微丝骨架通过调控线粒体膜透性影响拟南芥耐盐性

植物微丝参与了许多重要的细胞生理活动,与植物耐盐性有密切的联系。在微丝解聚剂Latrunculin B（LatB）存在的情况下,拟南芥会表现出盐胁迫敏感。本研究结果表明盐胁迫下LatB可增加拟南芥线粒体膜通透性转换孔（mitochondrial permeability transition pore,MPTP）开放度,导致线粒体膜电势下降和细胞色素C的释放。而加入MPTP抑制剂环孢素A（CsA）后,膜电势下降程度降低,细胞色素C释放减少,解聚微丝造成的盐敏感表型得到一定程度恢复。     

慢病毒介导的GFP-Hsp90αE47A 基因在HepG2 细胞表达及对 细胞增殖性影响的研究

目的:建立真核细胞表达的GFP-Hsp90αE47A基因重组慢病毒载体三质粒包装细胞系统,并检测其对细胞增殖性的影响,为进一步研究HSP90分子伴侣功能奠定基础。方法:制备完整的重组慢病毒载体三质粒系统:转移质粒(Hsp90αE47A/psin-GFP),包装质粒(ΔNRF)及包膜蛋白质粒(VSV-G)。磷酸钙法将三质粒共转染293T包装细胞,48h后收集病毒上清。将制备好的慢病毒颗粒感染HepG2细胞,在荧光显微镜下观察报告基因GFP的表达情况,Westernblot检测HepG2细胞GFP-Hsp90α表达。MTT法检测细胞增殖情况。结果:转染后的293T和感染后的HepG2细胞能观察到较强的绿色荧光,培养液上清病毒滴度约为3.0×103ifu/μl,HepG2细胞中有GFP-Hsp90α蛋白的表达。内源性Hsp90α表达无明显上升(为对照组的1.05±0.15倍,P<0.05,t检验),有明显外源性GFP-Hsp90αE47A蛋白的表达,为对照组内源性Hsp90α的0.68±0.12倍。外源性GFP-Hsp90αE47A蛋白的表达HepG2细胞增殖活性于第4d有明显抑制。(1.051±0.03vs1.349±0.05,P<0.05,t检验)。结论:成功建立重组慢病毒载体的三质粒包装细胞系统,并将GFP-Hsp90αE47A基因在HepG2细胞中稳定表达,且并未引起细胞明显的热休克反应而导致的内源性Hsp90α增高;且能明显抑制细胞增殖,为后期Hsp90α分子伴侣功能进行研究奠定基础。     

外源激素处理对三峡消落带落羽杉扦插生根的影响

为优选落羽杉大龄母树插穗的扦插繁殖技术,以期培育大量的落羽杉良种壮苗满足三峡消落带植被修复的需要,采用正交试验设计,探究不同外源激素、浓度以及处理时间对三峡消落带落羽杉大龄母树插穗扦插生根的影响,运用隶属函数法对各处理生根情况进行综合评价。结果表明：（1）落羽杉插穗皮部和愈伤组织处均有不定根伸出,两处不定根数量分别占不定根总数的63.9%和36.1%;（2）4种外源激素中,吲哚丁酸（IBA）+萘乙酸（NAA）（等质量比）和IBA处理的插穗生根效果最好,NAA处理次之,生根粉（ABT）处理效果最差;（3）5种浓度（50 mg/L、100 mg/L、150 mg/L、200 mg/L和250 mg/L）之间的处理效果无显著差异;（4）4种处理时间（2 h、4 h、6 h和8 h）中,4 h处理的插穗生根效果最佳;（5）26个处理组合中,（IBA+NAA）×150 mg/L×4 h处理组合和NAA×250 mg/L×4 h处理组合的平均隶属函数值最高,分别为0.83和0.82,清水对照的平均隶属函数值最低,为0.05。研究初步验证了皮部生根是落羽杉大龄母树插穗的主要生根方式,筛选出三峡消落带原位适生落羽杉大龄母树插穗扦插的两种较佳处理组合为（IBA+NAA）×150 mg/L×4 h和NAA×250 mg/L×4 h。     

昆明裂腹鱼幼鱼对盐度的耐受性研究

在水温20℃,pH=7.1,24 h不断充氧的条件下,观察记录昆明裂腹鱼幼鱼在不同盐浓度下的生活状态,测定其对盐度的耐受性。试验结果表明,24 h、48 h、72 h和96 h的半致死浓度(LC50)分别为15.2399 g/L、12.8126 g/L、12.2689 g/L、11.8187 g/L,两个级别的安全浓度(SC)分别为1.1819 g/L和2.7169 g/L。半致死浓度随时间的增加而减小,说明其对盐度的抵御力随生活在一定盐溶液时间增加而减弱。昆明裂腹鱼幼鱼在死亡前出现急游、游向水面、活动减弱、身体失衡、翻白现象,死亡后体表分泌大量粘液,口角、鱼鳍有充血现象。     

miR-142通过靶向HMGB1对宫颈癌细胞生物学行为影响的实验研究

摘要 目的：通过实验探究miR-142靶向高迁移率族蛋白1（high-mobility group box 1 protein,HMGB1）对宫颈癌（cervical cancer,CC）细胞生物学行为的影响及其潜在的作用机制。方法：采用实时荧光定量PCR（RT-PCR）和蛋白质免疫印迹法（Western Blot）检测CC组织和正常组织中miR-142和HMGB1 mRNA及蛋白表达水平,采用荧光素酶报告实验分析miR-142与HMGB1的靶向关系,CCK-8法检测CC细胞生存能力,克隆形成实验检测CC细胞增殖能力,划痕修复实验检测CC细胞迁移能力,基质胶侵袭实验检测CC细胞侵袭能力。结果：CC组miR-142 mRNA和蛋白表达水平显著低于正常组（P<0.05）,HMGB1 mRNA和蛋白表达水平显著高于正常组（P<0.05）,且CC癌组织中miR-142和HMGB1 mRNA和蛋白表达水平均呈显著负相关（r=-0.399,P=0.002;r=-0.429,P=0.001）;miR-142与HMGB1存在靶向关系;CCK-8法实验、克隆形成实验、划痕修复实验和基质胶侵袭实验结果显示,miR-142 mimic组细胞生存、增殖、迁移和侵袭能力显著低于miR-NC组（P<0.05）,miR-142 inhibitor组细胞生存、增殖、迁移和侵袭能力显著高于miR-NC组;Western Blot实验结果显示,HMGB1过表达时miR-142 mimic+plasmid组HMGB1蛋白表达水平显著高于miR-142 mimic+control plasmid组（P<0.05）,显著低于miR-NC+plasmid组（P<0.05）;CCK-8法实验、克隆形成实验、划痕修复实验和基质胶侵袭实验结果显示,HMGB1过表达时miR-142 mimic+plasmid组细胞生存、增殖、迁移和侵袭能力显著高于miR-142 mimic+control plasmid组（P<0.05）,显著低于miR-NC+plasmid组（P<0.05）。结论：miR-142可通过靶向负调控HMGB1表达,进而抑制CC细胞生存、增殖、迁移和侵袭。     

小鼠胚泡着床期子宫内膜LongSAGE基因文库构建

按照LongSAGE文库构建原理,先后经子宫内膜总RNA提取、cDNA合成、130bp双标签的产生、PCR扩增、34bp双标签形成、连接成串联体、与载体连接、转化大肠杆菌等相关步骤构建小鼠胚泡着床期子宫内膜LongSAGE基因文库。经证实所构建文库的阳性克隆率达100%,克隆中插入的串联体长度介于400￣500bp之间,成功构建了小鼠胚泡着床期子宫内膜LongSAGE基因文库。     

细胞信号转导网络的计算机网络模型构建初探

根据细胞信号转导的特点,利用计算机通信技术,提出了一个类似Internet的细胞信号转导计算机网络模型,对该模型的信息编码提出了自己的规则。并利用此模型对Grill等提出的ABA对气孔运动调节的信号转导模型进行实例化。利用wpa—Pack软件包,用VC＋＋6．0开发了封装、发送数据包的程序。仿真结果表明：细胞信号可以根据所定义的规则编码、封装后在构建的网络上进行数据传输。     

基于XML的物种属性构建系统

用PowerBuilder9．0开发了一个基于XML的物种及其属性构建系统,利用该系统可以方便的构建一个物种属性,并可以对该物种属性进行解析翻译。利用该系统以物种毛白杨作为实例进行构建,结果表示：该系统操作简便、构建灵活、能解析、方便读取、实用有效,对物种及其属性能够很好的描述,方便物种属性的管理。     

光强与光质对银杏光合作用及黄酮苷与萜类内酯含量的影响

对2年生银杏（Ginkgo biloba L.)苗进行遮荫和光膜处理,测定光合速率及碳水化合物,银杏黄酮苷与萜类内酯的含量。光合速率在自然光下测定时从大到小依次为：黄膜＞蓝膜和红膜＞绿膜＞紫膜和白膜,在光膜下测定时为：黄膜＞红膜＞蓝膜、紫膜和白膜＞绿膜。光强和光质对碳水化合物含量有显著影响。光质对萜类内酯的生物合成和积累有影响,紫膜处理的银杏萜类内酯含量最高,为3.89mg/g,比白膜（对照） 高85．23％,其次是绿膜,为2．80mg/g。覆膜和蔗荫显著减少银杏黄酮苷含量,这可能与紫外辐射强度减弱有关。     

人可溶性gp190在酵母Pichia pastoris中的表达

人可溶性gPl90(sgp190)是白血病抑制因子(LIF)的可溶性受体,可能在LIF行使众多生物学功能中扮演着重要的角色。为获得这一蛋白以研究它在人体内的生物学活性,在酵母Pichia pastoris中实现了重组sgp190分泌表达。利用基因重组技术,将编码人可溶性gP190(LlF受体α亚基gP190胞外区)cDNA克隆到毕赤酵母Pichia pastoris分泌表达载体pPIC9K,构建了重组表达质粒pPIC9K-sgp190。原生质体法转染Pichia pastoris GS115菌株,经过G418筛选,得到了高效分泌表达sgp190蛋白的毕赤酵母菌株GS115／pPIC9K-sgp190,sgp190蛋白占摇瓶培养表达上清中总蛋白质的26％。经初步纯化,对表达产物的性质鉴定表明,其分子量约125kD,具有免疫活性。对sgp190体外活性分析表明它能够抑制LIF诱导滋养层细胞分泌hCG。