BID蛋白因子诱导脂质体的渗漏和聚集

在大多数真核细胞凋亡中 ,线粒体扮演重要的角色。经一些因子诱导线粒体能释放细胞色素c、诱导凋亡因子 (AIF)等 ,从而引起一系列凋亡酶的激活反应 ,最后导致凋亡。Bcl-2家族蛋白具有调节线粒体释放细胞色素c和其它凋亡因子的作用 ,其中BID ,BAX ,BAK具有促进作用 ,而另一类Bcl-XL 则具有抑制作用。Bcl -2家族蛋白成员含有一些保守的微区称BH1 ,BH2 ,BH3 ,BH4等。BID分子只含有BH3微区。BID经凋亡酶8(Caspase8)处理后成为截短的Bid(truncatedBid,tBid),它能使线粒体明显渗漏或聚集 ,后者可在细胞核周围观察到这一现象。我们前曾报道tBid能诱导单层大脂体 (LUV )内包的胰蛋白酶或细胞色素c释放 ,本文研究并比较Bid ,tBid ,NBid(Bid分子的N端部分 )CBid(Bid分子的C端部分 )以及Bid的突变体 -Bid(D59A)和Bid(G94E)诱导LUVs释出内包的胰蛋白酶。结果表明 ,CBid、Bid和tBid具有相似的效果 ,而NBid ,Bid的两种突变体Bid(D59A)和Bid(G94E)则不能。如果比较上述几种蛋白因子与大豆磷脂脂质体的亲和力 ,其大小与它们诱导脂质体内包的胰蛋白酶泄出的能力相平行 ,即 ,tBid>Bid>Bid(D59A) ,而NBid和Bid(G94E)则几乎不能与脂质体相结合。Bid诱导脂质体的泄漏也与其磷脂组份有密切关系。脂质体中酸性磷脂 (如磷脂酸PA     

脱血红素细胞色素c的68~88肽段在插膜及与线粒体结合中具有关键作用

细胞色素c的前体蛋白——脱血红素细胞色素c是在细胞质中合成后运入线粒体的. 结合人工合成多肽及完整分子的缺失突变体探索了脱血红素细胞色素c跨膜转运中的关键肽段, 结果表明, 无论在单分子层插膜, 还是在与脂质体、线粒体的相互作用中, 脱血红素细胞色素c的68~88肽段都起着关键作用.     

神经节苷脂GM_3对肌质网Ca~（2＋）－ATP酶活力的调节

研究了神经节苷脂ＧＭ_３参入肌质网膜后Ｃａ~（２＋）－ＡＴＰ酶活力的变化,结果表明：ＧＭ_３参入肌质网膜后,对肌质网Ｃａ~（２＋）ＡＴＰ酶活性（ＡＴＰ水解活力与转运活力）有明显的激活作用．当参入的ＧＭ_３浓度为８μｍｏｌ／Ｌ、参入时间为１２０ｍｉｎ、温度为３０℃时,对Ｃａ~（２＋）－ＡＴＰ酶的激活作用最大．     

脱血红素细胞色素c对DMPG膜的插入研究

气－液界面单分子层实验发现鸡心脱血红素细胞色素ｃ对ＤＭＰＧ单分子层表现出很强的插入能力,这种插入能力受亚相溶液离子强度的调节。通过傅里叶变换红外光谱对鸡心脱血红素细胞色素ｃ与ＤＭＰＧ脂质体的作用进行了进一步研究,对磷脂不同区域的红外光谱分析表明鸡心脱血红素细胞色素ｃ不仅与ＤＭＰＧ头部存在静电相互作用而且与其疏水部分也存在相互作用。     

Mg~（2＋）促进线粒体H~＋－ATP酶的重建机理──H~＋－ATP酶复合体亚基水平的研究

用专一性标记蛋白质巯基的荧光探剂ａｃｒｙｌｏｄａｎ测定含Ｍｇ＾２＋的Ｆ０－ＡＴＰ酶或Ｆ０－ＯＳＣＰ－Ｆ１－ＡＴＰ酶的脂酶体的构象与无Ｍｇ＾２＋者明显不同,前者的蛋白质的－ＳＨ基团处于疏水性更强的微环境中;在有Ｍｇ＾２＋和ＯＳＣＰ同时存在下重建的Ｆ０－Ｆ１－ＡＴＰ酶脂酶体较无ＯＳＣＰ者表现更高的水解活力或膜电位,表明ＯＳＣＰ增强Ｍｇ＾２＋的促进作用,这进一步提示Ｍｇ＾２＋通过改变膜脂的物理状态促进线     

生物膜研究的一个难点与热点-内在膜蛋白三维结构的解析

１研究内在膜蛋白的三维结构的重要性象水溶性蛋白质一样,要深入了解膜蛋白的功能必须解析它们的三维结构。第一个水溶性蛋白质－肌红蛋白的三维结构的解析是由英国Ｋｅｎｄｒｅｗ于１９５７年用Ｘ－射线衍射法完成的,从而使他获得了诺贝尔奖。由于各种技术的日益发展与...     

Peptide 68-88 of apocytochrome c plays a crucial role in its insertion into membrane and binding to mitochondria

Apocytochrome c (Apocyt. C) is the precursor of cytochrome c. It is synthesized in the cytosol and posttranslationally imported into mitochondria. In order to determine the crucial sequence in apocyt. Ctranslocation, deleted mutant and chemically synthesized peptides with different length were used. Obtained results showed that sequence 68-88 of apocyt. C plays a critical role in its insertion into membrane and binding to mitochondria.     

硒对T-2毒素引起培养软骨细胞超微结构与功能改变的拮抗作用

当培养液中存在0.01ppmT-2毒素时,可引起离体培养鸡胚软骨细胞胞外基质胶原微原纤维和质膜P面膜内蛋白颗粒明显减少,线粒体内膜细胞色素c氧化酶活力和H~+-ATP酶活力及其对OIigomycin敏感性明显下降。在0.01ppmT-2毒素存在下,加入1ppm Na_2SeO_3到培养液中,则胶原微原纤维和质膜膜内蛋白颗粒的减少不再呈现,细胞色素c氧化酶活力和H~+-ATP酶活力及其对Oligomycin敏感性的下降幅度明显减小。这些结果表明硒能够显著的拮抗T-2毒素引起的软骨细胞超微结构和功能的改变。从亚细胞水平和分子水平为阐明缺硒是大骨节病发病的重要条件和硒在预防大骨节病中的作用机理提供了依据。     

不同解折叠状态鸡心脱血红素细胞色素c分子的表面性质

脱血红素细胞色素ｃ的构象与其跨膜转运能力是密切相关的。鸡心脱血红素细胞色素ｃ具有较强的自发折叠的能力,在一定条件下可以得到不同解折叠状态的鸡心脱血红素细胞色素ｃ。本文利用疏水层析、与疏水探针１,８—ＡＮＳ的结合以及色氨酸与结合的ＡＮＳ之间的荧光共振能量转移,比较了不同解折叠状态的鸡心脱血红素细胞色素ｃ分子的表面性质。结果表明,部分折叠的鸡心脱血红素细胞色素ｃ分子获得了一种高度动态的结构,形成了动态的疏水核心;同时,它也具有较强的凝集倾向。这些性质与鸡心脱血红素细胞色素ｃ分子较强的自发折叠能力是一致的,为进一步分析鸡心脱血红素细胞色素ｃ分子的构象及其在跨膜转运过程中与脂的相互作用奠定了基础。     

Ca2+循环的变化是心肌线粒体受损伤的敏感指标

在氧自由基的作用下,心肌线粒体Ca²⁺循环、膜脂的物理状态、氧化磷酸化效率(ADP/O)、呼吸控制率(RCR)值及跨膜电位差都发生了明显的变化.如果将体系中氧自由基的强度减弱到一定程度,心肌线粒体膜脂物理状态与能量转换功能的改变已不显著,但其Ca²⁺循环的变化仍很明显.此外,在解偶联或呼吸抑制条件下,心肌线粒体Ca²⁺转运功能仍未完全消失;此时,Ca²⁺循环的幅值约为对照的60％～70％,表明线粒体 Ca²⁺转运并非完全依赖于其呼吸链的功能,而可能与非H~+梯度所形成的膜电位差有关.氧自由基对这部分Ca²⁺转运仍有明显影响的结果提示,后者可能是线粒体结构与功能损伤更为敏感的指标.