KANK1对子宫内膜癌细胞增殖及迁移的影响

摘要 目的：研究KANK1在子宫内膜癌中的表达以及对子宫内膜癌细胞增殖及迁移的影响。方法：（1）TCGA数据库分析KANK1在子宫内膜癌中的表达和生存期分析。（2）采用实时荧光定量聚合酶链反应验证转染KANK1质粒的效果。采用Ishikawa和ECC1这两种子宫内膜癌细胞来探讨KANK1对子宫内膜癌的细胞周期和凋亡的影响。通过Western blot检测细胞周期相关蛋白的表达,以及流式细胞术检测细胞周期和凋亡水平。（3）通过Transwell小室实验和划痕实验检测细胞的侵袭和转移能力。结果：TCGA数据库分析发现KANK1在子宫内膜癌中低表达且与患者预后良好相关。过表达KANK1下调了Cyclin D1和Cyclin D2的蛋白水平,并将细胞周期阻滞在G1期。流式细胞术检测发现过表达KANK1组的细胞凋亡水平（Ishikawa：22.7%;ECC1：19.0%）比对照组（Ishikawa：18.1%;ECC1：15.3%）高,差异具有统计学意义。Transwell迁移和侵袭实验结果表明过表达KANK1组的子宫内膜癌细胞侵袭和转移能力减弱。结论：本研究证明了KANK1在子宫内膜癌中发挥抑癌作用。KANK1高表达与子宫内膜癌的预后良好成正相关。KANK1通过抑制癌细胞周期和促进肿瘤细胞凋亡发挥抑制子宫内膜癌增殖的作用。此外,KANK1抑制了子宫内膜癌的侵袭和转移。     

TLR9介导的Myd88信号通路分子在稽留流产患者绒毛组织中的表达及其临床意义

目的:研究TLR9介导的Myd88信号通路在稽留流产患者绒毛组织中的表达及其临床意义。方法:本研究收集了稽留流产患者及正常分娩者的绒毛组织,采用Real-time-PCR及Western-blot方法检测了TLR9介导Myd88信号通路中TLR9、Myd88、TNF-a、NF-κB、IRF1 mRNA和蛋白表达。结果:与正常对照组相比较,TLR9、Myd88、TNF-a、NF-κB、IRF1 mRNA和蛋白在稽留流产组患者绒毛组织中相对表达水平显著升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论:稽留流产的发生与TLR9/Myd88信号通路有关。     

毒毛花苷通过Nrf2抑制子宫内膜癌细胞增殖活性

摘要 目的：通过研究毒毛花苷对核因子2相关因子2 (nuclear factor erythroid 2-related factor 2, Nrf2)的抑制作用,深入探讨其抑制子宫内膜癌细胞增殖的作用机制。方法：（1）采用细胞增殖实验观察不同浓度的毒毛花苷对Ishikawa细胞增殖的影响;（2）通过克隆形成实验观察毒毛花苷对Ishikawa细胞增殖的作用;（3）采用蛋白免疫印迹法检测经毒毛花苷处理后,Ishikawa细胞Nrf2蛋白表达水平的变化。结果：经毒毛花苷处理后,Ishikawa细胞增殖受到显著抑制且呈剂量依赖性。Nrf2蛋白表达下调。结论：毒毛花苷可能通过下调Nrf2蛋白水平,从而抑制子宫内膜癌的恶性生物学行为。     

Keap1-Nrf2信号通路参与子宫内膜癌细胞增殖、转移、耐药机制的研究

目的:研究Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)-核转录因子E2相关因子(Nrf2)信号通路对子宫内膜癌细胞生长、转移及耐药的影响。方法:选择代表I型子宫内膜癌细胞的KLE细胞株和代表II型子宫内膜癌的ARK2细胞株,采用real-time PCR和Western blot法测定两细胞株Keap1和Nrf2基因m RNA、蛋白表达,MTT法检测两细胞株对顺铂耐药性。对Keap1表达更低、耐药性更强的ARK2细胞株的Keap1基因过表达。Real-time PCR、Western blot、平板克隆实验、MTT法、Transwell迁徙、侵袭实验等方法研究ARK2细胞中Keap1过表达对Nrf2及下游靶基因表达、细胞生长、侵袭、耐药的影响。结果:在ARK2和KLE细胞中Nrf2基因m RNA表达无明显差异,ARK2细胞中Keap1基因表达无论是m RNA还是蛋白水平在的表达均要低于KLE细胞株,而Nrf2蛋白水平的表达在ARK2细胞株中则要明显高于KLE细胞株。Keap1表达较低的ARK2细胞较Keap1高表达的KLE细胞耐药性更高。ARK2细胞株中Keap1过表达能够明显下调Nrf2蛋白及下游基因ABCC2、γ-GCS表达;MTT实验和平板克隆实验表明Keap1过表达能够降低ARK2细胞增殖能力;Keap1过表达能够降低ARK2细胞迁徙和侵袭能力;Keap1过表达能够显著提高ARK2细胞对顺铂的敏感性。结论:Keap-Nrf2信号通路在子宫内膜浆液性癌细胞株ARK2中活化程度显著高于子宫内膜样癌细胞株KLE,Keap1对Nrf2蛋白表达调控是基于转录后的,且低表达的Keap1及高表达的Nrf2蛋白和肿瘤细胞的高耐药性有关。在子宫内膜浆液性癌细胞株ARK2中上调Keap1基因表达能够有效的下调Nrf2蛋白及其下游基因的表达,并降低肿瘤细胞的生长、迁徙、侵袭能力,且能提高肿瘤细胞对顺铂的敏感性。     

人脐带间充质干细胞抑制卵巢癌的初步研究

目的:从足月剖腹产分娩新生儿脐带中分离出人脐带间充质干细胞(UC-MSCs),探讨其在体外促进SKOV3卵巢癌细胞凋亡,抑制其增殖的作用。方法:新鲜人脐带洗净后剥离动静脉及脐带外膜,得到脐带Wharton's胶。采用组织块贴壁法分离、纯化得到UC-MSCs细胞,光镜下观察UC-MSCs细胞的形态及贴壁生长情况。收集UC-MSCs细胞培养上清,加入SKOV3细胞共培养后,观察不同作用时间(12 h,24 h,36 h,48 h,60 h,72 h)其体外促进SKOV3卵巢癌细胞凋亡,抑制其增殖的作用。结果:光镜下UC-MSCs细胞成长梭状,单核,并成放射或漩涡状排列。PI染色提示,随着UC-MSCs细胞培养上清对SKOV3卵巢癌细胞作用时间的增加,其发生凋亡的细胞数量增多,且具有统计学意义(P0.05)。MTT实验提示SKOV3细胞增殖活力随UC-MSCs细胞培养上清作用时间的增加而显著下降(P0.05),共培养24 h,48 h,72 h的抑制率分别为17.08%,35.36%,46.83%。结论:UC-MSCs在体外具有明显促进SKOV3卵巢癌细胞凋亡,抑制其增殖的作用。     

OCT4 介导卵泡刺激素对永生化人卵巢上皮细胞株增殖、 凋亡和侵袭能力的影响

目的:探讨OCT4基因对卵泡刺激素作用下的永生化人卵巢上皮细胞株(Moody细胞)增殖、凋亡和侵袭能力影响。方法:将不同浓度的FSH(0、25、50、100mIU/ml)作用于Moody细胞48小时,应用Western-blot技术检测OCT4表达情况。采用慢病毒介导将重组质粒OCT4稳定转染至人卵巢上皮细胞株中,应用Western-blot法鉴定OCT4蛋白表达情况。FSH以50 mIU/ml作为工作浓度,实验对象分为4组:①siCon组,转染空载体的阴性对照组;②OCT4组:稳定转染OCT4基因的Moody细胞组;③FSH+siCon组:以FSH处理的siCon组;④FSH+OCT4组:以FSH处理的OCT4组。采用MTT比色法检测各组细胞的增殖情况,流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况,Transwell侵袭实验检测各组细胞侵袭能力的变化。结果:(1)随着FSH浓度的增加,Moody细胞中OCT4蛋白表达逐渐增高,在FSH浓度为50 mIU/ml时达最高;(2)OCT4基因成功转染至Moody细胞中,经Western-blot检测该基因在细胞中进行蛋白高表达;(3)FSH+OCT4组细胞增殖活性明显增高,同时凋亡率降低,与另外三组相比差异具有统计学意义(P<0.05);(4)在FSH作用下,转染OCT4后明显增强了细胞的侵袭能力,与另外三组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:OCT4介导了FSH对人卵巢上皮细胞增殖、凋亡、侵袭活性的调控。     

FSH通过SATB1调控上皮性卵巢癌ES-2细胞的增殖和侵袭活性

目的:探讨特异AT序列结合蛋白1(specialAT-rich sequence-bindingprotein,SATB1)在卵泡刺激素(Follicle stimulating hormone,FSH)诱导的上皮性卵巢癌ES-2细胞增殖和侵袭中的作用。方法:以Real-time PCR检测不同浓度FSH(0、10、20、40、80mIU/ml)处理后SATB1基因mRNA表达水平的变化。实验分4组:①siCon组,转染si-阴性对照(si-Negative contro1)序列的实验组,对SATB1无干扰作用;②siSATB1组:转染特异性干扰下调SATB1的siSATB1序列;③FSH+siCon组:以FSH处理的siCon组;④FSH+siSATB1组:以FSH处理的siSATB1组。MTT法检测4组细胞的增殖情况,Western blotting技术检测4组细胞细胞周期蛋白(CyclinD1),基质金属蛋白酶2(MMP-2)的蛋白表达情况,Transwell侵袭实验检测4组细胞侵袭能力的变化。结果:1.FSH+siCon组的细胞增殖能力明显高于siCon组的细胞增殖能力,FSH+siCon组的Cyclin D1蛋白相对表达量0.90±0.08明显高于siCon组的0.37±0.01(P均<0.01),提示FSH具有促进ES-2细胞增殖的作用。2.FSH+siCon组的穿膜细胞数(302 12)个明显高于siCon组(139 19)个,FSH+siCon组的MMP-2蛋白相对表达量0.40±0.01明显高于siCon组的0.28±0.02,提示FSH具有促进ES-2细胞侵袭能力的作用。3.随着FSH浓度的增高,SATB1mRNA的表达量逐渐增加,分别为1,1.66±0.04,1.79±0.21,2.31±0.03,以FSH浓度为80mlU/ml时最显著(P<0.05)。4.FSH+siSATB1组的细胞增殖能力明显低于FSH+siCon组的细胞增殖能力,FSH+siSATB1组的Cyclin D1蛋白相对表达量0.22±0.02明显低于FSH+siCon组的0.90±0.08(P均<0.01);FSH+siSATB1组的穿膜细胞数(52 16)个低于FSH+siCon组的(302 12)个,FSH+siSATB1组的MMP-2蛋白相对表达量0.15±0.00明显低于FSH+siCon组的0.40±0.01(P均<0.01),FSH促进ES-2细胞增殖和侵袭的能力由于SATB1基因表达的下降而被阻断。结论:SATB1是FSH作用的重要靶分子,介导FSH对上皮性卵巢癌ES-2细胞系增殖、侵袭活性的调控。     

视黄醇结合蛋白4在病理妊娠中的研究进展

视黄醇结合蛋白4(Retinol binding protein 4,RBP4)是近年来新发现的一种脂肪细胞因子,在动物与人类的研究中均发现其与胰岛素抵抗的发生及糖、脂代谢的调节密切相关,随着机体胰岛素抵抗及糖脂代谢异常程度的增加,RBP4水平上升。在妊娠期,母体脂肪量增加并伴有不同程度的胰岛素抵抗。在正常妊娠时,RBP4随着妊娠的进展而升高,且与胰岛素抵抗程度增加相一致。与正常妊娠相比,妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)患者的RBP4升高更明显,且RBP4的升高水平与GDM预后相关。研究发现早期RBP4的升高可以预测GDM的发生,此外控制RBP4水平可能干预GDM发展。RBP4在妊娠期高血压疾病中升高;RBP4在脐血中的水平与胎儿生长密切相关,在小于胎龄儿中水平下降,在大于胎龄儿中升高;RBP4与早产的关系并不明确。进一步研究RBP4在病理妊娠的作用机制,可为病理妊娠的发生发展和防治提供新方向。     

上皮性卵巢癌中TFAP2A对hTERT表达的调节及其机制研究

摘要 目的：探讨在上皮性卵巢癌中TFA2A对hTERT表达的调节和作用机制。方法：采用免疫组织化学方法检测TFAP2A和hTERT蛋白在卵巢正常、交界及上皮性卵巢癌组织中的表达,采用Western Blot和qRT-PCR技术检测hTERT在敲减TFAP2A基因的SKOV3、CAOV3细胞中的表达水平、检测hTERT在过表达TFAP2A基因的HO8910细胞中的表达水平。在干扰TFAP2A的CAOV3细胞中或过表达TFAP2A的HO8910细胞中分别加入PI3K/AKT信号通路激动剂740-YP或抑制剂LY294002,检测相关蛋白表达变化,探讨TFAP2A、hTERT与PI3K/AKT信号通路的关系。结果：TFAP2A在71.88%的上皮性卵巢癌组织中呈高表达,hTERT在78.12%的上皮性卵巢癌组织中呈高表达; 将hTERT 和TFAP2A的免疫组化评分行Pearson相关性分析,两者间相关系数r=0.78,P＜0.001。Western Blot和qRT-PCR的结果均显示,在SKOV3和CAOV3卵巢癌细胞中,敲减TFAP2A后,hTERT的表达均明显下降,而在HO8910卵巢癌细胞中,增强TFAP2A基因表达后,hTERT的表达均明显上升。在CAOV3和HO8910处理细胞中,分别使用PI3K/AKT信号通路激动剂740-YP 或阻滞剂LY294002处理后,Western Blot 检验hTERT和PI3K/AKT通路蛋白的表达,发现激动剂740-YP 或阻滞剂LY294002可以逆转敲减或过表达TFAP2A引发的PI3K/AKT通路蛋白表达下调或上调,但不能逆转hTERT蛋白表达下调或上调。结论：在卵巢肿瘤组织中,TFAP2A和hTERT在上皮性卵巢癌组织中均呈高表达,且hTERT的表达和TFAP2A成正相关,在上皮性卵巢癌细胞中TFAP2A可调节hTERT的表达,且TFAP2A对hTERT的表达的调节不经由PI3K/AKT通路。