| 马铃薯Y病毒RPA-CRISPR/Cas12a检测技术体系的建立与应用 |
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| 引用本文： | 何雨龙,王佳歌,赵珊珊,高锦,常英英,赵喜亭,聂碧华,杨清香,张江利,李明军.马铃薯Y病毒RPA-CRISPR/Cas12a检测技术体系的建立与应用[J].植物学报,2022,57(3):308-319. |
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| 作者姓名： | 何雨龙 王佳歌 赵珊珊 高锦 常英英 赵喜亭 聂碧华 杨清香 张江利 李明军 |
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| 作者单位： | 1河南师范大学生命科学学院, 新乡 4530072河南省道地药材保育及利用工程技术中心/绿色药材生物技术河南省工程实验室, 新乡 4530073河南省农业微生物生态与技术国际联合实验室, 新乡 4530074华中农业大学, 农业农村部马铃薯生物学与生物技术重点实验室, 武汉 430070 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(81274019);财政部和农业农村部国家现代农业产业技术体系项目(CARS-21);中原英才计划-科技创新领军人才(224200510011);河南省创新型科技人才队伍建设工程(C20130037);河南省自然科学基金(202300410229);河南省高等学校重点科研项目应用研究计划(21A180012);河南师范大学与温县人民政府共建全国山药种质资源圃项目(5201049160163) |
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| 摘 要： | 植物病毒病是制约农作物安全生产的重要因素, 病毒检测能够发现病毒并确定病毒的种类, 是病害监测预警和防控的关键。该研究以马铃薯Y病毒(PVY)为检测对象, 建立了基于RPA-CRISPR/Cas12a的检测体系。结果表明, (1) CRISPR/ Cas12a检测体系内Cas12a及各组分为检测顺利进行所必要; (2) crRNA的靶点位置对Cas12a蛋白活性有较大影响, 当crRNA的靶点包含部分PAM位点序列时, 反应效率最高; (3) RPA-CRISPR/Cas12a检测模板的最低限度为3×102 copies?μL-1, 灵敏度高于PCR及qPCR检测法; (4) RPA-CRISPR/Cas12a检测体系与核酸粗提及逆转录反应联合, 可在非实验室环境下进行PVY检测, 整个过程耗时约60分钟。该研究建立了基于RPA-CRISPR/Cas12a的PVY检测技术体系, 为在非实验室条件下实时快速检测植物病毒提供了一种有效方法。
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| 关 键 词： | CRISPR/Cas12a 马铃薯Y病毒 快速检测 重组酶聚合酶等温扩增 |
| 收稿时间： | 2021-12-23 |
Establishment and Application of RPA-CRISPR/Cas12a Detection System for Potato Virus Y |
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| Yulong He,Jiage Wang,Shanshan Zhao,Jin Gao,Yingying Chang,Xiting Zhao,Bihua Nie,Qingxiang Yang,Jiangli Zhang,Mingjun Li.Establishment and Application of RPA-CRISPR/Cas12a Detection System for Potato Virus Y[J].Bulletin of Botany,2022,57(3):308-319. |
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| Authors: | Yulong He Jiage Wang Shanshan Zhao Jin Gao Yingying Chang Xiting Zhao Bihua Nie Qingxiang Yang Jiangli Zhang Mingjun Li |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | CRISPR/Cas12a potato virus Y rapid detection recombinase polymerase isothermal amplification |
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