研究: 载脂蛋白E拟肽EpK对apoE-/-小鼠动脉粥样硬化的影响

前期设计合成了一种模拟人载脂蛋白E(apoE)结构域的小分子多肽EpK,体外实验证实该拟肽具有抑制巨噬细胞炎症及增强高密度脂蛋白(HDL)介导细胞胆固醇外流的作用．本文拟借助慢病毒体系分泌性表达EpK,研究EpK在体对apoE基因敲除(apoE^-/-)小鼠动脉粥样硬化斑块的影响．将11月龄雌性apoE^-/-小鼠18只,随机分两组,分别经眼球后静脉丛注射pWPI慢病毒(Lv-GFP对照组)和含EpK的重组慢病毒(Lv-EpK组)．小鼠普食喂养,间隔采血监测血脂状态,检测血浆对氧磷酯酶(PON1)活性,病毒注射18周后小鼠安乐死,从主动脉根部连续冰冻切片及主动脉胸腹段纵剖面(en face)进行油红O染色分析斑块面积,采用实时荧光定量PCR检测小鼠肝脏相关基因的mRNA表达水平,蛋白质印迹检测血浆中apoA-Ⅰ、PON1及血清淀粉样蛋白A(SAA)水平．结果显示：慢病毒感染小鼠可成功在血循环中检测到EpK,与Lv-GFP对照组比较,Lv-EpK组apoE^-/-小鼠的血脂及脂蛋白分布、apoA-Ⅰ水平、PON1活性无明显改变,但EpK组小鼠的主动脉斑块面积较对照组显著减少(主动脉根部斑块面积(0.87±0.07) mm² vs (1.03±0.08) mm²,P < 0.05;主动脉胸腹段斑块占管腔比42.0% vs 55.8%,P < 0.01)．EpK可显著降低血中SAA水平,并抑制肝脏炎症因子TNF?琢和IL-6的表达．结果说明,EpK拟肽具有减退apoE^-/-小鼠动脉粥样硬化斑块的作用,其机制可能与其发挥的抗炎作用有关．