肺炎衣原体毒力相关基因结构与功能的研究进展

肺炎衣原体是引起人类呼吸道和心血管疾病的重要病原体.目前血清分类法只有1个血清型,近年来对它的基因分析提示可能存在不同的基因型.由属特异抗原基因编码的主要外膜蛋白、热休克蛋白、脂多糖作为毒力因子,在肺炎衣原体致病过程中起主要作用,另外还有一些种特异抗原基因编码的毒力因子和由肺炎衣原体介导宿主产生的毒力因子.     

生殖支原体快速检测的研究进展

生殖支原体是泌尿生殖道感染疾病的重要病原体,本文阐述筛选生殖支原体的多种快速诊断方法,高敏感性和特异性的分子生物学方法有助于生殖支原体的快速诊断,这些方法包括免疫荧光显微技术、免疫印迹法、DNA探针、聚合酶链反应等。     

细菌多药外排系统的研究进展

目前各种细菌的耐药性问题已引起了科学家们的广泛关注,细菌的多药外排系统是引起细菌多药耐药的主要原因之一。本文着重介绍了与多药耐药相关的两大类多药外排系统(ABC型多药外排系统和次级多药外排系统)各家族成员的结构特点、表达调控和底物范围,以及解决多药外排系统引起耐药性的几项措施。     

hDaxx与细胞肿瘤抑制子p53在体内外的相互作用

与急性早幼粒细胞性白血病蛋白(promyelocytic leukemia protein,PML)在体内相互作用共定位于细胞核PML致癌结构城(PML oncogenic domains,PODs)的人Daxx(human Daxx,hDaxx),能结合Fas死亡结构域诱导细胞凋亡.细胞肿瘤抑制子p53抑制细胞及病毒转录,提高细胞内Fas的表达并调节细胞凋亡.为了探索hDaxx与p53在诱导细胞凋亡中有无相互作用及其作用效果,利用酵母双杂交体系测定发现p53通过C端与hDaxx结合,共免疫沉淀反应及Western blot结果显示hDaxx与p53能在体内外直接结合.hDaxx与p53结合并发生相互作用可能对细胞周期有一定的调节作用.     

腺病毒E1B55ku癌蛋白打破hDaxx与PML在细胞核的共定位

利用间接免疫荧光试验,通过Confocal激光扫描生物荧光显微镜和图像软件分析腺病毒(adenovirus,Ad)E1B 55 ku癌蛋白(Ad E1B 55 ku)与人Daxx(human Daxx,hDaxx)在细胞核的定位关系,研究它对早幼粒细胞性白血病蛋白(promyelocytic leukemia protein,PML)与hDaxx在细胞核定位关系的影响.实验结果表明,Ad E1B 55 ku与hDaxx共定位细胞核,并打破hDaxx与PML共定位于细胞核PML致癌结构域(PML oncogenic domams,PODs).     

Caski细胞内Daxx与HPV16 E2蛋白的结合作用

目的研究人乳头瘤病毒16型(HPV16)E2蛋白在Caski细胞内与Daxx的相互作用,探讨它们在HPV16所致宫颈癌发生发展中的作用。方法利用间接免疫荧光染色技术观察HPV16 E2和Daxx在Caski细胞中的分布或共定位;通过免疫共沉淀试验和免疫印迹分析HPV16 E2与Daxx在Caski细胞内的相互作用。结果在Caski细胞内,Daxx和HPV16 E2主要分布于胞浆,少数分布于胞核,且两种信号在细胞浆内有一定的共存;抗E2抗体能沉淀Daxx,反之抗Daxx抗体同样能够沉淀HPV16 E2。结论 HPV16 E2与Daxx在Caski细胞存在直接的相互作用。     

MyD88在鼠衣原体生殖道感染过程中的作用

用1×104IFUs的MoPn经生殖道感染WT、MyD88 KO小鼠,每组一半小鼠于感染后54d,再次感染相同剂量的MoPn。每隔3-4d取生殖道分泌物,测定其中衣原体包涵体的数量。初次感染后80d,处死小鼠,眼眶取血,分离血清,用间接免疫荧光法测其中抗体类型及效价;同时分离生殖道,肉眼观察其输卵管、子宫角水肿程度,并做病理切片观察其炎症反应;分离小鼠脾细胞,体外用衣原体EB刺激,测定产生的IL-4、IL-5、IL-17和IFN-γ等细胞因子水平。MyD88 KO小鼠阴道带菌时间与WT组相当,但上生殖道病理反应,尤其是输卵管水肿程度明显比WT组严重。脾细胞细胞因子水平显示,MyD88 KO鼠IFN-γ和IL-17的产生量明显比WT组低,而IL-4和IL-5水平明显高于WT组。血清中各亚类抗体效价无明显区别,但MyD88 KO鼠血清IgG2a/IgG1比值1,且明显低于WT组。研究结果说明MyD88与抗衣原体免疫无关,但与衣原体引起的炎症损伤密切相关。     

肺炎嗜衣原体蛋白酶样活性因子免疫优势区基因 重组蛋白在早期诊断中的应用

[目的]克隆和表达肺炎嗜衣原体(Chlamydophila pneumoniae,Cpn)蛋白酶样活性因子(CPAF)免疫优势区基因,评价重组蛋白在早期感染诊断中的应用价值.[方法]挑选并克隆出Cpn CPAF免疫优势区基因,构建原核表达载体,诱导表达并纯化重组蛋白,分析其抗原特异性;间接ELISA法检测Cpn参考血清、临床血清标本中的特异性IgM抗体,以及呼吸道感染患者痰咽拭子中的Cpn抗原;检测沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)临床阳性血清和泌尿生殖道分泌物.[结果]高效表达和纯化出一相对分子量约51.3kDa的重组蛋白;Western blot证明其只与人抗Cpn抗血清发生特异性反应;间接ELISA法检测40份Cpn IgM参考血清,阴性和阳性结果的一致率均为100%(40/40);与"金标准"方法MIF对照,检测300例临床血清标本中的IgM抗体,符合率为98.3%;与PCR试剂对照,检测120份呼吸道感染患者痰咽拭子中的Cpn抗原,符合率为88.3%;检测Ct阳性血清和泌尿生殖道分泌物,与Ct没有交叉反应.[结论]制备的CPAF免疫优势区基因重组蛋白具有良好的抗原性,在Cpn感染早期诊断中具有较高的利用价值.     

沙眼衣原体质粒蛋白pORF5核酸疫苗抗衣原体生殖道感染免疫保护作用

探讨沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis, Ct)pORF5质粒蛋白核酸疫苗免疫保护效果, 及分析其可能的免疫保护机制, 以确定pORF5在Ct疫苗研制中的应用价值. 构建pORF5核酸疫苗, 建立Ct感染小鼠模型, 并在该模型中评价pORF5核酸疫苗抗Ct感染效果. 运用细胞培养法检测Ct清除率及定植量的改变, ELISA法分析脾淋巴细胞IFN-γ和IL-4产生水平及小鼠血清及生殖道局部抗体产生情况; HE染色法分析输卵管病理组织变化; MTT法分析脾淋巴细胞增殖. 结果经鼻黏膜3次免疫后, pORF5核酸疫苗组在Ct感染后第24天其清除率为100%, 显著高于pcDNA3.1, PBS对照组(P<0.01), 定植密度明显低于对照组(P<0.01), 仅在pORF5核酸疫苗组小鼠血清及生殖道中检测到了特异性抗体, 产生的抗体亚类分别以IgG2a, IgA为主; 免疫组小鼠脾淋巴细胞产生IFN-γ及刺激指数均明显高于pcDNA3.1, PBS对照组(P<0.01), 但产生 IL-4的水平均较低. pORF5核酸疫苗组小鼠输卵管解剖结构基本正常, 而pcDNA3.1, PBS组小鼠输卵管壶腹部、峡部肿胀, 管壁血管扩张充血, 单侧或双侧发生不同程度扭曲变形积水. 这些资料显示pORF5核酸疫苗可诱导小鼠产生明显的抗Ct保护效应, 其可能的免疫保护机制包括诱导Th1型为主的细胞免疫应答及高效价的特异性抗体的产生, 提示pORF5核酸疫苗具有潜在的疫苗研究与开发价值.     

梅毒螺旋体遗传物质和致病机制的研究进展

梅毒螺旋体(Treponema pallidum,Tp)是慢性全身性性传播疾病梅毒的病原体。由于Tp不能持续体外培养,阻碍了对Tp结构及其致病机制的深入研究。目前,Tp(Nicholes株)基因组测序的完成以及分子生物学技术的发展,为Tp的研究提供了机遇。就Tp的遗传物质和致病机制的研究进展进行综述。