技术的长远发展有赖于在重金属富集或耐受中起关键作用的基因的克隆和应用。植物络合素是植物体内一类重要的对重金属起螯合作用的多肽, 其合成受植物络合素合酶的催化。该文取得了如下研究结果:1)通过原子吸收测定表明,在大蒜(Allium sativum)的根部可以积累3 000 mg·kg^-1的重金属镉;2)将克隆的大蒜植物络合素合酶基因(AsPCS)置于酵母表达启动子之下,构建酵母表达载体,并将其分别转入了因CUP1和acr3基因缺失而对重金属镉和砷敏感的酵母突变体菌株后,发现来自大蒜的AsPCS基因的表达使酵母CUP1缺失菌株对镉的耐受性提高了4倍, acr3缺失菌株对砷的耐受性提高了两倍;3)表达AsPCS基因酵母的生长模式证实了AsPCS基因的表达是酵母对重金属耐受性提高的原因。这些结果暗示, 大蒜植物络合素合酶基因在大蒜对重金属的抗性及大蒜根部对镉的积累中起关键作用,可作为重要的基因元件应用到修复污染的植物基因工程中。     

大接骨丹的化学成分

ＴｏｒｉｃｅｌｌｉａａｎｇｕｌａｔａＯｌｉｖ .ｖａｒ.ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ (Ｈａｒｍｓ .)Ｈｕ ,ｂｅｌｏｎｇｉｎｇｔｏＴｏｒｉｃｅｌｌｉａｃｅａｅ ,ｉｓａｓｉｎｇｌｅｆａｍｉｌｙａｎｄｓｉｎｇｌｅｇｅｎｕｓｐｌａｎｔ.ＩｔｉｓｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄｉｎＹｕｎｎａｎ ,Ｇｕｉｚｈｏｕ ,ａｎｄＳｉｃｈｕａｎｐｒｏｖｉｎｃｅｓｉｎＣｈｉｎａａｓｗｅｌｌａｓｔｈｅＨｉｍａｌａｙａｓ.ＩｎＣｈｉｎｅｓｅｆｏｌｋｍｅｄｉｃｉｎｅ ,Ｔ .ａｎｇｕｌａｔａｉｓｕｓｅｄｔｏｔｒｅａｔｂｏｎｅｆｒａｃｔｕｒｅ ,ｔｏｎ ｓｉ…     

滇黄芩中五个新的黄酮类配糖体

从滇黄芩（Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ ａｍｏｅｎａ）根中分离到５个新的黄酮类配糖体。命名为滇黄芩甙甲－戊（ａｍｏｅｎｉｎｓＡ－Ｅ）。经光谱分析,化学结构分别证明为：２’,４’,６’－三羟基二氢查耳酮４’－「Ｏ－β－Ｄ－半乳吡喃糖基（１→２）」－Ｏ－β－Ｄ－葡萄吡喃糖甙,５,７,２’－三羟基－６－甲氧基二氢黄酮７－Ｏ－β－Ｄ－葡萄吡喃糖醛酸甙,（顺式）－５,７,２’－三羟基二氢黄酮醇３－Ｏ－β－Ｄ－葡萄     

激动素在黄瓜子叶器官分化中的作用

采用在培养初期分阶段供应激动素 (KT)的方法 ,研究了其对黄瓜子叶器官分化的影响 ,并对全程供应和不供应KT下子叶中内源多胺和内源激素的变化进行了动态测定。结果表明 :1)供应KT使不定根分化率下降 ,不影响营养芽的分化 ,而对于花芽分化则是必需的。2 )供应KT使多胺中腐胺 (Put)含量变化最为显著 ,在培养第 2、 6d出现峰值 ,在第 4d呈低谷 ,对照则在第 4d出现峰值。 3)供应KT使培养 2d的子叶中吲哚乙酸 (IAA)和脱落酸(ABA)含量显著降低 ,4d时IAA含量显著升高。据上结果 ,就这些生理变化和花芽分化之间是否存在相关进行了充分讨论。     

MKP-1在血管紧张素Ⅱ导致心肌肥大反应中的调控作用

本研究主要从丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶 1(MKP 1)角度 ,研究丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK)信号途径在血管紧张素Ⅱ介导的新生大鼠心肌细胞肥大反应中的作用及调控机制。实验以心肌细胞蛋白合成速率、蛋白含量及细胞表面积作为心肌肥大反应的指标 ,以凝胶内MBP原位磷酸化测定MAPK活性 ,以免疫印迹法 (Westernboltting)分别测定MKP 1及磷酸化p44MAPK、p42MAPK蛋白表达。结果发现 :(1)AngⅡ (10 -7mol/L)处理 48h ,心肌细胞 3H 亮氨酸掺入率、蛋白含量及细胞表面积明显增加 ,AngⅡ增加 3H 亮氨酸掺入的作用可被血管紧张素Ⅱ 1型受体 (AT1受体 )拮抗剂CV11974(10 -6mol/L)明显抑制 (抑制 85 % ) ,被MAPK激酶 (MEK)特异性抑制剂PD0 980 5 9(5× 10 -5mol/L)部分抑制 (抑制 32 5 % ) ;(2 )CV11974或PD0 980 5 9可明显抑制AngⅡ介导的磷酸化MAPK蛋白表达及MAPK酶活性 (以γ 32 P ATP掺入表示 ) ;(3)以磷酸化MAPK蛋白表达反映MAPK活性 ,可见AngⅡ处理心肌细胞5min ,MAPK活性即开始增加 ,30min左右达到高峰 ,2h后基本恢复正常 ;而MKP 1蛋白表达 30min即见增加 ,持续 2h以上 ;(4 )用放线菌素D (actinomycinD)处理心肌细胞 30min可明显抑制MKP 1的表达 ,同时使AngⅡ致磷酸化MAPK蛋白表达时间延长至 2h以上。以上结果     

一氧化氮抑制血管紧张素Ⅱ和内皮素-1诱导的心肌细胞原癌基因c-fos表达

在原代培养的新生大鼠心肌细胞上, 探讨一氧化氮 (NO)对血管紧张素Ⅱ (AⅡ)和内皮素-1 (ET-1)诱导的心肌细胞肥大和原癌基因c-fos表达的影响.用Bradford 法测定心肌细胞总蛋白含量 (作为心肌细胞肥大的指标); 用基因特异性引物和 SuperScript一步法进行逆转录聚合酶链式反应 (RT-PCR), 检测大鼠心肌细胞原癌基因c-fos的表达 (以GAPDH为内标).结果显示, AⅡ和ET-1分别作用5 d和3 d后, 心肌细胞总蛋白含量显著增加; 硝普钠 (NO供体)可抑制AⅡ或ET-1诱导的心肌细胞总蛋白增加.AⅡ,ET-1和PMA (蛋白激酶C激动剂)均可诱导心肌细胞原癌基因c-fos的表达; L-精氨酸可抑制AⅡ,ET-1和PMA诱导心肌细胞原癌基因c-fos的表达, L-NAME (NOS抑制剂)可抑制L-精氨酸的这一作用; 硝普钠对可抑制AⅡ,ET-1和PMA诱导心肌细胞原癌基因c-fos的表达.结果表明, NO可抑制AⅡ或ET-1诱导的心肌细胞肥大和原癌基因c-fos表达, 其作用机制可能与蛋白激酶C这一环节有关.     

油菜素苗体类化合物的生物合成,代谢和生理效应

介绍油菜素甾体类化合物在植中的存在、分析方法、生物合成途径－早期Ｃ６氧化和后期Ｃ６氧化途径,及其代谢方式、生理效应、结构与活性关系等的研究进展,并就今后这一问题的研究和作了论述。     

居室两种新害虫

我们平常熟悉的居室害虫主要是蚊子、苍蝇、蟑螂、蚂蚁、白蚁、皮蠹、米象等等。但随着城市居民生活水平的提高 ,通过居室装修、购物和其他人类活动 ,各种食品、水果及其他商品和包装材料等进入家庭 ,随之各种昆虫也引入居室 ,使一些不常见的或原来不是居室昆虫的也成了我们居住环境中的害虫。据美国佛罗里达大学昆虫与线虫系 1 998年出版发行的名为《居室内及其周围的害虫》光盘介绍 ,城市居室内的害虫可分为“叮咬害虫”、“食物害虫”(包括在食物周围活动的昆虫 )、“纤维和木材害虫”以及“偶尔入室的害虫”等 4类。按此分类 ,蚊子属第 …     

狭基线纹香茶菜中一个新的木脂类素化合物

从狭基线纹香茶菜（Ｉｓｏｄｏｎ ｌｏｐｈａｎｔｈｏｉｄｅｓ ｖａｒ．ｇｅｒａｒｄｉａｎｕｓ「Ｂｅｎｔｈａｍ」Ｈ．Ｈａｒａ）的乙酸乙酯部分分离得到两个木脂类素化合物,经１Ｄ、２Ｄ－ＮＭＲ技术鉴定,分别为１－ａｃｅｔｏｘｙｌ－２ｅ,６ｅ－ｄｉｐｉｐｅｒｏｎｙｌ－３,７－ｄｉｏｘａｂｉｃｙｃｌｏ－「３,３,０」－ｏｃｔａｎｅ（１）和１－ａｃｅｔｏｘｙｌ－２ｅ－ｐｉｐｅｒｏｎｙｌ－６ｅ－「６－ｍｅｔｈｏｘ