酒类酒球菌mleP基因的克隆及其在酿酒酵母中的表达

苹果酸通透酶具有协助苹果酸 乳酸发酵 (MLF)的重要功能。以酒类酒球菌 (Oenococcusoeni)优良菌系Oenococcus Lee SD 2a的总DNA为模板 ,用PCR方法克隆到苹果酸通透酶基因mleP ,构建了重组质粒pBMmleP。序列分析表明克隆到的基因序列与已报道的序列同源性为 99%。为使目的基因在酿酒酵母中表达 ,以大肠杆菌 酿酒酵母穿梭质粒YEp35 2为载体 ,以PGK1强启动子和ADH1终止子为调控元件 ,构建了重组表达质粒YEpmleP ,并转化酿酒酵母 (Saccharomycescerevisiae)YS5 8。酵母转化子用含有亮氨酸、组氨酸和色氨酸的YNB平板筛选鉴定。获得的转化子在添加了L 苹果酸 (5g L)的培养基中培养 4d ;取培养液上清用HPLC检测 ,结果显示重组转化子YSP的培养液中L 苹果酸剩余含量均低于空载体转化子YS35 2 ,因此所得酵母重组转化子对苹果酸的转运能力有所提高     

用酵母生产麦角固醇发酵工艺的研究

研究了培养基中氮源、盐、温度、ｐＨ对酵母合成麦角固醇的影响。当选择复合氮源,蔗糖浓度为１０％～１２％,温度为３０℃,ｐＨ为５．５时,麦角固醇合成量相对于初始培养基提高了３倍。在２Ｌ发酵罐中探讨了蔗糖浓度、通气量对麦角固醇合成的影响,结果表明,高浓度蔗糖及大通气量对麦角固醇合成有一定抑制作用。通过流加蔗糖可显著地提高酵母麦角固醇合成量。     

α—乙酰乳酸脱羧酶的研究进展及其应用前景

在啤酒酿造中,双乙酸（diacetyl）是影响啤酒风味成熟、熟化期长短的主要因素,当其含量超过阈值（0．15x10ed）时,产生令人难以接受的馊饭味．双乙酸主要是啤酒酵母代谢的产物,由a一乙酸乳酸（a－nnetoactate）经非酶氧化脱按产生,酵母的双乙酸还原酶将其还原成乙偶姻（ec     

两种简便又较为准确检测SOD酶活性的方法

由于SOD的作用底物极不稳定,至今还未建立统一的检测SOD酶活性的方法,该文介绍了两种既简便又较为准确检测样品SOD酶活性的方法,采用这两种方法可较为准确地测定出不同样品的SOD含量及酶活性。     

麦角固醇发酵动力学的研究

研究了酵母发酵法生产麦角固醇的过程中,菌体生长、糖消耗、酒精生成与消耗以及麦角固醇合成的动力学。提出了两段动力学模型,模拟值与实验值吻合较好。     

酿酒酵母超氧物歧化酶(SOD)基因的克隆和表达

通过PCR扩增技术从酿酒酵母中得到了Cu,zn—SOD的结构基因,此基因被亚克隆到大肠杆菌质粒载体pT7—7．得到重组质粒pT7－7：SOD。利用EcoRI和Pstl酶切pT7-7::SOD质粒．经琼脂糖凝腔电泳,DEAE-滤膜回收Cu。zn—SOD结构基因片段,将其亚克隆到M13中．并转化大肠杆菌,得到了重组质粒M13-::t SOD,酶切和纯化后的SOD基因,定向克隆到酵母质粒载体pHz－8的smal和EcoRI位点上,构建成重组质粒pHZ－8－l。经转化酵母受体菌ZH-l和DP—l后得到了转化子．来自于ZH—l的转化子在非选择性条件下培养40世代后仍有95％以上细胞保留重组质粒。而来自于DP-1的转化子很不稳定。经蛋白提取、聚丙烯酰胺凝胶电泳和酶活性测定结果表明,来自于zH－1转化子中SOD的表达量约为细胞可溶性蛋白的15％．并具有生物活性。     

电场诱导营养缺陷型酵母原生质体的融合

本文以酿酒酵母营养缺陷型单倍体菌株; Jz-25,a,ura。和Jz-22,a,trp’ade一的原生质体为材料,采用改进的大尺寸电融合小池,以频率为1MHz,强度为450V／cm的正弦交变电场作电介质电泳,使原生质体沿电力线方向排列成串,建立起质膜间的紧密接触;接着以高强度4．5kv／cm、短时程40μs的Rc放电脉冲触发并列质膜的可逆电击穿,引起膜的通透性瞬时增大,从而导致原生质体的融合．为了进一步增大从电极间取出的融合体数目,而克服由于增高交变电场引起的使溶液过热的副作用,实验中还设计了以PEG聚集原生质体后,加高强度7．0kv／cm短时程45μs的可逆电击穿脉冲触发融合的程序。实验结果表明;上述两种电融合程序的融台频率都要比以相同材料所作的纯PEG对照实验的融合频率有所提高。通过对融合产物作交配型检验和测量细胞的尺寸,初步可以证明融合子在质融后已发生核配,产生出二倍体菌株。看来细胞电融台方法可成为一种实际应用的技术。     

光滑球拟酵母金属硫蛋白基因的亚克隆和表达研究

用BamHI和PstI双酶切质粒pMTIIa－91s,获得光滑球拟酵母金属硫蛋白基因（MTIIa）片段,将其亚克隆到M13载体,扩增并回收MTIIa基因片段,经Southern杂交验证插入片段正确后,分别将MTIIa基因片段插入到大肠杆菌表达载体pBV220和大肠杆菌一酵母菌穿梭载体YIp352中,转化大肠杆菌DH5a,使其对CUSO₄的抗性提高0．7mol／L左右;转化酿酒酵母受体菌YS59,使YS59对CUSO4的抗性提高1．5mol／L左右。结果证明光滑球拟酵母MTIIa基因在     

苹果渣发酵生产饲料蛋白的工艺条件

采用经试验所筛选出的菌种组合,通过试验,获得了苹果渣发酵的适宜工艺条件：接种比例为１∶５-１∶１０,接种量１５-３０％ ,料水比１０∶７-１０∶８,ｐ Ｈ 值为６-７,发酵时间 ３-４ｄ,静止发酵料层厚度不超过３０ｍ ｍ 。发酵产物测定结果显示,粗蛋白含量达到２９３０％ ,提高了４５７７％ ,蛋白质含量达到２７５６％ ,提高了８２８８％ ,粗纤维含量降低了２３２７％ 。测定结果还进一步显示,所选菌种具有明显的脱毒作用,棉酚含量降低９０６３％ 。大部分氨基酸含量较发酵原料显著增加,蛋白质营养价值明显提高。