2个芹菜品种泛变应原Api g 4基因的克隆与分析

从芹菜(Apium graveolens Linn.)品种‘津南实芹’(‘Jinnanshiqin’)和‘美国西芹’(‘Meiguoxiqin’)中分别克隆获得泛变应原基因Api g 4;2个品种的Api g4基因均包含1个长度为405 bp的开放阅读框,二者间有3个核苷酸位点的差异.2个品种的Api g4基因均能编码134个氨基酸,但二者编码的氨基酸序列有2个位点的差异.多重比对以及进化树分析结果均表明:2个芹菜品种Api g 4基因编码的氨基酸序列与其他植物的泛变应原氨基酸序列同源性较高,氨基酸序列高度保守;与同科植物欧芹[Petroselinum crispum (Miller) Nyman ex A.W.Hill]和胡萝卜(Daucus carota Linn.)的泛变应原氨基酸序列的同源性均达到90％以上,在进化树上也归为同一支.2个品种的泛变应原Api g 4均为疏水性蛋白,具有相似的三维空间结构,均包含3个α螺旋和7个β折叠.实时定量PCR分析结果显示:Api g 4基因在‘津南实芹’和‘美国西芹’根中的表达水平均最高,在茎和茎尖分生组织中的表达水平相对较低,在叶中的表达水平很弱,且2个品种间同一组织的Api g4基因表达水平也有差异,表明Api g 4基因的表达具有明显的组织特异性.     

异位性皮炎患者血清变应原过筛检测结果及其临床意义

目的:探讨异位性皮炎(AD)患者的血清嗜酸细胞阳离子蛋白(ECP)、总IgE、吸入性变应原Phadiatop和食物性变应原fx5E间的相关性。方法:随机选取我院门诊就诊和住院治疗的AD患者60例,选取健康体检者30例为对照组,同期检测ECP、总IgE、Phadiatop和fx5E血清浓度并比较。结果:AD患者血清ECP和总IgE水平均明显高于正常对照组(P<0.05);患者组中血清ECP与总IgE之间无相关性;Phadiatop在患者组中阳性率为86.67%,fx5E阳性率为18.33%。结论:AD患者血清ECP水平是反映嗜酸粒细胞活化和过敏状态的敏感指标,能更有效地监测AD患者病情变化与疗效。吸入性和食物性变应原均可引起AD,尤以吸入性变应原为主。对AD患者进行CAP系统中变应原过筛检测,是AD防治的重要手段之一。     

表皮葡萄球菌对大鼠变应原敏感性的影响

目的筛选具有较好抑制金黄色葡萄球菌效果的表皮葡萄球菌,研究通过鼻腔进行表皮葡萄球菌调节观察大鼠对变应原敏感性的效果。方法由鼻腔拭子稀释液分离筛选得到的9株表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis),使用上清液抑制法选取抑制金黄色葡萄球菌效果最好的表皮葡萄球菌做体内实验。将Wistar大鼠分为阴性组、模型组、表葡调节组。模型组、表葡调节组使用OVA建立呼吸道炎症模型,使用表皮葡萄球菌DMSA16001进行滴鼻调节2周,同时用PBS进行滴鼻对照。统计抓鼻和喷嚏数,用ELISA进行肺灌洗液(BALF)和外周血IgE的检测。结果 (1)不同株的表皮葡萄球菌均对金黄色葡萄球菌有抑制作用,表皮葡萄球菌DMSA16001对金黄色葡萄球菌的抑制率最高。(2)与模型组相比,表葡调节组的抓鼻数显著下降(t=2.173,P=0.049),喷嚏数有下降趋势,表葡调节组的肺灌洗液和外周血血清的IgE水平均呈现下降趋势。结论对金黄色葡萄球菌有抑制作用的表皮葡萄球菌能使OVA造模的哮喘大鼠对变应原敏感性降低。     

青岛地区慢性荨麻疹患者食物不耐受结果分析

目的:探讨青岛地区慢性荨麻疹患者与食物不耐受的相关性。方法:选取慢性荨麻疹患者496名,采用酶联免疫吸附试验检测血清中14种食物特异性IgG。结果:385例患者食物不耐受阳性,以鸡蛋、牛奶、螃蟹、鳕鱼、大豆为主,分别占55.0%、28.6%、26.8%、19.5%、15.1%;不同年龄组中不耐受的食物所占的比例不同;其中,儿童组:以鸡蛋(84.0%)、牛奶(59.0%)、螃蟹、大豆(16.0%)、鳕鱼(15.3%)为主;青年组:以鸡蛋(55.1%)、牛奶(29.1%)、螃蟹(27.6%)、鳕鱼(22.8%)为主;中年组:以鸡蛋(39.9%)、螃蟹(32.5%)、鳕鱼(18.4%)、大豆(12.9%)为主;老年组:以螃蟹(35.5%)、鸡蛋(27.4%)、大豆(19.4%)、鳕鱼(17.7%)为主。结论:通过检测分析患者血清中特异性IgG,发现青岛及其周边地区慢性荨麻疹患者不耐受的食物以海产品为主,且随年龄增长其敏感性逐渐增加。     

德国小蠊变应原Bla g 8的克隆表达及进化分析

通过5’-RACE获得德国小蠊变应原Bla g 8基因的全长cDNA序列,进行生物信息学分析,构建原核表达载体,诱导重组蛋白表达,建立系统进化树,为进一步研究奠定基础。通过5’-RACE技术,PCR扩增获取编码德国小蠊变应原Bla g 8蛋白的全长cDNA序列;采用生物信息学方法分析预测Bla g 8蛋白的信号肽、疏水性、跨膜区、二级结构、三级结构;建立系统进化树;构建原核表达载体pET32a-B8,IPTG诱导重组蛋白表达,并用His-tag抗体Western blotting验证。结果显示,获得编码德国小蠊变应原Bla g 8的全长cDNA序列,其完整阅读框含618个碱基,编码205个氨基酸。序列分析显示该蛋白,肌球蛋白轻链,具有EF手蛋白保守功能域。IPTG诱导获得重组蛋白。获得德国小蠊Bla g 8的完整cDNA序列,成功构建重组原核表达质粒pET32a-B8,并表达出融合蛋白。     

中国武汉地区葎草花粉变应原蛋白质组分的双向电泳分析

应用蛋白质双向电泳的分析技术对武汉地区生长的主要过敏原———葎草(Humulus scandensLour.)花粉的蛋白质组分进行了分析。应用三氯乙酸法提取葎草花粉总蛋白质,通过等电聚焦和第二向SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析获得了完整的葎草花粉全蛋白质图谱。应用专业分析软件(Im ageM aster 2D)对电泳图谱分析表明:通过等电聚焦和第二向SDS-PAGE电泳,有122个不同的蛋白质组分被检测出来,并进一步确定每个蛋白质相应的分子量、等电点和相对含量。研究中获得的高分辨率的双向电泳图谱是我国葎草花粉变应原蛋白质第一张完整的蛋白质图谱,将为今后葎草花粉中致敏蛋白质的检测、分离、基因克隆和变应原的标准化奠定基础。