小熊猫精原干细胞的分选与培养

野生动物的保护手段主要包括就地保护、易地保护与离体保护。精原干细胞（SSCs）是雄性动物维持生殖能力的根本,既能通过自我更新产生新细胞,也能通过分化产生精子,在小熊猫（Ailurus fulgens）离体保护方面具有广阔的应用前景。动物睾丸中精原干细胞数量极少,分离纯化与体外培养对于其研究和应用至关重要。本研究选择整合素α6（ITGA6）蛋白作为精原干细胞分子标记,采用免疫磁珠分选（MACS）技术富集了3月龄小熊猫睾丸中的ITGA6阳性细胞。流式细胞术检测发现分选后ITGA6阳性细胞纯度可达74.27% ± 8.73%,显著高于分选前（32.60% ± 3.06%）。将分选后的细胞接种到层粘连蛋白包被的细胞培养板中,用含胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）、表皮细胞生长因子（EGF）与成纤维细胞生长因子（bFGF）的培养基进行体外培养。培养10 d后,在显微镜下可观察到典型的精原干细胞集落,结合逆转录PCR（RT-PCR）和细胞免疫荧光染色发现这些细胞集落特异性表达精原干细胞分子标记蛋白ITGA6、早幼粒细胞白血病锌指蛋白（PLZF）和胸腺细胞分化抗原1（THY1）,同时也表达生殖细胞标记蛋白VASA和DAZL。本研究结果证实,ITGA6可作为小熊猫精原干细胞的分子标记用于细胞分选富集,同时初步建立的培养体系也为小熊猫精子发生机制与应用研究提供材料。     

红酵母发酵产生胡萝卜素的研究

胡萝卜素是一种重要的食用色素,是人体内代谢过程中维生素A的前体。研究表明胡萝卜素具有着色、增补营养及保健等功能,因此被广泛用作饮料、食品及饲料添加剂。从天然果实及蔬菜中提取胡萝卜素存在着成本高、工艺复杂及着色力差等缺点。而化学合成法生产胡萝卜素,尽管成本低,却因其活性低和毒性问题,在使用上受到一定限制。利用微生物发酵产生胡萝卜素可以克服上述缺点,用红酵母发酵产生胡萝卜素具有成本低、周期短、菌体无毒,并含有多种其它生物活性物质,因此具有广泛的实际应用前景。本研究对6株红酵母菌进行了发酵分析实验,从…     

苏云金杆菌超氧化物歧化酶的纯化和性质研究

苏云金杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）９１６５超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）,经硫酸铵分级沉淀、ＳｅｐｈａｄｅｘＦ－１００凝胶过滤及非变性凝胶电泳（ＰＡＧＥ）三步纯化,纯酶比活力为４３８８ｕ／ｍｇ,属Ｍｎ－ＳＯＤ,分子量为４７．９ｋｕ,由二个亚基组成,含１９种氨基酸。     

发酵木糖产生木糖醇的酵母菌的筛选

木糖醇是天然产生的五碳多元醇,作为功能性的甜味剂,其甜度和能量均与蔗糖相当。木糖醇的代谢不需要胰岛素的促进,因而与一般糖类的代谢途径不同。木糖醇是糖尿病患者的理想的糖代用品,并能明显降低转氨酶,有助于治疗糖尿病、护肝和防龋齿的作用。木糖醇的国内外市场十分广阔,目前世界上生产木糖醇的原料主要是木糖,用化学还原或生物转化菌可生产木糖醇,但化学法生产工艺复杂、成本较高,而已对环保液有影响。用微生物发酵法生产木糖醇是发展的必然方向。我们进行了发酵木糖产生木糖醇的酵母菌种的筛选研究。本研究对分离收集到的４…     

三种松树的生理生态学特性研究

测定南亚热带丘陵地马尾松、湿地松和加勒比松光合速率、蒸腾速率、日同化量和水分利用效率的变化．结果表明,３种松树光合速率和蒸腾速率都具有明显的日变化和季节变化,夏季的光合速率和蒸腾速率最高,冬季最低;加勒比松的平均日同化量为９．３４ｇ·ｋｇ－１、平均水分利用效率为１５９．７５μｍｏｌＣＯ２·ｇ－１Ｈ２Ｏ,高于其它树种;湿地松最低．加勒比松是很好的引种树种,更适合在当地推广     

显微注射法制备转基因小鼠的技术研究

转基因技术是发生工程学或胚胎操作技术中的一部分。这一技术包括有受精卵的采集,受精卵的体外培养,胚胎移植等技术,转基因动物制作是其应用技术之一,它是将外源ＤＮＡ片段用显微注射法直接注入受精卵原核,使外源ＤＮＡ随机整合到寄主基因组中而形成转基因小鼠。我们建立完善这一技术的目的是在实验动物的生产中为转基因动物的生产提供稳定可靠的保证。我们将ｐＣＸＴＧＡＰ、ｐＣＳＬＮ等基因分别注入受精卵原核制备相应的转基因动物模型,并从中总结较佳的操作技术。结果经检测阳性转基因小鼠占出生幼鼠的１６３８％。我们认为不仅要有精细的微注射技术、动物的选用和饲育、严密的胚胎操作都是转基因动物制作成功的重要条件。     

stNI同功酶限制 修饰系统基因的表达检测和定位分析

鉴定了Ｅ．ｃｏｌｉＨＢ１０１和ＪＭ１１０的部分遗传标记,作为受体菌分别用于ＢｓｔＮＩ同功酶限制－修饰系统中限制性内切酶（Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅ,简称Ｒ）基因和甲基化酶（Ｍｅｔｈｙｌａｓｅ,简称Ｍ）基因表达的检测。用外切酶ＩＩ单向删切含ＲＭ基因的ＤＮＡ片段,获得２３个缺失突变亚克隆。通过检测各亚克隆表达的Ｒ酶和Ｍ酶活性,将Ｒ和Ｍ基因分别定位在距克隆位点ＰｓｔＩ的０２→１４ｋｂ和１５→３．３ｋｂ范围内。分析表明：该系统属于Ｉ类限制修饰系统,两个基因受控于不同的启动子;该系统与Ｅ．Ｃｏｌｉ染色体编码的胞嘧啶ＤＮＡ甲基转移酶（Ｄｃｍ）的识别序列相同,后者的甲基化作用也能阻止Ｒ酶的切割。Ｒ＋Ｍ－的重组质粒对Ｄｃｍ＋和Ｄｃｍ－的宿主都是致死性的,这说明在进化过程中,与Ｒ基因紧密连锁的Ｍ基因对系统的存在至关重要     

无蹼壁虎(Gekko swinhonis)卵泡发育的研究

用光镜观察了无蹼壁虎卵泡发育过程．结果显示,其卵泡有显著的季节性变化,可分两期,即卵黄形成前期及卵黄形成期．卵泡来源于胚床内的卵母细胞及其周围的卵泡细胞,其发育过程有４个主要特点：１）卵泡鞘为复层扁平上皮,内层细胞碱性磷酸酶（ＡＬＰ）阳性率为１００％;２）卵黄形成前期卵泡核出现染色体及波状核膜;３）颗粒层早期由３种细胞构成：梨状细胞、中间型细胞及小细胞;４）后期颗粒层解体,卵母细胞内出现大量的卵黄小板．最后讨论卵泡鞘ＡＬＰ高含量及卵黄小板形态差异的原因及意义     

葛洲坝下游胭脂鱼的繁殖生物学和人工繁殖初报

胭脂鱼(Myxocyprinus asiaticus)属鲤形目,胭脂鱼科,是我国的一种珍稀鱼类。胭脂鱼科约有65种,几乎都分布于北美洲。在亚洲只有两种,而见于西伯利亚东部的亚口鱼(Catostomus catostomus)是与北美共有的一个种。唯有胭脂鱼是亚洲特有的物种,因此,它在鱼类学和动物地理学上占有特殊的地位,具有重要的科学价值。胭脂鱼主要分布在长江,其体型大,摄食水生无脊椎动物。胭脂鱼产卵场主要在长江上游,繁殖的仔鱼大量漂流到中下游,生长数年成熟后,溯游到上游参加繁殖。