虎杖转录因子PcMYB2的表达特性和功能分析

对虎杖R2R3-MYB转录因子PcMYB2进行转录活性鉴定和表达特性分析,并在转基因拟南芥和转基因毛状根中进行功能研究。利用酵母单杂交试验分析PcMYB2的转录活性;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测虎杖中PcMYB2的表达模式;DMACA法检测PcMYB2转基因拟南芥和虎杖毛状根中的原花青素含量。酵母单杂试验表明,PcMYB2具有转录激活活性;RTqPCR结果显示,PcMYB2在虎杖根、茎、叶中均有表达,在叶中表达量最高,并且ABA和H₂O₂外源处理可诱导叶片中PcMYB2的表达;与野生型拟南芥相比,转基因拟南芥种皮颜色加深,原花青素含量为野生型的1.8倍;与野生型毛状根相比,转基因毛状根DMACA染色更深,原花青素含量为野生型的2.3倍。PcMYB2具有转录激活活性,且促进植物原花青素的生物合成。     

麦迪霉素产生菌中具强启动活性DNA片段的结构与功能分析

用启动子探针质粒ｐＩＪ４８６从麦迪霉素产生菌（Ｓ．ｍｙｃａｒｏｆａｃｉｅｎｓ）中克隆到１个具启动功能的ＨｉｎｄＩＩＩ－ＨｉｎｄＩＩＩ２．０ｋｂ片段,含该片段的重组质粒ｐ４Ｈ２转化子在ＭＭ基本培养基上对卡那霉素（Ｋｍ）抗性可达５００μｇ／ｍｌ以上。亚克隆缺失分析结果表明,该片段不同部分的缺失对启动活性有不同程度的影响,说明它具有较复杂的转录调控机制。ＤＮＡ序列分析结果显示,该片段含有１９８４个核苷酸,其Ｇ＋Ｃ％为４７．７％,不存在典型的链霉菌的可读框;进一步的分析发现,其６５０ｂｐ、１１５０ｂｐ和１５００ｂｐ区域分别与麦迪霉素酮基还原酶基因等链霉菌基因的启动子序列具有同源性;在５２０－５７０ｂｐ区域与大肠杆菌ｔＲＮＡ基因上游激活序列（ＵＡＳ）有较好的同源性,提示链霉菌中可能存在可增强基因转录的ＤＮＡ元件。     

大鼠胼胝体内神经肽Y免疫反应阳性纤维的发育

本实验用免疫组织化学ＡＢＣ法研究了大鼠胼胝体内神经肽Ｙ免疫反应阳性（ＮＰＹ－ＩＲ）纤维的生后发育。结果发现,许多ＮＰＹ－ＩＲ纤维在大鼠出生时便存在于胼胝体内。ＮＰＹ－ＩＲ胼胝体纤维的密度在生后１周内继续逐渐增高,在第２周内达到最高峰。之后,ＮＰＹ－ＩＲ胼胝体纤维的密度逐渐下降,至第３周末时接近成年时的水平,即仅有少量ＮＰＹ－ＩＲ纤维存在于胼胝体内。这些结果提示在大鼠早期生后发育过程中许多ＮＰＹ－ＩＲ胼胝体纤维是暂时性的,其作用可能与大脑皮质的机能发育有关。     

豚鼠胸腺含P物质、降钙素基因相关肽和神经肽Y神经的定位研究

为研究神经肽调节胸腺生理功能的作用途径,作者采用免疫组织化学ＡＢＣ法结合ＧＤＮ增强技术,以３０μｍ厚恒冷箱切片光镜下观察了豚鼠胸腺内含ＳＰ、ＣＧＲＰ和ＮＰＹ神经纤维的定位与分布。结果发现,ＳＰ和ＣＧＲＰ免疫反应神经纤维在胸腺内分布广泛,呈线状或串珠状,可见于血管周围,小叶间结缔组织和胸腺实质。实质中以皮髓质交界区和髓质区纤维分布较密集,而走行于皮质淋巴组织的神经纤维相对稀疏,胸腺小体附近亦可见含ＣＧＲＰ神经分布。含ＮＰＹ神经纤维主要分布于血管周围、小叶间隔和皮髓质交界区,仅少数分支穿行于皮质胸腺细胞之间。胸腺被膜中有上述３种肽能神经纤维分布。本研究结果表明,胸腺内有丰富的肽能神经分布,这可能是神经肽调节胸腺生理功能的重要方式之一。     

RAPD技术在抗生素生物合成基因克隆表达中应用的研究

抗肿瘤抗生素c-1027具有极强抗肿瘤活性．其分子结构由一个酸性蛋白和脂溶性发色团构成,本文首次将RAPD技术(随机扩增的多态性DNA技术)运用于抗生素生物合成基因克隆表达研究。采用7种引物对5种C-1027无活性阻断变株总DNA进行扩增．其中引物GA2扩增C-1027原株及阻断变株后,琼脂糖凝腔电泳结果表明,F2DNA片段存在于原株而在变株AF67中缺失,采用载体质粒pU459将该DNA片段F2克隆至变铅青链霉菌．获得含重组质粒pIF2的菌株No155。No155菌株和无括性阻断变株AF67共培养后,发酵产物恢复了抗菌活性及抗瘤作用。SDS-PAGE及紫外光谱证实产物为C-1027。这表明F2DNA片段古有编码C-1027生物合成的基因。     

昆虫神经肽研究进展

近年来鉴定了化学结构的昆虫神经肽数目呈快速上升趋势, 家蚕滞育激素和性信息素合成激活肽被分离纯化.三种近年出现的研究方法对寻找新型昆虫神经肽起到重要作用,已经成功地鉴定了数个新型神经肽.昆虫神经肽cDNA或基因组DNA克隆显示了新的结构信息和神经肽间的相互关系.     

激活淋巴细胞cDNA单链库的构建

介绍一种激活淋巴细胞cDNA单链库构建方法,此库具有良好的模板活性. 用PCR法从此库中克隆了多种中国人源性的细胞因子.     

酵母ADH2—SUC2融合启动子的构建及其对基因表达的调控

将ＡＤＨ２基因的ＵＡＳ与带有不同长度缺失上游区的ＳＵＣ３基因融合,构建成４种具有不同融合启动子的ＳＵＣ２基因的表达质粒ＹＲＤ１１０１．ＹＦＤ１１０△９．ＹＦＤ１１０△１７、ＹＦＤ１１０△１１。将这些质粒及对照表达质粒ＹＦＤ２６△１．ＹＦＤ２５转化酵母菌Ｙ３３,在阻遏与去阻遏培养条件下,对各种转化子所产生的蔗糖酶进行了活性测定和组分分析。结果表明：在葡萄糖去阻遏生长条件下,ＹＦＤ１１０△１的启动子组合中ＵＡＳｓｕｃ２和ＵＡＳＡＤＨ２对ＳＵＣ２基因的表达有协同激活作用。在阻遏条件下Ｙ３３／ＹＦＤ１１０△１与Ｙ３３／ＹＦＤ１１０△９、Ｙ３３／ＹＦＤ２６△１、Ｙ３３／ＹＦＤ２５一样,均表达很低的糖基化蔗糖酶,３种去阻遏培养条件比较说明,在低糖培养基中对糖基化蔗糖酶表达的去阻遏效果最佳     

水杨酸在植物体内的作用

一个世纪以前,美洲印第安人和希腊人各自独立地发现柳树的叶和树皮可镇痛解热。德国JohannBuchner（1828）成功地从柳树皮中分离出少量水杨昔（sallcin,即水杨乙醇糖着）。1838年,RaffaelePiria将柳树皮中这种活跃的有效成分称为水杨酸（salicylicacid,SA拉丁文saliX意为水