紫菜叶状体细胞的酶法分离及其养殖研究

本文应用生物技术方法,进行紫菜细胞的菜苗和海上养殖已获得成功。用海螺酶将紫菜叶状体细胞分离成单细胞和原生质体,研究了叶状体的不同细胞类型的再生和发育。不同海水比重、不同温度对细胞的分离和培养的影响,并研究了单细胞和原生质体的附着及其海上的养殖。紫菜酶法采苗的成功,将会对传统的紫菜养殖产生根本的变革。     

用细胞工程技术发展我国的紫菜养殖业

利用酶法将紫菜叶状体分离成单细胞和原生质体作为种苗用于紫菜养殖生产。此法与传统育苗法相比,能大幅度提高紫菜产量和质量,育苗周期由半年时间缩短到5天左右,经济效益可提高数倍。     

银杏种子生长特性及其生理变化的研究

从纵径、横径、体积、重量等方面分析了银杏种子的生长特性及其生长过程中水分、糖类物质、脂肪酸、氨基酸的生理变化.结果表明,银杏种子的生长过程曲线为典型的单“S”型,种子纵径、横径、体积、重量、绝对含水量随生长过程呈“S”形变化.各种生理物质含量随种子生长过程呈规律性变化,且各有其特点.其中在种子生长后期糖类物质总量表现出上升的趋势,表明它们是种子中主要的营养储存物质.成熟种子含淀粉8.4%、葡萄糖6.7%、果糖4.2%、多糖0.02%、二糖0.01%;含肉豆蔻酸10.6%、棕榈烯酸4.1%、亚麻酸2.4%、硬脂酸1.9%、油酸1.1%、亚油酸0.4%.银杏种子富含15种氨基酸,成熟种子中总含量为1.56g·100g^-1FW,其中以赖氨酸、天门冬氨酸、丙氨酸、精氨酸、组氨酸、谷氨酸、异亮氨酸的含量较高,它们的含量依次为0.287%、0.163%、0.136%、0.133%、0.123%、0.115%、0.095%.     

条斑紫菜藻红、藻蓝蛋白逐级放大的纯化工艺

采用“破碎-盐析-层析”的方法纯化条斑紫菜藻胆蛋白,并在提取规模上逐步放大。首先在综合比较凝胶层析去盐效率后,从Sephadex G-25、G-100、S-300和CL-6B中选择G-25作为实验流程中的去盐填料,其次将提取流程的初试原料条斑紫菜量逐步放大,选取了1g、20g和400g三个量,结果表明随着初试紫菜量逐步放大,最终所得藻胆蛋白中吸收光谱纯度>3.2的蛋白产率依次提高,其中400g冻干紫菜的藻红蛋白产率为0.323％,藻蓝蛋白产率为0.148％。由此认为该实验工艺流程具有规模放大的潜力,这为高纯度藻胆蛋白的规模生产提供了一条可行的方案。     

条斑紫菜R-藻红蛋白提纯工艺研究

对条斑紫菜叶状体R-藻红蛋白提纯方法进行了研究和分析。首先分别采用冻融法、化学试剂法、溶胀法等单一及组合细胞破碎方法对条斑紫菜细胞进行破碎,结果表明溶胀 组织捣碎法效果最佳。其次用25%～60%饱和度范围内的硫酸铵沉淀法粗提藻红蛋白,发现25%～45%硫酸铵分步沉淀法效果最好,再经结晶法盐析纯度(D565nm/D280nm)达到2.088。盐析液用SephadexG-25层析柱脱盐,再经羟基磷灰石(HA)柱层析,纯度可达到4.98。R-藻红蛋白的最大吸收峰在565nm,其室温荧光发射峰为578nm。SDS-PAGE结果显示,R-藻红蛋白可分为α、β两个亚基,Mr分别为17.0×103和19.0×103。     

坛紫菜中别藻蓝蛋白的纯化及洗脱组分光谱研究

以福建省平潭县坛紫菜(Porphyra haitanensis)为材料,采用硫酸铵分级分离和柱层析法纯化别藻蓝蛋白(APC),并对纯化的条件进行了详细的探讨。研究结果表明:采用30%~35%饱和硫酸铵沉淀、Tris-HC l(pH=8.0)作为洗脱缓冲液、DEAE-Sephadex-A-50作为层析介质,所获得的APC的纯度和回收率分别为3.50和70.2%;SDS-PAGE表明APC有α和β两个亚基,分子量分别为18.9 kD和17.7 kD。因此该方法对于从坛紫菜中快速纯化APC是适合的。采用光谱分析研究柱洗脱组分,结果表明:坛紫菜中含有分子结构为(αβ)6γ的“双峰型”R-PE,含有结构为(αβ)3的R-PC,含有结构为(αβ)3的APC-Ⅱ。     

利用脱落酸和冷适应提高坛紫菜丝状体种质的冻存效率

为验证脱落酸(ABA)和冷适应能否提高紫菜丝状体种质的冷冻保存效率,研究以坛紫菜(Pyropia haitanensis)自由丝状体为材料,在20℃,光强40μmol·photons/(m2·s),在光周期12L﹕12D条件下以ABA(100μmol/L)处理48h或4℃暗培养6d,随后进行–80℃冷冻保存实验.通过连...     

两种藻胆蛋白对人喉癌Hep-2细胞的光动力杀伤效果

从条斑紫菜中提取高纯度R-藻红蛋白(R-PE)和R-藻蓝蛋白(c-pc),采用MTT法测定主要研究了不同浓度(10、25、50和100μg/ml)R-PE和C-PC分别介导的光动力效应对人喉癌Hep-2细胞的生存率的影响.实验结果显示,两种藻胆蛋白的光动力作用对Hep-2细胞具有杀伤作用.在浓度为100μg/ml,照射剂量为5OJ/cm2的条件下,藻蓝蛋白对应的细胞存活率为64%.藻红蛋白对应的仅为57%;单用碘钨灯处理,Hep-2细胞的存活率达到86.9%;而单独使用这两种藻胆蛋白处理Hep-2细胞,培养24h后,低浓度藻胆蛋白(10、25μg/ml)对细胞的抑制效果不明显,高浓度对细胞生长具有一定的抑制效果,抑制率为68%.实验证明条斑紫菜R-藻红蛋白和C-藻蓝蛋白具有可开发人喉癌治疗光敏剂应用前景.     

坛紫菜hsp70基因真核表达载体的构建与转化

坛紫菜是极具经济效益的大型海藻,生活在环境多变的潮间带,易受到温度、渗遗压和辐射等因素剧烈变化的影响,经常处于逆境胁迫中.热休克蛋白70(HSP70)是生物体内一种重要且高度保守的应激因子,作为分子伴侣在胁迫条件下首先被诱导出来,在逆境胁迫调节中起着重要的作用.构建紫菜hsp70基因真核表达体系对于了解该基因在紫菜抗逆过程中的作用有重要意义.利用PCR技术扩增得到大小为1.89 kb的坛紫菜hsp70基因,将其克隆至pMD18-T载体上测序.从测序正确的菌株中提取质粒,经限制性内切酶Sma Ⅰ和Not Ⅰ进行消化,将目的基因与真核表达质粒p181AINE连接,获得重组真核表达质粒p181-hsp70.通过菌落PCR、双酶切及测序等方法进行鉴定,结果表明重组真核表达质粒p181-hsp70构建成功.制备酵母感受态,将重组质粒电激转入酿酒酵母中,酵母菌落PCR结果显示电激转入成功.     

紫菜多糖提取的研究

研究了热水浸提法提取紫菜多糖的最佳提取工艺,同时,对粗多糖进一步分离,并测定红外光谱图。实验表明：用热水浸提法提取的多糖产率在0．87％-2．55％之间,且多糖浸提液毫无凝固性。当料液比为1：30（g／mL）,温度为95℃,pH值为7,浸提时间为1．5h时提取的效果最好,得率可达2．546％。从紫菜粗多糖中可分离出两种多糖PP1和PP2,其中PP2的红外光谱图与标准琼脂糖样品相类似,而PP1的红外光谱图与PP2存在着较大的差异。