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国内免费 | 815篇 |
出版年
2024年 | 20篇 |
2023年 | 113篇 |
2022年 | 170篇 |
2021年 | 519篇 |
2020年 | 347篇 |
2019年 | 449篇 |
2018年 | 446篇 |
2017年 | 315篇 |
2016年 | 442篇 |
2015年 | 665篇 |
2014年 | 818篇 |
2013年 | 811篇 |
2012年 | 959篇 |
2011年 | 822篇 |
2010年 | 518篇 |
2009年 | 463篇 |
2008年 | 454篇 |
2007年 | 449篇 |
2006年 | 385篇 |
2005年 | 334篇 |
2004年 | 264篇 |
2003年 | 280篇 |
2002年 | 242篇 |
2001年 | 198篇 |
2000年 | 184篇 |
1999年 | 196篇 |
1998年 | 104篇 |
1997年 | 106篇 |
1996年 | 110篇 |
1995年 | 76篇 |
1994年 | 86篇 |
1993年 | 56篇 |
1992年 | 83篇 |
1991年 | 73篇 |
1990年 | 60篇 |
1989年 | 62篇 |
1988年 | 47篇 |
1987年 | 40篇 |
1986年 | 18篇 |
1985年 | 30篇 |
1984年 | 14篇 |
1983年 | 23篇 |
1982年 | 14篇 |
1981年 | 13篇 |
1980年 | 7篇 |
1979年 | 16篇 |
1978年 | 7篇 |
1976年 | 6篇 |
1975年 | 5篇 |
1973年 | 9篇 |
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【目的】抗反转录病毒疗法(ART)能够有效控制人免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus-1,HIV-1)的复制,但是不能将其完全清除。至2012年底,全球仍有3 500万HIV-1感染者,同年约160万人死于艾滋病(Acquired immune deficiency syndrome,AIDS)及其相关疾病。HIV-1感染难以根治的主要原因之一是机体内HIV-1潜伏储存库(Reservoir)的存在。HIV-1潜伏储存库主要由CD4+T细胞和单核巨噬细胞构成,与CD4+T细胞相比,目前研究者对单核巨噬系细胞中HIV-1病毒复制机制尚不明了,且缺乏适宜的研究体系。因此,为探讨单核细胞活化或分化信号对HIV-1复制的影响,我们建立了旨在研究HIV-1前病毒转录调控机制的人单核巨噬细胞系模型。【方法】构建env区域移码突变和nef区域携带EGFP或Nano Luc报告基因的HIV-1 NLn GFP-Kp或NLn Nano Luc-Kp重组病毒,分别感染2种人单核细胞系THP-1或U937细胞。通过有限稀释法制备单克隆细胞系,利用流式细胞术或Nano Luc荧光素酶活性分析检测报告基因的表达。筛选EGFP或Nano Luc阴性表达的细胞克隆,经激活剂佛波酯(Phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)刺激后鉴定潜伏感染的细胞克隆。【结果】研究中鉴定了4个HIV-1潜伏感染的细胞克隆。其中2个是表达EGFP的THP-1克隆,2个是以Nano Luc为报告基因的U937克隆。这些克隆在PMA刺激处理后皆有报告基因的表达,而在恒态条件下未检测到报告基因的表达。【结论】成功建立了4个HIV-1潜伏感染的人单核细胞系克隆,该模型有助于理解单核巨噬系细胞的HIV-1病毒复制机制,可能成为进一步研究HIV-1前病毒转录调控机制的有力工具。 相似文献
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Juvenile hormone III (JH III) plays primary roles in regulation of metamorphosis, reproduction and diapause in Leptinotarsa decemlineata, a notorious defoliator of potato. The neurosecretory cell-borne substance(s) negatively affects the final two steps in JH biosynthesis, catalyzed respectively by an epoxidase CYP15A1 and a juvenile hormone acid methyltransferase (JHAMT). In a few insect species other than L. decemlineata, the inhibitory substance is allatostatin (AS) neuropeptide. In this study, two putative AS genes encoding LdAS-C and LdAS-B precursors were cloned. Both LdAS-C and LdAS-B were expressed in the egg, larvae, pupae and adults, and highly expressed in the brain and the gut. Dietary introduction of double-stranded RNAs (dsRNAs) targeting LdAS-C and LdAS-B successfully knocked down respective target genes. Ingestion during 3 and 6 consecutive days of dsLdAS-C significantly increased the LdJHAMT mRNA levels by 3.8 and 9.9 fold respectively. In contrast, ingestion of dsLdAS-B only slightly increased the LdJHAMT expression level by 1.1 and 1.7 fold. Moreover, after one, two and three days' ingestion of dsLdAS-C, the relative JH levels in the hemolymph of treated larvae were 2.5, 4.2 and 1.9 fold higher than those in control beetles. Furthermore, ingestion of dsLdAS-C and dsLdAS-B significantly affected larval growth and delayed larval development. Thus, we provide a line of experimental evidence in L. decemlineata to support the concept that AS-C acts as an allatostatin and inhibit JH biosynthesis. 相似文献
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