3D-SIM结构照明超分辨率显微镜实现蛋白质在植物亚细胞器内的定位

基因表达产物蛋白质的亚细胞定位是解析基因生物学功能的重要证据之一。近年来出现的超分辨率光学成像技术已成功应用于人类和动物细胞中,预示着显微成像技术继激光共聚焦技术后的又一重要进步。由于植物细胞的特殊性和成像技术的研发取向,超分辨率光学成像技术在植物细胞蛋白质亚细胞定位的应用尚未见报道。该研究利用Delta Vision OMX显微镜技术,克服了叶绿体基粒中叶绿素自发荧光与融合蛋白荧光不易区分的缺陷,解决了受分辨率局限无法将植物细胞中蛋白质在亚细胞器内可视化精确定位的技术难题,成功地将植物蔗糖合成酶Zm SUS-SH1定位在烟草表皮细胞叶绿体基粒周围。该研究同时建立了一套基于撕片制片法的简便OMX显微镜制片方法,并针对OMX显微成像技术在植物细胞中蛋白质亚细胞定位的应用进行了讨论。     

兔角膜缘干细胞的研究进展

目前,角膜移植是临床上治疗角膜疾患的最有效途径,但供体角膜非常有限。新近兴起的干细胞技术,为组织工程角膜的研制和应用提供了契机。对于以角膜缘干细胞缺乏或功能障碍为特征的疾病也有治疗效果。采取角膜缘干细胞移植应是一种合理有效的治疗手段。本文主要介绍了兔角膜缘干细胞的体外分离、培养、鉴定及一些生长因子对其增殖的影响。     

兔角膜缘干细胞体外分离、培养和生物学鉴定的实验研究

通过体外培养兔角膜缘干细胞,观察其生物学特性,建立兔角膜缘干细胞的体外培养方法。方法0．25%胰蛋白酶消化角膜缘组织,用含15%胎牛血清的DMEM和F12(1:1)的培养液(DF)对兔角膜缘干细胞进行体外培养,形态学观察,培养的细胞早期使用AEl/AE3、晚期使用AE5角蛋白特异的单克隆抗体)作细胞免疫化学鉴定。结果:原代培养细胞48h后开始贴壁,部分细胞由圆形变为卵圆形或长梭形;10～14d形成单层,细胞呈圆形、卵圆形,类角膜上皮细胞;细胞传到第5代左右开始出现老化状态;免疫细胞化学染色:培养的细胞早期AEl/AE3呈阳性而少部分细胞AE5呈阳性,培养的细胞晚期AE5呈阳性。结论:本实验初步建立了一套兔角膜缘干细胞的体外培养方法。     

中国长白山乌苏里蝮蛇金属蛋白酶解整合蛋白Ussurin基因克隆和序列分析

采用Clontech链转换建库试剂盒 ,建立了中国长白山乌苏里蝮蛇毒腺cDNA文库 ,从中克隆了金属蛋白酶 解整合蛋白Ussurin ,并进行了序列分析。结果显示 ,Ussurin开框读码序列由 14 34bp组成 ,编码 4 78个氨基酸。由核苷酸顺序推导的氨基酸序列可以看出 ,Ussurin最初的翻译产物是酶原前体 ;依次含有 18氨基酸组成的信号肽 ,171氨基酸组成的酶原区和由 2 89氨基酸组成的Ussurin(2 0 0氨基酸组成的金属蛋白酶结构域、16氨基酸组成的间隔区和 73氨基酸组成的解整合蛋白结构域 )。Ussurin的金属蛋白酶结构域含有 3对二硫键 ;解整合蛋白结构域含有 6对二硫键和特征性RGD(精氨酸 甘氨酸 天冬氨酸 )结构。其基因序列和结构域组成与GenBank中蛇毒金属蛋白酶 解整合蛋白呈现高度同源性属于P Ⅱ。氨基酸序列blast比对发现 ,酶原区和解整链蛋白结构域呈现极高的同源性 ,而金属蛋白酶结构域却出现了极高的变异 ,推测这些变异结构区是为了适应不同的底物、不同受体或同一受体的不同结构域     

朗德鹅胆汁的化学成分及金属蛋白酶抑制活性研究

应用多种色谱技术进行分离纯化,从朗德鹅胆汁85％乙醇提取物中分离得到6个化合物。经理化性质和光谱数据分析鉴定为苯乙酸（1）、鹅去氧胆酸（2）、鹅去氧胆酸乙酯（3）、棕榈酸-α-单甘油酯（4）、顺-6-十八碳烯酸（5）、（4E）-2-[2＇-hydroxyhexadecanoylamino]-4-octadecane-1,3-diol（6）。化合物1、3、4和6为首次从该属动物胆汁中分得,其中化合物6为首次从陆生动物胆汁中分得的一种神经酰胺类成分。首次对化合物2、4和5进行抑制金属蛋白酶活性的实验,评价了三个化合物的生物活性。     

不同周龄Balb/c小鼠脏器质量及其变化趋势分析

目的:测定不同周龄Balb/c小鼠主要脏器质量、脏器系数,并进行比较。方法:取120只3周龄、5周龄、7周龄的Balb/c小鼠,雌雄各半,精确测量小鼠体重和主要脏器质量,计算脏器系数。结果:①雌性与雄性Balb/c小鼠脏器质量相比较:3周龄时肝、脾有显著差异(P0.05);5周龄时肝有非常显著差异(P0.01),脾、肺有显著差异(P0.05);7周龄时肝、肺及双肾有非常显著差异(P0.01),心、脾有显著差异(P0.05)。②雌性与雄性Balb/c小鼠脏器系数相比较:3周龄时肝、脾有显著差异(P0.05);5周龄时肝、脾有非常显著差异(P0.01),膀胱有显著差异(P0.05);7周龄时肺、双肾有非常显著差异(P0.01),脾、膀胱有显著差异(P0.05)。结论:随着周龄的增长,Balb/c雌、雄性小鼠之间,存在差异的脏器也在增多。