乙肝病毒x基因致肝细胞癌机理探讨

构建HBx基因真核表达载体, 导入HepG2细胞中, 无血清培养同步化后, Western 杂交检测HepG2-X细胞IGF-ⅠR, PCNA和VEGF表达增强, 但无p21CIP1/WAF1表达. 流式细胞检测细胞周期, HepG-X0细胞70%进入G0～G1期, 而HepG2-X细胞仅56%进入G0～G1期, 与血清培养亲本HepG2细胞几乎相同. HBx基因增强IGF-ⅠR表达, 通过信号通路到细胞核, 同时使PCNA表达增强, p21CIP1/WAF1表达抑制, 推进细胞周期, 使G0～G1细胞明显减少. HBx基因增强VEGF表达, 通过旁分泌作用使血管内皮增生; 以上可能是HBx蛋白致HCC 的机理之一.     

抗登革病毒2型E蛋白单克隆抗体的制备和生物学特性的鉴定

为了制备可用于胶体金快速检测试纸条的抗登革病毒2型（DEN2）E蛋白单克隆抗体（mAb）,通过基因克隆获得E基因与质粒pET32a（＋）的重组质粒,将重组质粒转化入大肠杆菌BL21,IPGT诱导表达重组蛋白。以DEN2重组E蛋白免疫BALB／c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗DEN2E蛋白的mAb,以间接ELISA法和Western blot进行mAb特异性鉴定;同时采用间接ELISA法鉴定mAb的Ig亚类。结果表明获得1株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞（7C7）,其抗体亚类为IgG1。Western blot显示该株mAb能特异识别重组pET32a-DEN2E蛋白。因此,成功制备出抗DEN2E的1株mAb,为建立快速特异橙测登革病毒感染的实验方法提供了有力的工具。     

HBV前S2蛋白单克隆抗体的制备和生物学特性的鉴定

目的克隆表达HBV前S2蛋白,用纯化的重组蛋白GST-S2免疫BALB/C小鼠,通过杂交瘤技术制备抗HBV前S2蛋白的单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性.方法利用含双拷贝乙肝病毒adw2亚型基因全序列的质粒pEcob6,经PCR方法扩增出HBV前S2片段,在GST表达系统中表达,表达产物用谷胱甘肽亲和层析纯化后,用于免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗前S2蛋白的mAb,采用间接ELISA方法和Western blot进行mAb特异性鉴定;同时采用间接ELISA方法鉴定mAb相对亲和力.结果获得一株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞7A6;相对亲和力均在107以上.Western blot显示该株mAb能特异识别重组前S2蛋白.结论成功地制备出抗HBV前S2蛋白的一株mAb.     

GABA促进成年小鼠SVZ来源的神经干细胞增殖

通过Alamarblue、BrdU掺入免疫荧光双标法、流式细胞术检测了抑制性神经递质GABA（γ-aminobutyricacid）对成年小鼠脑室下区（sub ventricular zone,SVZ）来源的神经干细胞（neu—ral stem cell,NSC）增殖的影响。结果表明,成体NSCs被不同浓度的GABA和BICC干预后,GABA组增殖较空白对照组明显增强。BICC组的增殖则减弱;GABA组作用后增殖活跃期的NSCs比例明显高于空白对照组,BICC组增殖活跃期的NSCs比例明显降低沪〈O．05）;GABA作用组的处于s—G2期的细胞比例较对照组显著增加（P〈0．05）。该研究表明,GABA能促进成年小鼠SVZ区来源的NSCs进入增殖活跃期从而促进其增殖。