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PCR扩增拟南芥(Arabidopsis thaliana)DBB1a cDNA的保守区段(GenBank登录号:AT2G21320),转化到冷诱导表达载体pCold TF上,构建pCold-DBB1a重组质粒,转化大肠杆菌DH5a.15℃下IPTG诱导表达融合蛋白,并通过SDS-PAGE检测.证实目的蛋白以可溶形式在约20 kD处高效表达,与预期蛋白大小相吻合.表达蛋白经Ni琼脂糖凝胶亲和层析纯化,SDS-PAGE及Western blotting检测证实纯化后获得高纯度融合蛋白,这为进一步研究DBB1a功能奠定了基础. 相似文献
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灰色链霉菌RX-17溶菌酶R2的纯化及其酶学鉴定 总被引:3,自引:0,他引:3
从灰色链霉菌 (Streptomycesgriseus)RX 1 7的发酵液中 ,通过硫酸铵分级沉淀 ,CM SephadexC 5 0和CM SepharoseFastFlow离子交换层析 ,纯化得到了溶菌酶R2 .该酶分子量约为 2 4 8kD ,等电点约为 9 7,N端 1 5个氨基酸的顺序为DTSGVQGIDVSHWQG .R2酶溶解变链球菌Ingbritt(StreptococcusmutansIngbritt)的最适作用温度为 5 5℃ ,最适pH为 7 0 .5 0℃处理 1h ,R2酶残存酶活74 % ,碱性条件 (pH >9)下该酶保持稳定 .Zn2 + 、Cu2 + 、Fe2 + 、Cd2 + 、Pb2 + 可使酶完全失活 ,螯合剂、盐酸羟胺、溴替丁二酰亚胺及离子型去垢剂SDS抑制R2酶的溶菌作用 ,而非离子型去垢剂TritonX 1 0 0等则能促进溶菌 .R2酶溶菌谱广泛 ,能够溶解多种鸡卵清溶菌酶不能作用的革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌 .从对金黄色葡萄球菌 (Staphylococcusaureus)的高活性来看 ,该酶应分类为 β 1 ,4 N ,6 O 二乙酰胞壁质酶 (β 1 ,4 N ,6 O diacetylmuramidase) . 相似文献
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通过iTRAQ(同位素相对标记与绝对定量)定量蛋白质组学技术分析陆地棉矮化突变体陆矮1号(LA-1)及其近等基因系LH-1茎尖的差异表达蛋白,发现苯丙氨酸合成途径的关键调控元件色氨酸生物合成酶trpD在LA-1中表达下调,苯丙氨酸代谢途径关键酶4-香豆基辅酶A连接酶(4CL)、咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶(CCo AOMT)、转肉桂酸单氧酶亚家族基因(CYP73A)在LA-1中表达上调。通过实时定量PCR检测发现trpD、4CL、CCo AOMT、CYP73A基因转录水平与蛋白表达的趋势一致。对两种材料不同节间(倒1至倒6)的石蜡切片进行观察发现,从倒1节间到倒6节间,LA-1维管层与皮层宽度的比值均极显著大于LH-1,在相同节间,LA-1的导管的数目明显多于LH-1,维管层的发育要早于LH-1。这些研究结果揭示了陆地棉矮化突变体LA-1的矮化与苯丙氨酸合成和代谢途径存在相关性,为进一步发掘调控陆地棉矮化的关键基因和深入了解相关分子机制提供理论依据。 相似文献
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研究了神经节苷脂GM_3参入肌质网膜后Ca~(2+)-ATP酶活力的变化,结果表明:GM_3参入肌质网膜后,对肌质网Ca~(2+)ATP酶活性(ATP水解活力与转运活力)有明显的激活作用.当参入的GM_3浓度为8μmol/L、参入时间为120min、温度为30℃时,对Ca~(2+)-ATP酶的激活作用最大. 相似文献
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狭叶锦鸡儿花柱的超微结构观察王迎春,屠骊珠(内蒙古大学生物系,呼和浩特010021)本文对狭叶锦鸡儿开花前一天和开花当天的花柱进行超微结构观察,结论如下:1.花柱道中含有丰富的营养物,开花前一天较开花当天多。2.花柱道中的物质有的是通过通道细胞分泌产... 相似文献
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99.
100.
刺壳椒化学成分研究 总被引:5,自引:0,他引:5
刺壳椒又名三百棒 ,系芸香科花椒属植物。其根、茎、果实均可供药用〔1,2〕。刺壳椒化学成分的研究尚未见报道。我们曾对数种原产于中国的花椒属植物进行过化学成分的研究 〔3~ 12〕,并讨论了花椒属中Zanthoxylum和 Fagara2个亚属合并为广义的 Zanthoxylum的合理性〔13〕。为了寻找新的生物活性成分 ,并给花椒属的化学系统学提供一定依据 ,我们初步研究了刺壳椒的化学成分 ,从其茎的乙醇提取物中分得 9个化合物 ,其中 6个分别鉴定为白藓碱 ( ) ,γ-花椒碱 ( ) ,6,7,8-三甲氧基香豆素 ( ) ,β-谷甾醇 ( ) ,胡箩卜甙 ( )和一长链混合脂肪酸… 相似文献