高等植物线粒体与细胞核和叶绿体之间遗传物质的水平转移

在线粒体基因组中存在着来自细胞核和叶绿体的DNA,这些外源DNA的存在增加了线粒体基因组的复杂性.概述了近年来关于线粒体与细胞核和叶绿体之间遗传物质水平转移方面的研究现状.     

携带猪β干扰素基因的鸡输卵管生物反应器逆转录病毒载体的构建

为构建携带猪β干扰素基因的鸡输卵管生物反应器逆转录病毒载体,用PCR技术扩增了猪β干扰素基因和卵清蛋白5调控序列,然后将其重组到切除了P70启动子的逆转录病毒载体pLNHX中。用酶切和PCR等方法对重组质粒进行鉴定,结果表明,卵清蛋白5‘调控序列和猪β干扰素基因已正确克隆至逆转录病毒载体pLNHX中。为进一步制备高滴度,高感染性的逆转录病毒,从而制作鸡的输卵管生物反应器奠定实验基础。     

线粒体DNA聚合酶的起源研究

随着新的DNA聚合酶A家族成员的加入,家族内部的系统发育关系需要重新检查。分析显示：在真核生物演化的不同阶段,线粒体DNA聚合酶基因可能通过水平基因转移方式起源于不同类群的生物。原始真核生物线粒体DNA聚合酶基因可能来源于细菌,植物线粒体DNA聚合酶基因可能从质粒获得,而真菌和动物线粒体DNA聚合酶基因可能起源于T3/T7相关噬菌体。     

人糖皮质激素β受体基因正、反义重组逆病毒载体构建

为研究人糖皮质激素受体hGRβ亚型的功能及其作用机制,用L-PCR方法从人胚脑表达文库内扩增hGRβ基因全长约2．4kb的cDNA片段,克隆至pGEM-Teasy载体;经限制性核酸内切酶谱证实后,进一步将其亚克隆至逆病毒载体pLXSN中,并经测序证实,为进一步的基因转移和基因治疗研究准备材料。     

动脉粥样硬化症治疗性疫苗的研究进展

动脉粥样硬化是引起心血管疾病的病理学基础,临床上已有多种药物治疗的方法。基因治疗与疫苗治疗是最新发展的治疗方法,目前相关研究十分活跃,CETi-1疫苗是美国Avant公司研究开发的抗动脉粥样硬化的肽疫苗,由破伤风毒素的Th细胞表位14个氨基酸连接人胆固醇酯转移蛋白B细胞表位的16个氨基酸,并在N端加1个半胱氨酸构建而成。它注入人体后可以引起人体免疫反应,产生能结合CETP的抗体,抑制高密度脂蛋白向低密度脂蛋白的转化,因而具有抗动脉粥样硬化的生物学效应。     

特异性下调GRP94对人大肠癌细胞生物学特性的影响

为观察GBP94对培养的人大肠癌细胞系CCL229生物学特性的影响,将特异性裂解GBP94 mRNA翻译起始区的核酶,用脂质体介导的转染方法导入培养的CCL229细胞中。在确定获得稳定转染株后,我们检测了细胞生物学特性的变化。结果为：(1)转染GRP94核酶的细胞在A23187诱导16h后,细胞生长率显降低。(2)核酶表达细胞诱导后的聚集能力明显下降。(3)核酶表达细胞在A23187诱导后,停滞在G0／G1期的比例明显升高。结论为GBP94与应激的大肠癌细胞的生长和侵袭能力密切相关;特异性下调GBP94能改变人大肠癌细胞系CCL29的一些生物学特性。实验结果为深入研究GRP94与肿瘤细胞发生、发展和转移的关系奠定了基础,在癌症的基因治疗上将具有一定意义。     

吸水链霉菌Streptomyces hygroscopicus 17997中噬菌体基因转移系统的建立及其应用

由吸水链霉菌Streptomyces hygroscopicus 17997产生的格尔德霉素geldanamycin(GA)属安莎类抗生素,具有良好的抗肿瘤和抗病毒活性。本文应用链霉菌温和噬菌体ΦC31衍生的KC515载体,在吸水链霉菌S．hygroscopicus 17997中建立并优化了S．hygroscopicus 17997的基因转染体系。利用所建立的基因转染体系,以基因阻断技术从S．hygroscopicus 17997基因文库含有多组PKS基因柯斯质粒中,鉴定了与GA PKS生物合成相关基因的柯斯质粒,该工作为GA生物合成基因簇的克隆奠定了基础。     

根癌农杆菌致病基因及其生物学功能分析

用转座子标签技术克隆了位于农杆菌（A-208株）染色体上的致病基因acvB、abvA、chvA简单介绍克隆技术的研究思路和策略。染色体基因是农杆菌吸附到植物细胞表面所必需的基因,当某一基因发生突变时,就不能完成贴壁反应而失去毒性。由于转座子Tn5的插入,导致染色体毒性基因失活,最终使农杆菌感染后的受体细胞不能致瘤。用实验证据阐述各基因在T-DNA形成、转移、整合、表达等过程中担负的重要作用。对延宕至今的T-DNA穿壁问题作了推测：植物细胞壁表面可能存有T-DNA的天然穿壁孔道。     

重组腺病毒介导VEGF121 cDNA体外转移与表达

构建携带VEGF12 1cDNA重组复制缺陷型腺病毒表达载体 ,制备重组腺病毒 ,该腺病毒能介导VEGF12 1cDNA基因促进人脐静脉血管内皮细胞增殖 ,促进毛细血管管腔样结构形成 .ELISA检测表明VEGF12 1cDNA基因表达产物分泌至培液上清 ,并显示强烈血管通透作用 .为进一步利用重组腺病毒介导VEGF12 1cDNA进行缺血性疾病的基因治疗奠定良好的基础     

大肠杆菌磷酸果糖激酶基因在极端嗜酸性氧化硫硫杆菌中的表达

构建了含大肠杆菌磷酸果糖激酶(EC 2.7.1.11)基因pfkA的重组质粒pSDK1,利用大肠杆菌pfk缺陷株筛选含目的基因的重组质粒,通过接合转移的方式将其导入氧化硫硫杆菌TtZ2中,接合转移频率达2.6×10-6。重组质粒在TtZ2中有较好的稳定性,在无选择压力条件下传代50次基本保持稳定(重组质粒保留68%以上)。酶活性测定、SDSPAGE及RTPCR结果表明,pfkA基因在氧化硫硫杆菌中得到表达,但其表达水平低于大肠杆菌。葡萄糖可促进含pSDK1的氧化硫硫杆菌TtZ2的生长,而对照菌株的生长则未受明显影响,说明重组菌可部分利用葡萄糖作为碳源生长。