Simultaneous quantification of tiloronoxim and tilorone in human urine by liquid chromatography-tandem mass spectrometry

A simple, sensitive and specific HPLC method with tandem mass spectrometry (HPLC/MS/MS) detection has been developed and validated for the simultaneous quantification of tiloronoxim and its major active metabolite, tilorone, in human urine. The analytes, together with metoprolol, which was employed as an internal standard (IS), were extracted with a mixture solvent of chloroform/ethyl ether (1/2, v/v). The chromatographic separation was performed on a narrow-bore reversed phase HPLC column with a gradient mobile phase of methanol/water containing 15 mM ammonium bicarbonate (pH 10.5). The API 3,000 mass spectrometer was equipped with a TurboIonSpray interface and was operated on positive-ion, multiple reaction-monitoring (MRM) mode. The mass transitions monitored were m/z 426.3-->100.0, m/z 411.3-->100.0 and m/z 268.3-->116.1 for tiloronoxim, tilorone and the IS, respectively. The assay exhibited a linear dynamic range of 1-100 ng/ml for both tiloronoxim and tilorone based on the analysis of 0.2 ml aliquots of urine. The lower limit of quantification was 1 ng/ml for both compounds. Acceptable precision and accuracies were obtained for concentrations over the standard curve ranges. Run time of 8 min for each injection made it possible to analyze a high throughput of urine samples. The assay has been successfully used to analyze human urine samples from healthy volunteers.     

An efficient cloning of DNA fragments by a method based on uracil-DNA glycosylase and endonuclease IV

We introduced a novel method to clone random DNA fragments independent of ligation reaction. The method involves the generation of long protruding ends on PCR amplification DNA. Both oligonucleotides used for the amplification of the vector DNA carried one uracil residue at the tenth position from the 5′ end and this made the creation of the 3′ protruding ends of linearized vector possible by uracil-DNA glycosylase (UDG) and endonuclease IV (Endo IV). 76 groups of annealed oligonucleotides that had ten-nucleotides protruding at 3′-end, which were complementary to those at 3′-end of the linearized vector, were designed. The linearized vector and the annealed oligonucleotide were mixed together to transform E.coli directly without ligation reaction. The number of the clone that grew on the plates had been demonstrated to reach 1 × 10⁵ transformants/μg and 96.1% of transformants harbored the cloned fragments. From the results of transformation, we can confirm that the efficiency of the creation of 3′ protruding ends in our method is high and our cloning method is benefit to produce recombinants easily and efficiently.     

Ac/Ds(GUS)结构介导的水稻启动子捕获系统的建立

构建了基于Activator/Dissociation(β-glucuronidase)[简称Ac/Ds(GUS)]结构的捕获质粒p13B,用于分离水稻基因启动子.以此质粒用衣杆菌介导的方法转化粳稻品种中花11的胚性愈伤组织,对获得的18个独立转化株的T2代植株进行了抗除草剂筛选,从141个抗除草剂转基因植株中用PCR方法检测到其中37株是Ds因子发生了转座的植株,而且这种转座到新位置上的Ds因子是遗传的.初步观察到其中5株的GUS染色呈阳性.     

猪圆环病毒2型ORF2基因在昆虫细胞中的表达及其特性

利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统将圆环病毒2型的ORF2全基因克隆到杆状病毒转移载体pFastBac^TM1中,获得重组转移载体pFast-OFR2,再将其转化进含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中,发生转座作用,经蓝白菌落筛选得到含ORF2基因的重组穿梭载体Bac-ORF2,以脂质体介导的方法将重组穿梭载体转染sf9细胞,获得重组病毒,命名为Ac-ORF2。间接免疫荧光分析表明,PCV2阳性血清能使Ac-ORF2感染的sf9昆虫细胞呈强的荧光着色; SDS-PAGE与Western-blotting分析可见大小约为28kD的特异性带,表明Ac.ORF2在sf9细胞中成功表达了PCV2-ORF2蛋白。将该表达蛋白纯化并经磷钨酸负染后,通过电镜观察可见形态与PCV2病毒粒子相似的病毒样颗粒(VLPs),其中某些颗粒由于中心浓染而似空衣壳,其直径也为17nm左右。     

两种农作体系施肥对土壤质量的影响

不同农作体系施肥措施差异引起的土壤环境质量变化 ,会进一步影响该体系的生产力并对大气和水体环境产生潜在影响。选取中国北方两种重要的集约化种植体系 (大棚蔬菜和小麦 -玉米轮作体系 ) ,研究了经过长期施肥后 ,0～ 30 cm土壤有机质、全氮、微量元素与重金属的差异以及 0～ 90 cm土壤剖面的硝态氮、铵态氮、速效磷、速效钾、p H和电导率的变化。结果表明 ,大棚菜地氮、磷、钾化肥投入量达 N 2 82 3、P 92 8和 K 92 5 kg/(hm2 · a) ,分别为小麦 -玉米轮作农田的 4 .7、10 .1和 2 3.4倍。大棚菜地还施用了大量的有机肥。菜地土壤养分大量积累 ,尤其是硝态氮和速效磷 ,0～ 90 cm土层二者分别达 1389.8kg N/hm2和 132 1.1kg P/hm2 ,为农田的 5 .6和 8.4倍。速效钾和铵态氮累积量分别为 1817.3kg K/hm2 和 10 0 .4 kg N/hm2 ,为农田的2 .2倍和 1.8倍。同时 ,大棚菜地土壤中的养分还存在严重的淋溶现象。大棚菜地有机质、全氮和有效铁、锰、铜、锌含量分别为农田的 1.3、1.4、1.2、1.3、1.3和 1.4倍。镉含量为农田的 3.8倍。镉与土壤速效磷含量呈显著正相关 ,可见 ,磷肥的大量投入是镉在土壤中累积的主要原因。大棚菜地各层土壤 p H均明显低于农田相应土层 p H,而 0～ 30 cm和 30～ 6 0 cm土层的电导率则     

稻米品质性状对开放式空气二氧化碳浓度增高的响应

利用开放式空气CO2浓度增高(FACE)系统平台。研究大田栽培条件下粳稻武香粳14号稻米品质性状对CO2浓度增高200μmol·mol^-1的响应。结果表明．FACE处理稻谷的出糙率平均比CK高1．4个百分点,整精米率平均比CK低12．3个百分点,较低的供N水平有利于提高FACE条件下的出糙率．较高的供N水平有利于提高FACE条件下的整精米率;FACE处理的稻米垩白略有增加。垩白粒率平均比CK高11．9个百分点,垩白度平均比CK平均高2．8个百分点,较高的供N和供P水平有利于降低FACE条件下垩白大小、垩白粒率和垩白度;FACE处理稻米糊化温度平均比CK平均高0．52℃,胶稠度有提高的趋势,但对稻米直链淀粉含量影响较小,较高的供N和供P水平有利于降低FACE条件下稻米的直链淀粉含量,较低的供N和较高的供P水平有利于降低FACE条件下稻米胶稠度,较低的供N水平有利于降低FACE条件下稻米糊化温度;FACE处理使稻米蛋白质含量比CK平均低0．6个百分点,较低的供N和供P水平有利于降低FACE条件下稻米蛋白质含量。     

固定化微生物降解土壤中菲和芘的研究

1　引　　言固定化微生物技术是 2 0世纪 70年代兴起的一种新型生物技术 ,目前已成为国内外学者的研究热点[8] ,现被广泛应用于处理化学工业废水 .其优点是可以大幅度提高参加反应微生物浓度 ;减少活性污泥数量 ;微生物被高分子材料包埋 ,耐环境冲击 ;根据需要选择有效微生物 ,可降低二次污染等特点 ,因而受到越来越多的关注[4,6 ,10 ] .包埋法是固定化技术最为普遍的使用方法 ,包埋载体的选择是固定化微生物的关键 ,理想的载体具有对微生物无毒性 ,传质性能好 ,性质稳定 ,不易被微生物分解 ,强度高寿命长和价格低廉等优点[2 ] .迄今 ,国内…     

北方冬小麦/夏玉米轮作体系土壤氨挥发的原位测定

采用通气法测定了北方冬小麦／夏玉米轮作体系田间土壤的原位氨挥发。结果表明,与冬小麦施用基肥相比,夏玉米追肥后土壤的氨挥发速率很快升高,但军发高峰期持续时间较短,最大氨挥发速率亦低于冬小麦,冬小麦拨节期追肥,氨挥发速率低且呈波动变化,未出现高峰值,从整个生长季节来看,冬小麦不施氮和每公顷施氮120、240、360kg时的累计挥发量分别为4．4、6．9、13．0、38．4kgN/hm^2,夏玉米为8．4、15．1、20．0、26．1kgN/hm^2。按我国北方冬小麦／夏玉米播种面积1864．4万hm^2计,每年由氨挥发向大气排放的氨素达23．8－120．2万t,其中17．2－96．4万t来自氮肥,相当于氮肥投入的2．1％－9．5％。     

嗅神经鞘细胞的培养纯化及体外生长特性

采用原代培养的方法,从2,5月成年大鼠的嗅球分离培养嗅神经鞘细胞（OECs),培养6天后,用阿糖胞苷（Ara-C)抑制,差速贴壁,Forskolin和BPE营养物质处理,根据P75蛋白免疫细胞化学染色和形态学特征分析了所得细胞的纯度,同时对不同培养时期的OECs 的形态进行观察和纯化后的活力测定。实验结果显示：（1）这种纯化方法简单,经济,快捷,所得的OECS纯度可达95％以上,并且随培养时间延长,细胞仍保持较高的纯度。（2）在培养早期2天到5天主要以巨噬细胞状,多极状,不规则状为主,培养中期7天到20天主要以扁平的双极,三极为主。晚期20天以后呈现双极,三极形态,其起上有许多细小的棘突。93）其中以培养早中期细胞的活力较好,培养20天以后,细胞活力较差,本研究为以OECs 作为移植材料对促进神经再生的研究获得丰富的细胞来源奠定了基础。     

烟草质体分裂蛋白NtFtsZs在大肠杆菌中的定位分析

分别构建了两个烟草(Nicotiana tabacum L.)质体分裂基因NtFtsZ1和NtFtsZ2与编码绿色荧光蛋白的gfpS65A、V68L、S72A基因相融合的原核表达载体,并导入大肠杆菌( Escherichia coli ) JM109菌株中进行表达.全长NtFtsZs∶GFP融合蛋白在菌体中有规律地定位,暗示NtFtsZs能识别大肠杆菌潜在的分裂位点,并能与大肠杆菌的内源FtsZ发生聚合作用;融合蛋白的诱导表达抑制了宿主菌的分裂,形成了明显的丝状菌体,证明真核生物的 ftsZ 基因与大肠杆菌的 ftsZ 基因有相似的作用.同时构建了NtFtsZs不同缺失的原核表达载体,对这两个基因所编码蛋白不同结构域的功能做了初步分析.实验结果表明,烟草FtsZ蛋白的C端结构域与其在大肠杆菌细胞中的正确定位有关;而N端结构域与NtFtsZs∶GFP融合蛋白的聚合有关.