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【目的】克隆斜卧青霉L-06的内切葡聚糖酶Ⅰ基因(egI),并实现其在大肠杆菌内的高效表达。【方法】利用RT-PCR技术克隆了斜卧青霉L-06的内切葡聚糖酶Ⅰ基因(egI),并将egI基因克隆到原核表达载体中,构建了重组质粒pET32a-egI。【结果】转化至大肠埃希菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导重组蛋白表达,SDS-PAGE检测结果表明:重组表达产物的相对分子质量约为80 kD,与预期相符。重组表达的菌悬液,经破碎离心,取其上清液,进行纤维素酶活性染色,获得了活性条带。DNS法测得内切酶活力为2.56 IU/mL。【结论】构建了斜卧青霉L-06内切葡聚糖酶Ⅰ的原核表达系统。 相似文献
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PCR扩增拟南芥(Arabidopsis thaliana)DBB1a cDNA的保守区段(GenBank登录号:AT2G21320),转化到冷诱导表达载体pCold TF上,构建pCold-DBB1a重组质粒,转化大肠杆菌DH5a.15℃下IPTG诱导表达融合蛋白,并通过SDS-PAGE检测.证实目的蛋白以可溶形式在约20 kD处高效表达,与预期蛋白大小相吻合.表达蛋白经Ni琼脂糖凝胶亲和层析纯化,SDS-PAGE及Western blotting检测证实纯化后获得高纯度融合蛋白,这为进一步研究DBB1a功能奠定了基础. 相似文献
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葛根素提取及其抑菌实验研究 总被引:1,自引:0,他引:1
以湘西葛根为实验材料,选取水、甲醇和95%的乙醇作为提取溶剂,索氏提取法提取其葛根素。以提取率为指标,综合提取工艺中加入量、提取时间的影响,采用正交实验筛选出乙醇提取工艺,最佳参数为每次加入10倍量、回流提取时间3.5h。用滤纸片法研究葛根提取液对大肠杆菌等8种常见食品腐败菌的抑菌活性,结果表明,各种菌体的抑菌效果为:大肠杆菌〉金黄色葡萄球菌〉枯草芽孢杆菌〉假丝酵母青霉,对青霉无抑菌作用。各种菌的抑菌效果与浓度的关系为,葛根素浓度升高,抑菌效果增强。 相似文献
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