苹果酸度相关基因MdPH1的克隆、表达及亚细胞定位分析

以苹果属（Malus）植物沧江海棠（M.ombrophila Hand.-Mazz）的果实为材料,对其发育过程中苹果酸的含量进行测定,并结合转录组测序的方法筛选控制果实酸度的候选基因。结果显示：MdPH1候选基因的编码区包含2829 bp,编码942个氨基酸;基因组序列全长为4269 bp,包含8个外显子和7个内含子。对10份苹果种质资源中PH1基因序列的分析结果表明,该基因序列中存在22个单核苷酸多态性（SNP）,其中13个位于内含子区,9个位于外显子区;位于最后一个外显子上SNP（G/A）的变异导致了编码氨基酸从缬氨酸变为异亮氨酸。MdPH1蛋白包含8个跨膜结构域,其中蛋白N端包含3个跨膜结构域,C端包含5个跨膜结构域。系统进化分析结果显示,苹果中的PH家族成员与梨（Pyrus communis L.）中的PH家族成员聚集成一簇。组织特异性表达结果发现,MdPH1基因在苹果果实中的表达量最高,其次是叶、花和根,茎中表达量最低。亚细胞定位分析表明MdPH1蛋白定位于液泡膜上。     

猕猴桃L-艾杜糖脱氢酶基因的克隆及转化

以猕猴桃果实为材料,利用电子克隆技术获得了L-艾杜糖脱氢酶(L-Idonate dehydrogenase,IDH)基因,然后将其转入番茄中,为了解猕猴桃IDH基因如何调控AsA的降解奠定基础。结果表明,获得的猕猴桃IDH基因cDNA全长为1 239bp,含有一个1 080bp的开放阅读框,编码359个氨基酸;成功构建了IDH基因植物表达载体pWR-IDH及工程农杆菌,以番茄叶片及茎段为受体,通过农杆菌介导法进行转化,获得了4株经PCR和RT-PCR检测呈阳性的转基因植株。     

枣庄市2008年麻疹减毒活疫苗强化免疫效果评价

为了评价枣庄市麻疹疫苗(MV)强化免疫的效果,于2008年在所辖区开展了流行病学调查、麻疹血清学监测和费用-效益分析等,对MV强化免疫进行了评价。枣庄市麻疹年平均报告发病率在强化免疫前为14.1/10万,对1-6岁儿童开展MV强化免疫后,2010年麻疹发病率为0.8/10万,降低了93.5%;1-6岁儿童麻疹发病构成,强化免疫前为39.87%,强化免疫后为25.90%,大大减少了5岁以下儿童的麻疹发病;强化免疫后,1-6岁儿童麻疹抗体阳性率为99.3%,抗体几何平均滴度(GMT)从强化免疫前的1∶563.0增长到强化免疫后的1∶814.9。开展MV强化免疫费用-效益比值为1∶2.23~1∶3.12。开展MV初始化强化免疫是加速麻疹控制最有效的措施之一。     

怀黄菊间接体胚受体再生体系的建立及CmTGA1的遗传转化

植物受体再生及遗传转化体系的建立是对植物进行转基因操作时至关重要的一个技术环节。以菊花优良种质怀黄菊(Chrysanthemum morifolium cv. ‘Huaihuang’)为试材, 探讨胚状体诱导所需的最佳培养基及芽分化和根生长的最适抗生素选择压。在此基础上, 将抗病基因CmTGA1通过同源转化的方法转入怀黄菊, 获得再生植株。结果表明, 在附加1.5 mg·L⁻¹IAA、0.5 mg·L⁻¹ 6-BA和1.0 mg·L⁻¹ 2,4-D的MS培养基上诱导培养15天后, 再去除2,4-D进行分生培养, 并进一步诱导芽再生, 最终86%的供试外植体通过胚状体途径获得再生芽; 在芽分化时所需潮霉素选择压为5.0 mg·L⁻¹, 生根时潮霉素选择压为4.5 mg·L⁻¹。对转化植株进行半定量PCR (semi-quantitative PCR)和实时荧光定量PCR (real-time quantitative PCR)检测, 结果表明, CmTGA1基因成功整合到转化植株基因组中, 从而建立了怀黄菊间接体细胞胚途径转基因受体再生体系。该技术的建立为通过转基因手段解决生产中存在的怀黄菊病害感染严重和种质退化等问题奠定了基础。     

苹果中磷酸蔗糖合酶家族基因的表达特性及其与蔗糖含量的关系

磷酸蔗糖合酶(sucrose phosphate synthase,SPS)是植物中蔗糖合成的主要限速酶,影响植物的生长发育和果实中蔗糖的含量。为探明苹果中SPS基因家族特性及其在蔗糖合成中的作用,该研究从苹果基因组中分离了MdSPS家族基因,分析了它们的进化关系以及mRNA表达特性与酶活性和蔗糖含量的关系。结果显示:(1)在苹果基因组中有8个SPS家族基因表达,它们分别属于双子叶植物的3个SPS亚家族。(2)荧光定量PCR分析显示,苹果C类的MdSPS6基因和A类的MdSPS1a/b基因是苹果中表达丰度最高的SPS基因成员,其中MdSPS6在苹果成熟果中表达丰度最高,其次是成熟叶片,而MdSPS1a/b在不积累蔗糖的幼果中表达丰度最高。(3)在果实发育过程中,除MdSPS1a/b之外,其它5个苹果MdSPS家族基因均随果实的生长表达丰度增加,与SPS活性和蔗糖含量明显呈正相关关系。研究表明,C类家族MdSPS6是苹果果实发育后期和叶片中蔗糖合成的主要SPS基因。     

大白菜的组织培养和植株再生

1　植物名称　白菜 (Ｂｒａｓｓｉｃａｐｅｋｉｎｅｎｓｉｓ)品种豫白菜 5号亲本 1 30 4。2　材料类别　下胚轴和子叶。3　培养条件　培养基 :( 1 )ＭＳ ;( 2 )ＭＳ ＢＡ 2ｍｇ·Ｌ- 1 (单位下同 ) ＮＡＡ 1 ;( 3)ＭＳ ＢＡ 2 ＮＡＡ 1 ＡｇＮＯ34;( 4 )ＭＳ ＮＡＡ 0 .2 ＰＰ3330 .1。以上培养基均加 0 .7%琼脂、3%蔗糖 ,ｐＨ 5 .8。培养温度 ( 2 5± 1 )℃ ,光照 1 2ｈ·ｄ- 1 ,光照度 20 0 0ｌｘ。4　生长与分化情况4.1　无菌苗的获得　大白菜种子经自来水清洗后用 70 %酒精浸 30ｓ,再用 0 .1 %ＨｇＣｌ2 消毒 6ｍｉｎ ,并用无菌…     

马铃薯Y病毒RPA-CRISPR/Cas12a检测技术体系的建立与应用

植物病毒病是制约农作物安全生产的重要因素, 病毒检测能够发现病毒并确定病毒的种类, 是病害监测预警和防控的关键。该研究以马铃薯Y病毒(PVY)为检测对象, 建立了基于RPA-CRISPR/Cas12a的检测体系。结果表明, (1) CRISPR/ Cas12a检测体系内Cas12a及各组分为检测顺利进行所必要; (2) crRNA的靶点位置对Cas12a蛋白活性有较大影响, 当crRNA的靶点包含部分PAM位点序列时, 反应效率最高; (3) RPA-CRISPR/Cas12a检测模板的最低限度为3×10² copies∙μL^-1, 灵敏度高于PCR及qPCR检测法; (4) RPA-CRISPR/Cas12a检测体系与核酸粗提及逆转录反应联合, 可在非实验室环境下进行PVY检测, 整个过程耗时约60分钟。该研究建立了基于RPA-CRISPR/Cas12a的PVY检测技术体系, 为在非实验室条件下实时快速检测植物病毒提供了一种有效方法。     

PP_(333)对怀地黄试管苗形态及生理特性的影响

研究PP333对怀地黄试管苗生长及一些生理指标的影响。通过单因子实验、比色法和愈创木酚法探讨PP333对试管苗的影响。结果表明,不同浓度PP333均促进试管苗芽的萌发,使根系粗壮,根数增加,低浓度PP333(0.01、0.05mg·L-1)促进试管苗茎的伸长生长,高浓度(0.1、2mg·L-1)抑制茎、叶生长,PP333浓度为2mg·L-1时壮苗效果最佳。PP333处理使试管苗生长中期叶片可溶性蛋白含量、POD活力提高。适宜浓度的PP333可以改变试管苗的生理特性,达到培育壮苗的目的。     

多效唑——一种优良的植物生长调节剂

多效唑──一种优良的植物生长调节剂李明军（河南师范大学生物系,河南新乡４５３００２）ＭＥＴ－ＡＮＥＦＦＥＣＴＩＶＥＰＬＡＮＴＧＲＯＷＴＨＲＥＧＵＬＡＴＯＲＬｉｎＭｉｎｇｇ－ｊｕｎ（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ．ｏｆＢｉｏｌｏｇｙ,ＨｅｎａｎＮｏｒｍａｌＵｎｉ...     

不同抗性苹果砧木叶片抗坏血酸代谢对干旱胁迫的响应

以抗旱性强的苹果砧木新疆野苹果[Malus sieversii (Ledeb.) Roem.]和抗旱性弱的平邑甜茶[M.hupehensis (Panlp.) Reld.]叶片为试材,在20%PEG-6000模拟干旱胁迫条件下,研究了抗坏血酸(AsA)含量、氧化还原状态、合成和代谢相关酶活性对干旱胁迫的响应。结果显示,在正常水分条件下,新疆野苹果和平邑甜茶叶片间AsA含量及代谢相关酶活性差异不显著。干旱胁迫过程中,二者之间叶片AsA、谷胱甘肽(GSH)、总谷胱甘肽和总抗坏血酸含量变化趋势基本一致,但新疆野苹果叶片中的含量增加幅度明显大于平邑甜茶;且与平邑甜茶相比,新疆野苹果叶片具有较高的L-半乳糖酸-1,4-内酯脱氢酶(GalLDH)、脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)和谷胱甘肽还原酶(GR)活性及AsA/DHA(脱氢抗坏酸)和GSH/GSSG(氧化型谷胱甘肽)比率。研究表明,干旱胁迫下,新疆野苹果能够维持较高的AsA合成和再生能力,并具有维持高AsA水平特性,这可能与其具有较强的抗旱性相关。