南京儿童医院PICU病原菌流行分布与耐药性分析

目的了解南京地区儿童重症监护病房（PICU）临床分离病原菌的流行分布与其对抗生素的耐药趋势,指导临床诊断及用药。方法回顾性分析2011年1月至2013年12月南京医科大学附属南京儿童医院PICU住院患儿所分离出病原菌的分布和药物敏感性试验结果。结果 1 476例各类送检标本中共分离出386株病原菌（26.2%）,其中革兰阴性杆菌265株（68.7%）,主要为肺炎克雷白杆菌,大肠埃希菌和鲍曼不动杆菌;革兰阳性球菌93株（24.1%）,主要为凝固酶阴性葡萄球菌,金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌;真菌28株（7.2%）。3年中产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌分别占62.7%和54.9%。革兰阴性杆菌对亚胺培南、阿米卡星和头孢哌酮/舒巴坦较敏感;革兰阳性球菌对万古霉素和利奈唑胺较敏感。结论 PICU分离出的主要病原菌对常规抗菌药物的耐药现象严重,应结合患儿临床表现、感染部位和病原菌的流行病学特点合理选用抗菌药物。     

嗜水气单胞菌外膜蛋白W 基因的表达及其免疫原性分析

从患暴发性败血病的草鱼病灶处分离鉴定了嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)Wp3菌株。以其基因组DNA为模板扩增外膜蛋白W基因(OmpW),该基因全长为865 bp,开放式阅读框(ORF)为615 bp,与标准株ATCC7966的OmpW基因的同源性为99.8%。根据ORF序列设计引物扩增OmpW成熟肽编码序列并将其插入到表达载体pQE30中,转化大肠杆菌,经诱导可表达分子量为24.7 kD的带His标签的融合外膜蛋白His-W。用此融合蛋白免疫草鱼,所得草鱼血清经ELISA分析显示呈现阳性反应,说明重组蛋白能诱导产生抗体。采用实时荧光定量PCR分析草鱼头肾组织IgM基因表达水平的变化,结果显示免疫组IgM的表达量均明显高于空白组,其中低浓度免疫组(2μg/g)与空白对照组的差异显著(P<0.05),说明融合蛋白可使草鱼产生良好的免疫应答并上调抗体基因表达、产生高效抗体。保护性实验显示,不同免疫剂量均可使免疫组获得较高保护率(57%?86%)。结果显示,重组嗜水气单胞菌外膜蛋白W可作为草鱼嗜水气单胞菌基因工程亚单位疫苗。     

11C-PIB PET对高龄脑淀粉样血管病患者的诊断价值*

目的: 研究¹¹C同位素标记的匹兹堡复合物B正电子发射显像(¹¹C-PIB PET)对高龄脑淀粉样血管病(CAA)患者的诊断作用及¹¹C-PIB沉积与脑微出血(CMB)的位置关系。方法: 选取6例非痴呆的临床可能脑淀粉样血管病(CAA)患者、14例阿尔兹海默症(AD)患者和10例对照患者行¹¹C-PIB PET检查,并同机行磁敏感成像(SWI)检查。以了解CAA患者脑内PIB沉积特点。结果: ①CAA组和AD组¹¹C-PIB PET成像皮层各脑区可见放射性滞留,对照组患者仅1例可见皮质放射性滞留。以BostonCAA诊断标准为参考,¹¹C-PIB PET诊断CAA敏感为100%,特异性为90%。②CAA组和AD组各脑区PIB沉积高于对照组(P＜0.05)。③CAA患者脑内PIB沉积低于AD组,两者无统计学差异。结论: ¹¹C -PIB PET诊断CAA敏感性高。同时合并脑叶微出血及脑凸表面铁沉积更支持CAA的诊断,有助于增加其诊断特异性。     

耻垢分枝杆菌ClpC和ClpX敲低表达菌株的构建及表型分析*

蛋白质平衡稳定对细菌的生长繁殖以及应对宿主免疫压力十分重要。Clp蛋白酶复合体在结核分枝杆菌的蛋白质降解和平衡稳定中发挥重要作用。Clp蛋白酶中负责识别底物蛋白并将其解折叠的蛋白质有两种:ClpC和ClpX。为初步探究分枝杆菌中ClpC和ClpX各自的功能特点,运用CRISPRi的方法成功构建了耻垢分枝杆菌的ClpC和ClpX诱导型敲低表达菌株,并对其生长相关表型进行分析。结果显示:与野生菌株相比,ClpC和ClpX的低表达均能严重影响耻垢分枝杆菌的生长。ClpC低表达可导致菌株丧失生物膜的形成能力,而ClpX低表达则导致菌株无法维持正常细胞形态,电镜显示细胞壁不完整且细胞呈丝状化,提示ClpC和ClpX可能在分枝杆菌中具有不同的生理功能。可为后期深入开展ClpC和ClpX对分枝杆菌生理调控功能研究及新型抗结核药物筛选提供基础。     

Bt抗虫棉秸秆还田对土壤养分特征的影响

【目的】研究转基因作物秸秆或残茬还田可能对土壤养分特性造成的影响。【方法】以不同抗虫水平Bt棉花和常规棉花(泗棉3号)为研究材料,分别在经过一、二个生长周期后将秸秆机械粉碎后原位还田,40 d后测定分析土壤中Bt蛋白含量及肥力相关的养分含量变化。【结果】Bt棉秸秆还田后,所有品种棉花土壤中Bt蛋白含量与还田前无显著增加,且转Bt基因棉与非转基因棉还田对土壤Bt蛋白含量的影响并无显著差异。同时,棉秸秆还田可显著提高土壤有机质、速效磷、碱解氮、速效钾、全氮、全磷和全钾含量,提升土壤pH值;增加幅度在不同抗虫水平Bt棉花间及与非转基因常规棉花品种间皆无显著性差异。【结论】秸秆还田对土壤肥力的提升与Bt棉的抗虫水平无关。“转Bt基因”不成为Bt棉秸秆还田提高土壤肥力的限制性因素,其秸秆还田不会对土壤肥力质量产生负面影响,可使土壤养分含量增加,有效提升土壤肥力。秸秆原位还田简单、无害又提升肥力,有条件作为转Bt基因植物秸秆无害化处理的理想方式。