香蕉束顶病毒基因Ⅰ的克隆及序列分析

以中国漳州地区感染ＢＢＴＶ的香蕉组织总ＤＮＡ为模板,根据我国台湾地区ＢＢＴＶ分离物基因组Ⅰ序列,设计并合成了一对引物,通过ＰＣＲ扩增出约５００ｂｐ的片段。利用ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＳＫ Ｔ－载体获得此片段的克隆,经测序表明为ＢＢＴＶ组分Ⅰ的部分序列。由已测知的ＢＢＴＶ基因组Ⅰ序列设计一对相邻引物,以我国漳州的感染ＢＢＴＶ香蕉组织总ＤＮＡ为模板,通过ＰＣＲ坟增出约１．１ｋｂ的片段。利用ｐＢｌｕｅｓ     

草苷膦抗性新基因的克隆、序列分析及其蛋白高级结构预测

利用错误倾向PCR（error-prone PCR）突变技术,以可变盐单胞菌（Halomonas variabilis）HTG7的5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸(EPSP)合酶基因为模板进行随机PCR扩增,得到目的基因片段（约1.35 kb）.将该基因片段与pACYC184载体连接后转化EPSP合酶缺陷型菌株大肠杆菌ER2799.利用功能互补筛选法得到了2株不具有草苷膦抗性的EPSP合酶阳性克隆突变株,记为Pmu1和Pmu2.序列分析表明,突变体Pum1的EPSP合酶编码区与突变前基因相比,核苷酸有2处发生突变,导致氨基酸残基1处发生了改变;突变体Pmu2的EPSP合酶编码区与突变前基因相比,核苷酸有5处发生突变,导致氨基酸残基2处发生了改变.对突变前后EPSP合酶进行比较预测发现,其三级结构及蛋白中心骨架是大致相同的,但突变前后氨基酸位点肽平面和Cα相连的N键之间形成的扭转角度存在一定的差别.这些结果表明,酶的功能主要由蛋白的构象决定,二肽链形成后肽平面和N键之间角度的变化,造成高级结构构象细微的差别,致使草苷膦抗性功能丢失.     

人为干扰对黄土高原子午岭油松人工林土壤物理性质的影响

研究了放牧、收集枯落物及清灌等人为干扰活动对黄土高原子午岭油松林土壤结构及抗蚀性的影响。结果表明,随人为干扰强度的增加,0～50cm土壤中砂粒含量比无干扰时分别增加了11.83%、37.80%和51.60%;粉粒下降了8.16%、11.83%和15.55%;粘粒下降了8.10%、20.84%和30.72%,土壤表现出粗骨化趋势;＞0.25mm水稳性团聚体含量比无干扰林地分别下降了16.59%、43.12%和61.13%,＞1.0mm的团聚体含量仅为无干扰林地土壤的27.78%和24.34%,1.0～0.25mmm的团聚体下降幅度较小;＞0.05mm微团聚体的比例分别下降了19.39%、32.62%和33.47%。而<0.05mm微团聚体所占比例随干扰程度的增加而大幅度上升。土壤容重增加了0.11～0.41g/cm3。土壤总孔隙度分别降低了13.64%、25.47%和39.14%,毛管孔隙下降了7.79%、11.54%和29.32%,非毛管孔隙下降了28.47%、60.79%和64.08%。说明表层土壤非毛管孔隙对人为干扰更为敏感。最大持水量分别下降23.42%、37.15%和52.92%;毛管持水量下降33.79%、43.01%和52.22%;自然含水量下降31.03%、39.34%和46.28%,饱和持水量下降16.14%、28.80%和49.68%;田间持水量下降了12.39%、33.92%和47.47%;土壤有效水含量下降了9.55%、20.55%和58.91%。土壤前3min初渗率下降了38.74%、51.45%和63.23%;稳渗速率下降了54.06%、71.63%和84.10%,相应地受人为干扰林地前30min累计入渗量也较未受人为干扰林地土壤分别低48.15%、65.93%和73.35%。饱和导水率较对照下降了8.73%、33.33%和51.00%。土壤的结构系数,由79.12%下降到27.32%,团聚度由59.48%下降到11.11%,分散率上升了1倍多,分散系数上升了4倍多。土壤枯落物层及有机质的减少是引起土壤物理性质恶化的主要原因,其次是放牧和踏实等活动。     

转录因子X-box结合蛋白1相互作用蛋白的筛选和鉴定

X-box 结合蛋白 1 是一种重要的转录因子,参与体内多项信号转导过程. 为进一步研究 XBP1 的生物学功能,运用酵母双杂交技术在肝细胞文库中筛选 XBP1 的结合蛋白. 首先运用 PCR 技术扩增获得 XBP1 的编码序列,克隆至 pGEM-T 载体,经测序鉴定后,亚克隆至诱饵载体 pGBKT7 中,转化酵母 AH109(a type). 免疫印迹检测诱饵质粒 pGBKT7-XBP1 在AH109 酵母中的表达之后,含有诱饵质粒的酵母 AH109 与含有肝细胞 cDNA 文库质粒 pACT2 的酵母 Y187(αtype)配合,配合后的二倍体酵母生长在含有 X-α-gal 的营养缺陷型培养基上 (SD/-Trp-Leu-His-Ade) 进行选择和筛选,经测序和序列比对确定阳性克隆的开放读码框 ORF,得到 7 种不同的蛋白质. 为了进一步验证这些筛选蛋白质与 XBP1 的相互作用,克隆其中一种蛋白质 MT1E,并运用 GST pulldown 和免疫共沉淀技术成功检测了 MT1E 和 XBP1 的相互作用(体外 / 体内),结果提示,MT1E 可能是 XBP1 的一个新的调节蛋白. 通过酵母双杂交技术筛选得到的 7 种蛋白质分别与肝细胞基础代谢、蛋白质的合成与运输、细胞的增殖与凋亡密切相关. 上述结果有助于揭示 XBP1 的生物学功能,为进一步探讨 XBP1 的表达和调控机制提供新线索.     

产纤维素体菌厌氧降解纤维素制乙醇的研究进展

纤维素(植物细胞壁的主要成分)是自然界最丰富的一种可再生资源,但是极难降解利用。纤维素体是一种多酶复合体,能够高效降解纤维素,降解产物能够被某些厌氧微生物利用发酵产乙醇。综述了近年来产纤维素体菌厌氧降解纤维素制乙醇的研究进展,报道了纤维素体结构和功能、重组设计型纤维素体、代谢工程、混菌培养等研究方向的最新成果和思路,并对其前景作了展望。可以预期,随着研究的深入,生物质制乙醇必将日益显示出其强大的市场竞争力。     

河北滦河口湿地鸟类多样性调查

2007年9月～2008年9月,采用样方法、样线法对河北滦河口湿地鸟类多样性进行研究.共记录鸟类184种,隶属于17目44科97属.其中,国家Ⅰ级重点保护鸟类2种,即丹顶鹤、黑鹳,占总种数的1.1%;国家Ⅱ级保护鸟类共21种,占总种数的11.4%.旅鸟138种,夏候鸟19种,留鸟14种,冬候鸟13种.鸟类区系组成中古北种135种(73%),广布种31种(17%),东洋种18种(10%);在春秋迁徙季节,种群密度大的鸟类分别是绿头鸭(0.26只/hm2)、红嘴鸥(0.12只/hm~2)、环颈鸻(0.066只/hm~2)、牛背鹭(0.044只/hm~2)、灰椋鸟(0.034只/hm~2).     

杆状病毒ac68基因的克隆、表达与抗体制备

目的：对苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒（Autographa califorica multicapsid nucleopoly hedrovirus,AcMNPV）开放阅读框68（open reading frame,ORF68,ac68）进行原核表达,制备该蛋白的多克隆抗体,为深入研究其功能提供基础。方法：将ac68基因克隆至原核表达载体pET28a上,在大肠杆菌BL21（DE3）中表达Ac68蛋白,通过His抗体检测进一步验证所表达的蛋白为带有组氨酸的融合蛋白。以纯化的Ac68蛋白作为抗原,免疫昆明小鼠制备多克隆抗体。结果：实现了ac68基因的原核表达,获得了该蛋白的多克隆抗体并在AcMNPV感染的Sf-9细胞中检测到一条大小为25kD左右的特异杂交带。结论：获得的抗体可用于Ac68蛋白功能的进一步研究。     

砂生槐种子蜂危害空间格局及理论抽样研究

应用6种聚集度指标、Taylor和Iwao回归分析法对砂生槐种子蜂幼虫的空间分布格局进行了分析,得出砂生槐种子蜂幼虫的空间分布型为聚集分布,田间调查抽样方法为分行取样法,并得出田间幼虫不同密度时的理论抽样数。     

人hIL-24Δ103重组腺病毒感染诱导A549细胞凋亡

白细胞介素24（interleukin 24,IL-24）是近年来新发现的1个IL-10家族细胞因子,具有明显的抗肿瘤活性．为了研究开发高活性、低分子量的IL-24,并探讨其用于肿瘤靶向治疗的可能性,本研究在前期基础上,进一步构建并制备了缺失N端103个氨基酸残基的IL-24（hIL-24Δ103）重组腺病毒,并观察了其对A549细胞生长增殖和凋亡的影响．首先,采用PCR技术扩增IL-24第104位至第206位氨基酸区域的编码序列,制备hIL-24Δ103重组腺病毒．用Ad-hIL-24Δ103重组腺病毒感染肺癌A549细胞. MTT分析结果表明,Ad-hIL-24Δ103感染显著抑制了A549细胞的生长．Hoechst 33258染色和流式细胞仪分析结果表明,Ad-hIL 24Δ103感染导致细胞凋亡．Western 印迹分析结果表明,Ad-hIL-24Δ103感染导致了PKR和eIF-2α蛋白的表达上调与磷酸化激活,提示PKR和eIF-2α参与了hIL-24Δ103导致的细胞生长抑制和细胞凋亡过程的调节．关键词 人白介素24;腺病毒;细胞增殖;细胞凋亡