问号钩端螺旋体疫苗候选基因LB061的抗原性和保守性研究

目的 克隆表达和鉴定问号钩端螺旋体黄疸出血群赖型赖株中疫苗候选基因LB061,研究LB061的免疫原性和在不同血清型钩端螺旋体菌中的保守性。方法 生物信息学软件分析预测LB061的特征。构建原核表达质粒pQE31-LB061,经IPTG诱导后用SDS-PAGE及Western印迹法鉴定表达情况。用表达的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,Western印迹法检测其抗原性和在不同血清型钩端螺旋体中的保守性。Western印迹法检测钩端螺旋体全菌兔抗血清中的LB061抗体。结果 生物信息学预测结果显示,LB061含有DUF839家族结构域。成功克隆了重组质粒pQE31-LB061,表达的重组蛋白能刺激BALB/c小鼠产生抗体(效价为1∶32000),并能与相应抗体反应,具有良好的抗原性。在16株不同血清型的钩端螺旋体中均可检测到LB061蛋白的表达,并在钩端螺旋体赖株全菌兔抗血清中检测到其抗体。结论 LB061蛋白可以作为外膜蛋白刺激宿主免疫系统产生抗体,具有良好的抗原性和保守性。本研究为其作为疫苗候选基因的研究奠定了基础。     

hDaxx与细胞肿瘤抑制子p53在体内外的相互作用

与急性早幼粒细胞性白血病蛋白(promyelocytic leukemia protein,PML)在体内相互作用共定位于细胞核PML致癌结构城(PML oncogenic domains,PODs)的人Daxx(human Daxx,hDaxx),能结合Fas死亡结构域诱导细胞凋亡.细胞肿瘤抑制子p53抑制细胞及病毒转录,提高细胞内Fas的表达并调节细胞凋亡.为了探索hDaxx与p53在诱导细胞凋亡中有无相互作用及其作用效果,利用酵母双杂交体系测定发现p53通过C端与hDaxx结合,共免疫沉淀反应及Western blot结果显示hDaxx与p53能在体内外直接结合.hDaxx与p53结合并发生相互作用可能对细胞周期有一定的调节作用.     

腺病毒E1B55ku癌蛋白打破hDaxx与PML在细胞核的共定位

利用间接免疫荧光试验,通过Confocal激光扫描生物荧光显微镜和图像软件分析腺病毒(adenovirus,Ad)E1B 55 ku癌蛋白(Ad E1B 55 ku)与人Daxx(human Daxx,hDaxx)在细胞核的定位关系,研究它对早幼粒细胞性白血病蛋白(promyelocytic leukemia protein,PML)与hDaxx在细胞核定位关系的影响.实验结果表明,Ad E1B 55 ku与hDaxx共定位细胞核,并打破hDaxx与PML共定位于细胞核PML致癌结构域(PML oncogenic domams,PODs).     

问号钩端螺旋体中一个新的OmpA家族蛋白抗原性及保守性研究

目的克隆表达和鉴定问号钩端螺旋体(L.interrogans)黄疸出血群赖型赖株中一个新的外膜蛋白(Omp)A家族基因LA0301,研究LA0301编码蛋白的抗原性和在15个钩端螺旋体(简称钩体)血清群代表株中的保守性,探讨其在疫苗研究中的意义。方法生物信息学软件分析预测LA0301的特征。构建原核表达重组体pQE31-LA0301,经IPTG诱导后用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及蛋白质印迹法(Western blot)鉴定表达情况。用表达的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,Western印迹检测其免疫反应性和在不同血清型钩体中的保守性。酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western印迹检测兔抗钩体全菌血清中的LA0301编码蛋白的抗体。结果生物信息学预测结果显示,LA0301具有OmpA家族的结构域。克隆表达了重组质粒pQE31-LA0301,重组蛋白能刺激BALB/c小鼠产生特异性抗体,效价为1:32000。在兔抗钩体全菌血清中检测到特异的LA0301蛋白抗体,并在15个血清群的代表株钩体中均可检测到LA0301蛋白。结论LA0301蛋白是问号钩体中一个新的OmpA家族蛋白,具有良好的抗原性和保守性,并且能在钩体感染的过程中刺激机体产生相应的抗体。为进一步研究钩体新型疫苗候选基因奠定了基础。     

腺病毒E1B 55kD癌蛋白与hDaxx的相互作用

为了探讨腺病毒(adenovirus,Ad)E1B 55kD癌蛋白(Ad E1B 55kD)打破hDaxx和PML共定 位细胞核的作用机制,本文利用体内外共免疫沉淀反应研究Ad E1B 55kD与hDaxx的结合反应 ,并通过酵母双杂交体系测定两种蛋白质的相互作用及其作用的氨基酸残基序列.结果显示 Ad2 E1B 55kD通过C端58个氨基酸(aa)与hDaxx结合并发生相互作用.Ad12 E1B 5 5kD与hDaxx结合需全序列aa及其构象.共免疫沉淀反应和Western blot结果证实Ad2/5或Ad1 2 E1B 55kD能在体内外与hDaxx直接结合.