强化能力培养的微生物学混合式教学实践

微生物学课程强调实践和应用性,在重视以传统教学方式进行知识体系讲授的基础上,需加强并有效考核学生实践创新能力培养,从而服务于本专业人才培养需求。本教学改革从多个方面探索实践：明确课程能力培养目标,树立以学生为中心,全课程贯穿课程思政,重视科教融合的教学理念;充分利用信息化教学手段,系统采用“教师讲授LBL+团队学习TBL+案例教学PBL”多种方式打造高效教学课堂;以项目式综合实验优化实践教学,培养学生实践能力和创新能力;构建多元化考评体系量化学生高阶能力的培养。通过教学实践,显著提高了教学效果,激发了学生的学习兴趣,实践创新能力得到明显提高,在学科竞赛和论文发表中取得了较好成绩,为培养具有专业特色的人才奠定了良好的基础。     

基于CRISPR/Cas13a的EML4-ALK融合基因检测方法的建立

[目的]构建基于CRISPR/Cas13a蛋白的SHERLOCK技术平台，并将其应用于肺癌EML4-ALK融合基因的检测。[方法]构建EML4-ALK融合基因的质粒标准品；利用RPA和PCR技术分别扩增目的基因后进行SHERLOCK检测并比对结果，比较基于RPA和PCR扩增的SHERLOCK检测EML4-ALK融合基因的灵敏度，评估SHERLOCK检测目的基因及多种非目标基因的特异性。[结果]成功构建EML4-ALK融合基因表达质粒标准品；基于RPA和PCR扩增的SHERLOCK检测EML4-ALK融合基因的相对荧光值无显著差异，最低检测下限为10 copies/μL,且在5 min内荧光达到平台期；SHERLOCK技术仅对EML4-ALK融合基因有阳性检测信号，对EML4、ALK、EGFR T790M和EGFR L858R基因无阳性检测信号。[结论]基于SHERLOCK技术的EML4-ALK融合基因检测方法具有特异性强、灵敏度高、检测时间短等优势，有望为肺癌EML4-ALK融合基因的早期诊断提供重要依据。     

彩超与GGT联合检测对酒精依赖患者酒精肝的诊断价值

目的:研究分析彩超和谷氨酰转肽酶(GGT)联合检测对酒精依赖患者酒精性脂肪肝诊断的临床意义。方法:对2013年5月-2014年4月于我院住院并诊断为酒精依赖的患者39例(研究组)行肝脏彩超及GGT检测,另选取同期来源于本院职工、进修医护人员40例为对照组,对其结果进行分析。结果:研究组血清GGT为(189.95±226.52)U/L,显著高于对照组的(26.85±18.94)U/L,差异有统计学意义(t=4.54,P0.001);研究组中彩超诊断为脂肪肝者的GGT水平与非脂肪肝者有明显差异(P0.05),且高于对照组中的脂肪肝者,差异有统计学意义(P0.05)。结论:对于酒精依赖患者,血清GGT是敏感性较高的检测指标,GGT的检测有利于酒精性疾病的早期发现。彩超与GGT联合检测能提高临床对酒精性脂肪肝的检出率。     

房颤患者心房肌细胞的原代培养与应用

探索成功培养房颤(atrial fibrillation,AF)患者原代心房肌细胞的方法,能够为房颤发病机制的研究奠定实验基础。取心胸外科行迷宫手术患者的左心耳,利用I型胶原蛋白酶消化法培养房颤患者的原代心房肌细胞,通过免疫组化进行鉴定,同时对培养的心房肌细胞进行初步研究。与动物实验相反,房颤患者心房肌细胞缝隙连接蛋白40(connexin40,Cx40)及Kv1.5钾离子通道蛋白的表达量均降低。由此可见直接研究成人房颤患者的心房肌细胞具有更高的可靠性,同时也证明了房颤患者心房肌细胞的培养是研究其发病机制的基础。     

基于流式细胞技术SARS-CoV-2假病毒中和试验方法的建立

严重急性呼吸综合征冠状病毒2 (Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2)是新型冠状病毒肺炎感染（Coronavirus disease 2019, COVID-19）的致病病毒。面对此类高传播风险及高致病性病毒，常采用复制缺陷型假病毒替代活病毒用于疫苗及药物的抗病毒活性评估。本研究旨在建立了一种基于流式细胞技术（Flow cytometry, FCM）的高通量中和试验方法。使用HIV-1慢病毒骨架蛋白包装系统，将psPAX2、pLVXeGFP、SARS-CoV-2 S三质粒共转染HEK293T细胞，包装一种带增强型绿色荧光蛋白（Enhanced green fluorescent protein, eGFP）的假病毒。通过优化S蛋白密码子序列、采用S蛋白C-端氨基酸（Amino acids, AA）截短和包装时间的优化，确定了假病毒包装最适条件。包装假病毒的滴定采用293T-hACE2细胞作为感染靶细胞，经流式细胞仪测定eGFP荧光细胞比率即为感染假病毒细胞比率。采用包装的野生型（Wild type, WT...     

海参多糖抑制人肾癌细胞A498的生长转移作用机制

肾细胞癌(RCC)是最常见的恶性癌之一,癌症转移是目前导致肾癌患者死亡的主要原因之一。MMP-9被发现在许多具有侵袭性和转移能力的人类癌症中过表达,其表达和分泌受到NF-κB调控;VEGF在维持原发性癌和转移瘤生长所需的血管生成中发挥重要作用,其表达也受到活化的NF-κB调节。海参的多种活性物质在抗氧化、抗菌和抗癌方面都有出色的作用,而抗癌的主要机制则包括诱导癌细胞凋亡、抑制癌细胞生长、减少癌细胞转移等。本研究通过利用不同浓度的海参多糖处理人肾癌细胞A498,采用MTT细胞增殖实验、粘附实验、迁移实验和小室侵袭实验,研究了海参多糖对A498细胞的生长转移的影响;采用蛋白印记法检测了海参多糖对A498细胞内MMP-9、NF-κBp65和VEGF表达水平的影响。结果表明,海参多糖能够显著抑制A498细胞的增殖活力、粘附能力、迁移能力和侵袭能力,并且全都表现出明显的剂量依赖性;中浓度(100μg/mL)和高浓度(200μg/mL)的海参多糖能够显著下调A498细胞内MMP-9、NF-κBp65和VEGF的表达。这些结果说明海参多糖能有效抑制人肾癌细胞A498的生长、转移和侵袭,可能的机制是通过抑制NF-κB信号通路下调MMP-9和VEGF的表达,从而发挥抗癌细胞转移的作用。     

胎盘屏障建立与维持的机制

胎盘是妊娠期维持胎儿正常生长发育和母亲健康的临时性器官,直接介导了母胎之间的对话。胎盘防御屏障功能的建立与维持是正常妊娠维持的重要基础,一方面,胎盘发挥了抑制母体对胎儿免疫排斥的作用,同时,胎盘需要抵抗致病微生物的感染。本文从胎盘发育的角度出发,从细胞学、免疫学等多重领域探讨了胎盘防御屏障建立及功能维持的细胞和分子机制,重点介绍了胎盘合体滋养层细胞抗感染的作用方式,包括细胞自噬、外泌体途径、细胞连接及细胞骨架等;同时介绍了胎盘屏障功能异常与子宫内感染尤其是TORCH致病微生物感染的致病关联。     

细菌分裂蛋白及FtsZ抑制剂的研究进展

近年来,由于抗生素的滥用,耐药性细菌广泛出现,对人体健康的威胁日益严峻.随着临床用药的选择不断减少,迫切需要开发新的抗菌药物,特别是新作用机制的抗菌分子来对抗出现的耐药菌.细胞分裂温度敏感.突变体Z (filamenting temperature-setnsitive mutant Z,FtsZ)作为细菌分裂的必需蛋白质,是目前研究最热门的作用靶点之一.FtsZ是一高度保守的蛋白质,在大多数原核细胞的细胞分裂中发挥着关键作用,本文回顾了细菌分裂蛋白的结构特点及其生物学功能,并综述了以FtsZ为靶点的抗菌药物研究的进展.     

新型骨缺损斑马鱼模型构建及修复过程的OCT活体评价

动物模型广泛应用于人类疾病的病因、发病机制、防治技术和防治药物的探索研究中,新型人类疾病动物模型的开发将促进相关研究取得进展。本研究探索建立了一种基于斑马鱼的新型骨缺损模型,并利用光学相干层析成像(OCT)技术,对骨缺损模型的构建过程和修复过程进行活体评价。试验随机选取13条体型一致的成年斑马鱼作为研究对象,其中10条鱼用于构建骨缺损模型,剩余3条鱼作为对照。首先,对每一条正常斑马鱼的颅骨进行OCT扫描成像,然后利用自行研制的工具在模型组斑马鱼的视顶盖区域的颅骨上打开一个直径为200μm左右的孔,形成骨缺损。分别在第2、5、9、11、14、21天利用OCT对每一条斑马鱼的颅骨损伤情况进行评估。恢复21 d后的斑马鱼用于病理试验,将颅骨缺损区域的病理结果与OCT结果对照,新生骨清晰可见。试验结果表明,OCT可以高分辨率地活体评估骨缺损恢复的过程,OCT成像结果与病理切片结果高度匹配。综上所述,斑马鱼模型和OCT成像技术结合的策略能为骨缺损疾病的研究提供新的助力。