CH50真核表达载体pCH503的构建及小鼠体内表达的趋化与抗肿瘤活行

构建重组FN多肽CH50真核表达载体并在小鼠体内表达,研究其趋化与抗肿瘤作用.采用重组DNA技术构建表达质粒;体内进行基因转染,采用RT-PCR鉴定导入基因的表达;通过肝素亲和层析、SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物;腹腔细胞计数、Giemsa染色分析以及肌肉组织切片与染色观察体内基因转染后的趋化作用;小鼠黑色素瘤模型研究基因转染抑制肿瘤的作用.从CH50原核表达载体获得重组多肽的cDNA,5＇端加上小鼠IFN-γ5＇端非编码区和信号肽编码区的cDNA,3＇端加上人FN cDNA的3＇端非编码区;将重组cDNA插入pREP8质粒,即构建出pCH503质粒.巨噬细胞在体内经pCH503转染,然后在体外培养,能够产生CH50多肽.以pCH503分别进行腹腔基因转染和肌肉内基因转染,均可对免疫细胞产生趋化作用;pCH503体内转染可以使小鼠腹腔内黑色素肿瘤结节数降低50%～601.CH50真核表达载体pCH503可在小鼠体内表达,体内基因转染可趋化免疫细胞和抑制肿瘤结节形成,在肿瘤综合治疗中有重要意义.     

基于丹参基因组的COI1基因抗虫与次生代谢调控功能研究

本草基因组学极大地推动了药用植物分子育种、次生代谢网络调控和品质成因等研究的进程.本研究基于本草基因组学,从模式药用植物丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)基因组中克隆丹参COI1(SmCOI1)基因并初步分析其蛋白特征及表达模式.利用RNAi技术获得丹参COI1沉默株系(iCOI1).抗虫性检测结果显示,与对照相比iCOI1株系叶片损伤指数上升,对昆虫咬噬耐受性减弱;同时,抗性相关基因WKRY70和NPR1的表达量在iCOI1株系中显著降低.进一步检测iCOI1株系中主要次生代谢产物合成与积累情况,结果表明iCOI1株系中迷迭香酸、丹酚酸B、隐丹参酮及丹参酮ⅡA的含量较野生型显著降低,其生源合成途径中的关键酶基因C4H,RAS,HCT,HMGR,GGPPS,CPS,KSL,CYP76AH1的表达量较野生型显著下调,且与丹参COI1的沉默显著正相关.上述结果表明,丹参COI1基因参与调控丹参抗虫性及主要次生代谢产物合成和积累过程.本研究为丹参抗性研究和次生代谢过程调控提供理论依据,也为优质高产药用植物品种选育奠定了基础.     

双价和双特异性Diabody的构建及表达

单链抗体(ScFv)是由一个重链可变区(V_H)、一个轻链可变区(V_L)经连接肽(linker)连在一起构成的单价小分子抗体,为使其能组装成双价,我们对一个抗人红细胞的ScFv进行了改造,将其连接肽由17个氨基酸[SR(GGGGS)_3]缩短为6个氨基酸(SRGGGS),强迫不同分子间的V_H和V_L组合成F_V,从而形成双价小分子抗体(Diabody),在大肠杆菌中分泌表达后,显示:①具有血球凝集活性:抗人RBC ScFv虽可与RBC结合,但不能产生凝集     

丹参bHLH转录因子基因SmMYC2的克隆和表达分析

MYC2是植物茉莉酸类激素响应途径中的核心转录因子,在植物防御反应、次生代谢调控及生长发育过程中均有重要的调控作用。基于丹参转录组和基因组survey序列,本研究克隆了丹参转录因子MYC2的基因序列,并命名为Sm MYC2(Gen Bank No.KJ945636)。Sm MYC2基因的c DNA序列长度为1910 bp,开放阅读框(ORF)的长度为1809 bp,编码602个氨基酸,无内含子;该基因编码蛋白与烟草、番茄等植物的MYC2蛋白具有较高的同源性;Sm MYC2蛋白无跨膜结构域、信号肽等结构。实时荧光定量PCR检测结果显示,Sm MYC2在丹参的根、茎、叶、花中均有表达,并且在根和茎中的表达量更高;此外,该基因表达受茉莉酸甲酯、光和机械损伤的诱导,但受赤霉素的抑制。本实验结果为进一步探讨Sm MYC2基因在丹参中的生物学功能奠定了基础。     

天麻素对脑缺血再灌注小鼠海马新生神经元的保护作用

目的:探讨不同剂量天麻素(Gastrodin,GAS)对缺血再灌注模型小鼠海马新生神经元的保护作用及其可能机制。方法:将50只C57BL/6小鼠随机分为假手术组(Sham)、模型组(MCAO+Vehicle)、模型+天麻素低剂量(10 mg/kg)组(MCAO+GAS(L)),模型+天麻素中剂量(50 mg/kg)组(MCAO+GAS(M)),模型+天麻素高剂量(100 mg/kg)组(MCAO+GAS(H))。除Sham组接受假手术外(皮肤切开,分离颈动脉),分别对MCAO组及MCAO+GAS各组行右侧颈内动脉栓线术,造成并保持大脑中动脉闭塞(MCAO)1 h。术后,Sham组和MCAO组即刻腹腔注射生理盐水(0.1 m L/kg),MCAO+GAS各组注射不同剂量天麻素,每24小时重复给药1次,连续7天。最后一次注射24 h后,对各组小鼠的神经功能进行评分,之后处死动物取脑组织,通过HE、免疫荧光染色以及Western Blot观察和比较各组小鼠海马形态学和DCX的表达水平。结果:(1)术后第7天,MCAO+Vehicle组小鼠神经功能评分(3.2±0.63)显著高于假手术组、MCAO+GAS(M)(1.8±0.63)和MCAO+GAS(H)组(P0.05)。(2)术后第7天,与假手术组相比较,MCAO+vehicle组海马颗粒细胞排列不规则,核稍大且固缩深染,齿状回部有较多空洞;与MCAO+vehicle组比较,MCAO+GAS(H)组海马空洞样改变减少,细胞排列较整齐,胞膜较完整,核结构较清晰。(3)术后第7天,与假手术组相比较,DCX染色阳性细胞数显著减少,而MCAO+GAS(M)组DCX染色阳性细胞数(183±64.5)和MCAO+GAS(H)组DCX染色阳性细胞数(195±93.68)显著高于MCAO+Vehicle组。MCAO+Vehicle组海马的DCX表达水平显著低于假手术组及MCAO+GAS(M)组和GAS(H)组(P0.01)。结论:天麻素可能通过上调海马DCX的表达水平,调节海马神经发生,进而对缺血性脑卒中后再灌注发挥神经保护作用。     

降低UV-B辐射对烤烟株高影响的非自治Logistic模型

根据在低纬高海拔的云南烟区,对烤烟品种云烟87进行不同程度的降低UV-B辐射的试验结果,建立了描述紫外线辐射影响烤烟株高生长形态的非自治Logistic模型.模型分析结果表明,与自然UV-B辐射相比较,当辐射强度的适当降低时,有利于烟株的生长,然而,当辐射强度降低得过多时,反而又不利于其生长.     

纤维结合素分子中Asp1961～Glu1978序列对三结构域多肽在大肠杆菌中表达的影响

构建了人纤维结合素（ＦＮ）的三功能结构域重组多肽的两个表达质粒,分别编码两个重组多肽：ＣＨ６２（ＦＮ的Ｐｒｏ１２３９～Ｓｅｒ１５１５经Ｍｅｔ和Ａｌａ１６９０～Ｖａ１２０４９相连）和ＣＨ６３（从ＣＨ６２中删除了Ｉｌｅ１８５０～Ｇｌｕ１９７８）．ＣＨ６２在大肠杆菌中的表达效率很低,而ＣＨ６３的表达效率则很高,结果提示ＦＮ分子中的Ａｓｐ１９６１～Ｇｌｕ１９７８序列是影响三结构域多肽在大肠杆菌中表达的关键结构．ＣＨ６３经过溶解和复性后,可通过肝素－琼脂糖亲和层析得到纯品,所得纯品具有结合肝素和结合细胞的功能,且结合细胞的能力比双结构域ＦＮ多肽更强,表明两个结合细胞的功能结构域均有活性．ＣＨ６３的制备为进一步研究具有更强的抑制肿瘤转移作用的基因工程制品奠定了基础．     

马尔可夫药物动力学模型B

本文建立的Markov模型B适于计算肾、心、脑、皮肤、脂肪、肌肉中的血药浓度,它具有生理药动学模型的优点,即动力学参数具有解剖学和生理学意义,又能象房室模型一样用简单、优美的形式表示模型的解.     

银杏性别的早期鉴定

银杏的幼年期比较长,长达十几年,故在幼年期较难区分出性别。本文根据雌雄个体代谢的差异,采取