液相串联质谱法同时定量检测生物样本中鞘脂类化合物

鞘脂类中的主要活性分子鞘氨醇1-磷酸（S1P）,可通过介导细胞增殖、分化和迁移等发挥广泛的生物学功能|同时,S1P可在相关酶的作用下转变为其它形式.本文旨在建立一种简便的鞘脂类的制备方法,并结合液相串联质谱（LC-MS/MS）快速检测生物样本中纳克水平的鞘脂类化合物. 采用甲醇沉淀或经典的脂质提取方法获得鞘脂类化合物,再采用LC-MS/MS在多反应监测模式（MRM）下进行定量分析. 实验结果表明,甲醇沉淀法可简便快捷地获得血浆或脂蛋白中鞘氨醇类化合物; S1P、二氢鞘氨醇（DH-S1P）和鞘氨醇（SPH）的定量限分别为110.5、215.6和44.3 pg;人血浆中S1P、DH-S1P和SPH的含量分别为257.8±49.4 nmol/L、93.5±17.3 nmol/L和44.6± 7.4 nmol/L, 鞘脂类化合物在人血浆脂蛋白上的分布存在显著性差异|在ApoE-/-小鼠血浆中S1P、DH-S1P和SPH的含量分别为590.1±78.2 nmol/L、197.8±60.6 nmol/L和35.4±16.7 nmol/L|每1×106个人脐静脉内皮细胞（EA.hy926）中,S1P和SPH的含量分别为103.7±21.8 pg和16.3±5.3 ng.甲醇沉淀法结合LC-MS/MS可简便快捷地对血浆和脂蛋白中的鞘脂类化合物进行定量检测. 该方法特别适用于大量生物样本中鞘脂类的快速定量分析.     

小球藻NADP—谷氨酸脱氢酶的cDNA克隆及转基因烟草分析

用RT_PCR方法从小球藻 (Chlorellasorokiniana)中克隆了铵诱导表达的以辅酶Ⅱ为辅基的谷氨酸脱氢酶(NADP_GDH)基因的cDNA片段 ,DNA测序分析表明与已报道的该基因cDNA序列同源性为 94%。将NADP_GDH基因先插入到SPDK6 2 1质粒的 2CaMV35S启动子和Ω增强序列之后 ,然后将 2CaMV35S_Ω_GDH_NOS表达单元构建到RokⅡ质粒的HindⅢ与EcoRⅠ之间 ,从而获得高效植物表达载体。将RokⅡ_GDH质粒转移到根癌土壤杆菌(Agrobacteriumtumefaciens (SmithetTownsend)Conn)EHA10 5中 ,对烟草 (NicotianatabacumL .)进行转化并得到阳性转化后代。对转基因烟草分析表明 ,在低氮培养基或在低氮蛭石中其生长速度和叶片数明显高于对照 ;铵毒性实验表明 ,无论在低铵或高铵条件下 ,接种在MS固化培养基上的转基因绿叶圆片存活时间长 ,叶绿素含量高。这些结果说明外源NADP_GDH增强了植物对氮素的吸收和利用。另外 ,转化后代还表现了对除草剂膦化麦黄酮 (PPT)具有较强的抗性 ;培养在含有不同浓度PPT的MS固化培养基上的转基因绿叶圆片 ,其愈伤化程度明显高于对照 ;在MS培养基中用 0 .5 μg/mL的PPT可以代替卡那霉素对转化后代进行筛选 ,这暗示NADP_GDH基因可以作为一种新的选择标记用于植物基因工程的研究。     

PSA启动子中RFA调节序列结合蛋白的初步研究

为了确定前列腺特异抗原(PSA)启动子中与雄激素调节相关的序列, 发现PSA启动子ARE上游一段15 bp的区域(-396～-382 bp), 是雄激素受体(AR)对PSA启动子激活所必需的, 将其命名为RFA. 转染和CAT分析显示该序列中某些核苷酸置换可显著降低雄激素对PSA基因启动子的诱导活性, 体外竞争结合实验证实某些前列腺细胞核内的非受体蛋白因子可与其特异结合, 但其突变型则丧失了这种能力, 该序列可能是一个新的辅助性顺式元件. 以RFA为探针, 利用亲和层析分离纯化了RFA结合蛋白, SDS-PAGE和蛋白质初步鉴定结果表明, 该蛋白与已知的多功能蛋白hnRNPA1, A2高度同源. RFA结合蛋白可能作为辅激活因子协同AR对PSA启动子的反式激活作用. 研究结果有助于深入理解PSA启动子的作用机制和组织特异性.     

前列地尔联合尿毒清颗粒对慢性肾衰竭患者血清甲状旁腺激素、同型半胱氨酸水平及临床疗效的影响

目的:探究前列地尔联合尿毒清颗粒对慢性肾衰竭患者血清甲状旁腺激素、同型半胱氨酸及临床疗效的影响。方法:收集我院收治的慢性肾衰竭患者74例,根据随机对照表分为对照组和试验组,每组37例。对照组予以前列地尔注射液治疗,试验组在对照组基础上予以尿毒清颗粒治疗。观察并比较两组患者临床疗效,治疗前后血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、血尿酸(UA)、内生肌酐清除率(Ccr)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、同型半胱氨酸(Hcy)、甲状旁腺素(PTH)、β2微球蛋白(β2-MG)水平以及不良反应的发生情况。结果:与对照组相比,试验组治疗后临床总有效率较高(P0.05)。两组治疗后血清肌酐、尿素氮、血尿酸水平下降(P0.05),内生肌酐清除率水平升高(P0.05);与对照组相比,试验组血清肌酐、尿素氮、血尿酸水平较低(P0.05),内生肌酐清除率水平较高(P0.05)。两组治疗后超敏C反应蛋白、同型半胱氨酸、甲状旁腺素以及β2微球蛋白水平降低(P0.05);与对照组相比,试验组超敏C反应蛋白、同型半胱氨酸、甲状旁腺素以及β2微球蛋白水平较低(P0.05)。两组不良反应发生情况相比差异无统计学意义(P0.05)。结论:前列地尔联合尿毒清颗粒对慢性肾衰竭患者的临床疗效显著,安全性较高,可能与其下调血清甲状旁腺激素以、同型半胱氨酸及β2微球蛋白水平有关。     

濒危药用植物掌裂兰根部内生真菌和根际土真菌多样性分析

【背景】植物内生真菌对宿主植物促生长、抗旱和增强抗病能力等方面有着重大的研究和利用价值,尤其对兰科植物的生长起到重要的作用。【目的】通过对掌裂兰根部内生真菌和根际土真菌多样性进行系统分析,掌握掌裂兰根部内生真菌与根际土真菌群落结构,为进一步探究掌裂兰植物与真菌共生规律提供参考。【方法】采用Illumina MiSeq高通量测序技术分析掌裂兰根部内生真菌和根际土真菌多样性。【结果】掌裂兰根部内生真菌隶属于7门89属,优势菌属为瘤菌根菌属(Epulorhiza)(16.93%)、头梗霉属(Cephaliophora)(10.41%)、酵母属(Saccharomyces)(5.73%)、角担菌属(Ceratobasidium)(5.32%)和镰刀菌属(Fusarium)(5.12%),其中Epulorhiza和Ceratobasidium为兰科植物菌根真菌;根际土真菌隶属于11门269属,优势菌属为镰刀菌属(Fusarium)(8.09%)、丛赤壳属(Neonectria)(6.79%)、Plectosphaerella (3.39%)和被孢霉属(Mortierella)(3.01%)。通过...     

新的脂代谢调控基因——货运受体Surf4

Surf4属于Surfeit基因簇成员，在内质网膜中广泛表达和定位，作为货运受体参与多种蛋白质在内质网与高尔基体之间转运。新近发现，Surf4参加载脂蛋白B (Apo B)转运，进而影响极低密度脂蛋白(VLDL)前体的转运，在极低密度脂蛋白分泌中发挥调控作用，敲除肝Surf4能大幅度降低血浆总胆固醇和甘油三酯水平，不会造成肝的脂质堆积和病理改变。这些研究结果表明，Surf4可能是治疗心血管疾病的潜在药物靶标，在心血管疾病的发生发展及其诊疗中具有潜在的临床应用价值。本文就Surf4的主要生理功能，尤其是作为货运受体参与载脂蛋白B在内质网与高尔基体之间转运的货运功能，以及其参与调控脂代谢并与脂代谢相关疾病关系的研究进展进行系统阐述，以期促进对Surf4的认知，并为其深入研究和转化应用提供新思路，为降脂治疗提供新方法，造福于更多高脂血症患者。     

棕背Pin的核型分析

本文利用骨髓染色体制片法，对棕背ＰｉｎＣｌｅｔｈｒｉｏｎｅｍｙｓｒｕｆｏｃａｎｕｓ的核型进行了研究。     

氢生物医学效应在疏解自由基氧化应激的分子机制

氢分子（H₂）作为有害自由基清除剂的选择性抗氧化新机制，为自由基生物医学理论研究和应用提供了新的方向。自2007年H₂首次被报道具有生物学效应以来，已在缺血/再灌注损伤、代谢综合征、炎症和癌症等疾病模型和人类疾病中被证实。虽然H₂的医学作用靶点仍存在争议，但大量的研究已证明H₂生物学效应具有医用气体作用和健康促进作用。系统地介绍了H₂对生物体及细胞调控的研究进展，阐述了H₂的抗氧化、抗炎和抗凋亡作用，探讨了H₂对线粒体和内质网的保护、细胞内信号通路的调节和免疫系统的平衡作用，以期为深入研究氢效应机制和规范氢供体应用范围提供理论依据。     

动物在水中游行速度

下表所列是一些淡水和海水动物游行的估计速度。这些数字刊载于1946年5月25日“伦敦画报”(Illustrated London News);另外有几种是恩(Frank w.Lane)所辑,曾发表于“乡人”(Countryman)杂志。关于小体积的鱼类     

提高神经细胞直接重编程效率的研究进展

近年来，神经细胞直接重编程技术已经成为潜在的细胞替代治疗新手段。体内直接重编程利用与缺失细胞相邻的内源细胞再生目标细胞进行替换，可避免由外部细胞移植引起的免疫排斥反应，有效降低致癌风险，具有良好的应用前景。但同时，神经细胞直接重编程也面临着诸多挑战，如重编程后的神经元存活困难、需要损伤或疾病期间丢失的特定神经元亚型的再生、重编程效率低下等。如何实现高效的在体神经细胞直接重编程，是目前需要克服的难题。该综述主要对如何提高神经细胞直接重编程的效率进行概述，主要包括抗氧化剂、铁死亡抑制剂和抗凋亡蛋白的应用、激活神经元富含的线粒体基因、运用表观遗传因子和转录因子组合等，这些将为更好地发挥神经细胞直接重编程的效用提供参考。