调控葡萄酒石酸生物合成VvbHLH79基因克隆及表达分析

【目的】葡萄是典型的酒石酸积累型果实,酒石酸不仅影响葡萄果实的味道,还决定葡萄酒的色泽、口感、微生物稳定性和陈酿潜力,但调控酒石酸生物合成的转录因子及机制尚不明确。【方法】bHLH转录因子参与调控植物的生长发育、次生代谢和抗逆性等多种生物学过程,课题组前期筛选到1条与酒石酸生物合成相关的bHLH转录因子。研究以酿酒葡萄‘琼瑶浆’、‘马瑟兰’为试验材料,采用PCR方法从中克隆到与酒石酸含量相关的VvbHLH79转录因子,对其进行生物信息学和亚细胞定位分析;利用HPLC和qRT-PCR技术测定葡萄果实在不同发育时期的酒石酸含量和VvbHLH79的表达量;并构建植物表达载体,使用农杆菌介导的果梗侵染法瞬时转化葡萄幼果果实之后检测VvbHLH79的表达量和酒石酸含量,以明确VvbHLH79基因在葡萄果实中对酒石酸含量的作用,为进一步探究VvbHLH79在调控葡萄酒石酸生物合成的分子机制奠定基础。【结果】结果表明：（1）通过RNA-seq测序筛选获得1个葡萄VvbHLH79基因,该基因CDS序列全长831 bp,编码277个氨基酸,相对分子量为66.22kD,理论等电点为5.15,属于无信号肽和跨膜结构的不稳定亲水性蛋白;氨基酸序列第147-232位含有bHLH-SF保守结构域,属于bHLH转录因子家族;亚细胞定位在细胞核。（2）同源序列比对和系统进化树结果显示,葡萄VvbHLH79编码蛋白与河岸葡萄中的bHLH89编码的蛋白（登录号：XP_034699340.1）序列一致性最高,达到99.64%。（3）qRT-PCR分析表明,VvbHLH79随着‘琼瑶浆’果实的发育,相对表达量在降低,从座果期到成熟期降低了67.25%左右;HPLC测定结果显示,酒石酸的积累主要在葡萄果实转色之前,转色之后酒石酸含量就快速下降。（4）VvbHLH79在低酒石酸葡萄果实中瞬时过表达后使酒石酸含量显著升高,而将VvbHLH79在高酒石酸葡萄果实中沉默后酒石酸含量显著下降,证实了VvbHLH79基因正向调控酒石酸含量。【结论】研究推测,VvbHLH79转录因子可能在葡萄酒石酸生物合成通路中发挥作用。     

易与甲真菌病混淆的甲病—非真菌性甲营养不良

甲营养不良是指各种原因造成的指甲形态及结构异常[1]。临床上部分甲营养不良是由于甲真菌感染所致,但大部分导致甲营养不良损害的病因复杂,可以为先天性,也可能为获得性,多与系统性疾病、其他皮肤病或某些药物摄入有关。与此同时,很多甲营养不良损害的患者无自觉症状,仅因为美学问题而就诊。甲营养不良病因复杂,表现多样,诊断困难,治疗效果常常不佳。     

RS4651通过上调SMAD7抑制小鼠肝细胞AML12的EMT作用

目的: 研究RS4651对小鼠肝细胞AML12的EMT、细胞增殖以及迁移能力的影响和作用机制。方法: 以不同浓度的RS4651干预小鼠AML12细胞,通过Western blot和RT-PCR法检测RS4651各浓度组及空白对照组细胞EMT指标E-cadherin、N-cadherin、Vimentin的表达水平。RNA-sequencing确定RS4651的作用通路及互作网络的关键性节点基因。应用SMAD7-siRNA构建SMAD7敲低的AML12细胞模型,细胞分为对照组、RS(60 μmol/L)组、SMAD7-siRNA组以及SMAD7-siRNA+RS(60 μmol/L)组,应用Western blot和RT-PCR法分别检测各组细胞EMT指标。进一步应用细胞增殖MTS法和Transwell小室迁移法检测各组细胞的增殖和迁移能力,比较各组间差异。结果: RS4651呈浓度依赖性抑制AML12细胞EMT,TGF-β1信号通路中的SMAD7是RS4651发挥作用的关键性节点。敲低SMAD7后,RS4651对AML12细胞EMT、增殖和迁移的抑制作用减弱。结论: RS4651可以通过上调SMAD7抑制小鼠肝细胞EMT、增殖和迁移。     

金刚头酒糟制羧甲基纤维素的试验

一、引言金刚头(Smilax japonica)即菝葜属百合科植物。我国现在对金刚头的利用,一般都是利用它块茎中的淀粉。将它挖出后去刺洗净切片晒干,然后在工厂中将此原料粉碎,按酒精生产工艺流程发酵酿酒。这种工艺路线较为成熟可靠,一般每100斤原料可得96°的工业酒精13—15斤。但是,从目前生产情况来看无论怎样的努力,单一的酿洒总避免不了亏损的结局。究其原因,其亏损并不是管理不善,而是缺乏综合利用而造成的。我们从表Ⅰ中看到金刚头中可     

内蒙古乌拉乌苏的陆龟属皮骨化石

本文记述了内蒙古乌拉乌苏始新世晚期陆龟属(Testudo)的皮骨(dermal osslcles)化石,包括足部的和尾部的。前者我国曾有记录,后者则是首次发现。结合皮骨,文中还探讨了几个有关问题。     

大鼠胸部照射后支气管肺泡灌洗液成分和肺组织纤溶活力…

大鼠脑部照射γ射线２０ＧＹ，照射后观察支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中蛋白质含量、细胞总数和分类及巨噬细胞存活率，肺指数及肺组织纤溶活力，并做了大体解剖和组织学检查。结果为：照射后２周后开始ＢＡＬＦ中蛋白质含量、细胞总和中性粒细胞即明显增多，照射后１－２个月持续处于高水平，高峰在１．５－２个月，照射后３－４个月有所下降，肺指数有相应变化；肺组织纤溶活力则相反，从照射后２周开始持续下降，至照射后２个月