联合疫苗应用现状及评价*

联合疫苗含有两种或多种免疫原（活的、灭活的病原体或者提纯的抗原）,用于预防多种疾病或由同一病原体的不同亚型或血清型引起的疾病,可以避免常规免疫多次注射的问题。然而和单价疫苗相比,联合疫苗研发的复杂性大大增加,将多种免疫原混合到一起进行免疫时不同免疫原间可能因为物理、化学和免疫学机制而干扰其他免疫原的免疫反应,此外佐剂和防腐剂等非活性成分也可能对联合后的活性成分产生影响,这就对联合疫苗的评价提出了特别的要求。本文对联合疫苗的研究应用现状、临床评价和发展前景等方面做一综述。     

常用麻醉剂对麻醉小鼠超声心功能的影响

目的:比较常见的多种麻醉剂对小鼠心脏超声结果的影响。方法:C57BL/6小鼠25只,随机分5组,每组5只。首先在清醒状态下,借助小动物高频超声系统(Vevo2100)评价小鼠心功能,然后分别用戊巴比妥钠、水合氯醛、三溴乙醇、氯胺酮/地西泮及异氟烷麻醉,再次对心功能进行评价。比较6种不同处理情况下,超声反映的小鼠心功能的差异。结果:与清醒状态相比,5种麻醉方式下,小鼠的心率及心功能均有不同程度降低。其中,戊巴比妥钠、水合氯醛、三溴乙醇及异氟烷麻醉组的左心收缩功能显著降低(P0.01),而氯胺酮/地西泮麻醉的小鼠与清醒组相比,收缩功能无明显差异(P0.05),但其余参数也有显著差异(P0.01)。结论:不论何种麻醉方式,都会对小鼠心率及心功能造成一定影响,但其同组内仍具有可比性;因此应根据现实条件及实验需要选择麻醉剂,并贯彻始终,保持试验中麻醉条件的一致性。     

高表达人源SP15对小鼠生长和生殖的影响

目的:探究高表达人源SP15对小鼠生长和生殖的影响,为研究NYD-SP15在生物体中的功能提供动物模型。方法:将人源NYD-SP15 cDNA以及Cre序列插入PCAG启动子下游,构建NYD-SP15转基因表达载体,并通过原核注射,构建全身性表达NYD-SP15的转基因小鼠;将获得的NYD-SP15转基因小鼠与C57/BL6小鼠交配,PCR鉴定转基因小鼠是否有Cre插入,筛选出人源NYD-SP15表达的小鼠,统计转基因小鼠体重变化和后代阳性情况。结果:通过PCR鉴定及公司测序验证,我们成功构建了NYD-SP15转基因过表达载体。并通过PCR鉴定小鼠基因型,筛选出可以表达人NYD-SP15的转基因小鼠。比较转基因小鼠与同窝野生型小鼠体重,发现转基因小鼠体重与同窝野生型小鼠相比无明显区别,说明在体内过表达NYD-SP15对小鼠体重无明显影响。通过对后代阳性小鼠出生情况统计发现F2代阳性小鼠出生率较F1代明显降低。结论:人源NYD-SP15在小鼠体内能正常表达,对其生长无明显影响,但其后代阳性出生率呈逐代下降趋势,推测该原因可能与NYD-SP15在睾丸中表达有关。     

转基因小鼠过表达人Lin28A/Lin28B对小鼠体重的影响

目的:Lin28是一种高度保守的RNA结合蛋白,对生物体的生命活动具有重要的调节作用.为了研究人Lin28A与Lin28B基因的功能,我们构建了分别过表达人Lin28A或Lin28B基因的两种转基因小鼠,表型分析发现小鼠体重变化,为研究Lin28A和Lin28B基因的生物学功能提供模型动物.方法:分别将人类Lin28A与Lin28B cDNA插入PCAG启动子下游,构建Lin28A与Lin28B转基因表达载体,通过显微注射方法,分别建立Lin28A转基因小鼠与Lin28B转基因小鼠.PCR鉴定转基因小鼠的基因型,筛选出人类Lin28A与Lin28B表达的小鼠,统计两种转基因小鼠体重变化.结果:①经PCR鉴定与公司测序证明Lin28A和Lin28B两种载体构建成功.②PCR鉴定小鼠基因型,筛选出可以特异性表达人Lin28A或Lin28B的转基因小鼠,并比较转基因小鼠与同窝野生型小鼠体重,发现两种转基因小鼠体重均大于同窝野生型小鼠,说明在小鼠体内过表达Lin28A或Lin28B均能引起小鼠体重增加.结论:人Lin28A与Lin28B在转基因小鼠体内能正常表达,并且能发挥生物学功能.又因为Lin28A和Lin28B在小鼠体内过表达会引起小鼠体重增加,我们推测其可能通过影响小鼠糖代谢过程引起小鼠体重改变.构建的Lin28A和Lin28B的转基因小鼠为进一步研究Lin28A和Lin28B在人新陈代谢、生长和发育过程中的作用提供了动物模型.     

抗黄曲霉尿酸氧化酶单克隆抗体的制备和初步鉴定

目的:制备抗黄曲霉尿酸氧化酶单克隆抗体。方法:采用杂交瘤技术,获得2株针对重组黄曲霉尿酸氧化酶(rUOX)的杂交瘤细胞McAb17和McAb3;采用盐析和A蛋白亲合层析柱纯化该抗体。结果:McAb17和McAb3的腹水效价达到1∶512000,纯化后获得纯度大于95%的单抗,抗体亚类(型)分别为IgG1/k型和IgG2a/k型;ELISA结果显示制备的单抗与rUOX和Rasburicase(商品化rUOX)可发生特异反应。结论:制备了抗黄曲霉尿酸氧化酶单克隆抗体McAb17和McAb3,为检测rUOX在动物体内的代谢变化提供了良好的实验基础。     

人、鼠原肠形成蛋白基因的克隆和初步分析

目的：分析原肠形成蛋白（TSG）在几个发育阶段的人和小鼠睾丸中的差异表达。方法：应用cDNA微阵列技术对成人和胚胎睾丸进行基因表达图谱分析,获得在成人高表达、胚胎低表达的人TSG的全长基因;利用RT-PCR,从4周龄小鼠睾丸中克隆出小鼠TSG基因,用地高辛标记的探针进行原位杂交,检测小鼠TSG在睾丸中的表达。结果：人TSG在成人睾丸中高表达,在胚胎中低表达;小鼠TSG仅在小鼠睾丸生殖细胞中表达,在间质细胞中不表达。结论：小鼠睾丸TSG与骨形态发生蛋白（BMP）可能同步表达,提示在小鼠精子发生中也可能存在一条由TSG信号激活BMP的传导途径。     

补骨脂素对中波紫外线导致人皮肤HaCaT细胞光老化的保护作用

目的:研究补骨脂素对中波紫外线(UVB)导致人皮肤HaCaT细胞光老化的保护作用及其作用机制。方法:选择不同浓度的补骨脂素,MTT法筛选药物的浓度;使用中波紫外线(UVB)照射永生化的HaCaT细胞建立UVB光老化模型;使用三种不同浓度的补骨脂素处理光老化模型,MTT法检测细胞的增殖及氧化试剂盒检测细胞中氧化酶的活性。RT-PCR及Western Blot分别检测JNK和白介素-8(IL-8)mRNA及蛋白表达量。结果:与空白组相比,10~(-7)mol/L、10~(-6)mol/L、10~(-5)mol/L补骨脂素组对HaCaT具有无明显的增殖作用(P0.05);与模型组相比,10~(-7)mol/L、10~(-6)mol/L、10~(-5)mol/L补骨脂素组对HaCaT具有无明显的增殖作用(P0.05),但是10~(-7)mol/L、10~(-6)mol/L、10~(-5)mol/L补骨脂素组SOD、GSH、CAT活性升高(P0.01),细胞JNK、IL-8 mRNA表达量均降低(P0.01),细胞JNK、IL-8蛋白表达量均降低(P0.05或P0.01)。结论:补骨脂素能够显著的保护HaCaT细胞的光老化,其机制可能与增强抗氧化酶活性,及抑制JNK信号通路,减少炎症因子的分泌有关。     

用Bac-to-Bac杆状病毒系统表达人生长激素

利用Bac to Bac杆状病毒载体表达系统将人生长激素 (humangrowthhormone ,hGH)基因cDNA克隆至转移载体pFastBac1中 ,得到pFastBac hGH ,再将其转化进入含穿梭载体Bacmid的受体菌DH10Bac中 ,发生转座作用 ,得到含hGH基因的重组穿梭载体rBacmid hGH .纯化DNA ,直接转染培养的昆虫细胞Sf9,得到重组病毒rAcV Bac hGH .经酶切PCR及Southern杂交鉴定 ,hGH基因正确地插入病毒基因组的多角体蛋白基因启动子下 ,SDS PAGE测得产物蛋白分子量为 2 2kD左右 .用免疫化学发光法测得转染上清中hGH表达水平可达 18μg ml ,与用传统的BEVS表达hGH相比 ,转染上清中hGH表达水平提高 4 0 0倍以上     

疏水层析用于大规模纯化重组HBsAg的工艺研究

应用疏水层析法从CHO细胞培养液中纯化HBsAg,每根制备柱每次可处理细胞收液350L,在适宜的上样流速和层析温度条件下,层析后可去除96％的杂蛋白,再经超速离心和凝胶过滤层析,可获HBsAg纯品。经检定,HPLC纯度高于95％,其余各项检定指标均符合《中国生物制品规程》要求。结果表明,此方法纯化效率高、处理样品量大、成本低,适于大规模生产。