液质联用在多肽及蛋白质定性方面的研究进展

随着液质联用技术的不断发展,液相色谱—质谱联用系统广泛应用于药物分析、食品分析、环境分析等多方面,该技术将液相色谱的高分离能力与质谱强大的结构鉴定功能相结合,具备了高分离度、高灵敏度、高选择性以及提供丰富结构信息等一系列优点。这些优点决定了液相色谱—质谱联用系统将在越来越多地相关领域得到应用,尤其是近年来在生物大分子方面开展了大量研究,结合这些研究对液质联用技术在多肽及蛋白质定性方面进行了系统归纳。     

灵孢多糖辅助治疗抑郁症的作用及机制

目的:建立大鼠抑郁模型,研究和探讨灵孢多糖注射液辅助治疗抑郁症的作用及机制。方法:将48只SD大鼠随机分为正常组、抑郁组、生理盐水组及灵孢多糖(低剂量、中剂量、高剂量)治疗组各8只。应用慢性应激刺激的方法诱导抑郁组、生理盐水组、灵孢多糖治疗组大鼠抑郁,通过行为学指标评估建模是否成功。建模成功后,在生理盐水组中注射生理盐水;在灵孢多糖治疗组中分别注射低、中、高剂量灵孢多糖注射液,比较各组间的疗效差异。采用免疫组化的方法测定大鼠脑内多巴胺、去甲肾上腺素、5-羟色胺、酪氨酸羟化酶等单胺类神经递质含量的表达情况。结果:成功的建立了大鼠抑郁模型,抑郁组中大鼠各项行为学指标与正常组相比均明显减少,差异有统计学意义(P0.05);灵孢多糖治疗组大鼠脑内的多巴胺、去甲肾上腺素、5-羟色胺、酪氨酸羟化酶与抑郁组、生理盐水组大鼠脑内的含量均明显升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论:灵孢多糖注射液对改善抑郁症状有良好的疗效,具有辅助治疗抑郁症的作用。     

Peptide 68-88 of apocytochrome c plays a crucial role in its insertion into membrane and binding to mitochondria

Apocytochrome c (Apocyt. C) is the precursor of cytochrome c. It is synthesized in the cytosol and posttranslationally imported into mitochondria. In order to determine the crucial sequence in apocyt. Ctranslocation, deleted mutant and chemically synthesized peptides with different length were used. Obtained results showed that sequence 68-88 of apocyt. C plays a critical role in its insertion into membrane and binding to mitochondria.     

用渗透剂胁迫鉴定谷子芽期耐旱性的方法研究

采用PEG-6000、甘露醇2种渗透剂7种渗透势模拟水分胁迫,以谷子芽期发芽率、芽长、根长的相对值作为鉴定评价指标,研究谷子芽期耐旱性鉴定的水分胁迫条件.结果表明在胁迫强度较弱时,40%谷子品种萌发、80%谷子品种胚芽、胚根的生长表现促进作用;在胁迫强度较强时,表现出抑制作用.在PEG-6000、甘露醇胁迫下,萌发耐旱指数与种子千粒重呈负相关,与相对发芽势主要表现为中度正相关,与相对根/芽比主要表现为负相关(PEG-6000胁迫),与相对芽长、相对根长相关系数很小;相对芽长与相对根长的相关关系主要表现为中度正相关.种子萌发耐旱指数与相对根长两个指标宜作为谷子芽期耐旱性鉴定指标,-0.75MPa PEG-6000、-1.00MPa甘露醇处理可以作为谷子芽期耐旱性鉴定的水分胁迫条件.     

磷脂酸(PA)-磷脂酰乙醇胺(PE)相互作用有利于脱血红素细胞色素c跨脂质体的运送

细胞色素c的前体 -脱血红素细胞色素c(Apocyt.c)在细胞质中核糖体合成 ,之后跨线粒体膜运送 ,在线粒体内、外膜间隙中经酶催化与血红素Heme结合形成成熟型的细胞色素c定位于线粒体内膜外侧     

镁、钙离子对组装于人工膜上CF_0-CF_1质子传导的影响

在电压籍位下,研究Mg2 、Ca2 对重组于平板脂双层上CF0－CF1质子传导的影响,表明：（1）跨膜质子梯度为0时（△pH=0）,在30～150mV范围内,Ca2 引起的正电流比在无金属离子溶液中有一定幅度的增加。在50mV以上,Mg2 比Ca2 有更大的促进正向电流的作用;（2）当△pH=3时,Mg2 比Ca2 更有显著增加正向膜电流的作用,电压在0mV时就已显示出来;（3）Ca2 不影响Mg2 促进正向电流的作用;（4）当△pH=3时,Ca2 ”溶液中DTT促进正向电流的作用要在30mV以上才能显示,并随电位的增加而增大。而Mg2 溶液中,△pH=3,电压为0mV时DTT促进正向电流的作用就能显示出来,且在0至150mV范围内促进的幅度是恒定的。这就说明Mg2 不仅具有调节CF0－CF1质子传导的作用,而且也有助于膜结合CF0-CF1的变构,引起埋于CF0-CF1内部的γ亚单位二硫键暴露出来,促使二硫键为DTT还原,从而增加质子传导量。当CA2 、Mg2 存时,Ca2 不影响Mg2 的作用效应,它仅因其静电屏蔽效应稳定H ．-ATP酶的构象,从而促进对质子的传导。     

龙葵叶绿体ATP合酶α-亚单位基因的克隆

本研究以菠菜叶绿体DNA 2.45kb的SalI片段(含有ATP合酶α-亚单位基因)为探针,从龙英叶绿体DNA BamHI片段文库中筛选出含龙葵叶绿体atpA基因的克隆。通过Southrcn吸印与探针杂交,证明了重组质粒pSB 132的插入片段含有atpA基因。同时将atpA基因定位在龙葵叶绿体DNA SalI、BglI、XhoI和BamHI 4种酶切图谱的限制性片段上。     

简便快速纯化人血清α1-酸性糖蛋白的方法

本文采用(NH₄)₂SO₄和CCl₃COOH沉淀,及Cibacron blue F3G-A-SephadexG-100凝胶柱层析,经二步提纯了人血清α₁-酸性糖蛋白。PAGE鉴定,在阳极端仅显示一条蛋白带。Schiff氏试剂染色阳性,证实为糖蛋白。SDS-PAGE测得其分子量为45000。免疫电泳结果表明,纯化的α₁-酸性糖蛋白与兔抗人全血清及免抗人α₁-酸性糖蛋白均呈现单一沉淀弧。氨基酸组成测定亦与文献报告的结果基本一致。本方法简便、省时。     

早发生胚水稻小孢子发生及花粉的萌发生长

实验结果表明,早发生胚水稻（PDER）品系小孢子的发生发育与常规水稻品种相同,常规I-KI镜检显示其成熟花粉育性达87．4％．开花后,少量花粉在柱头上能正常萌发,并以短管形式进入柱头．大部分花粉在柱头上发生了异常行为：不萌发花粉管,但排放出大量内容物;花粉管细小或畸形;在枝头内或柱头外花粉管前端破裂;花粉管在柱头上绕行不进入柱头;花粉管在柱头内逆行生长;花粉管进入柱头后又穿出柱头;花粉管壁上粘有颗粒或被有一层膜等．文中就PDER的来源讨论了这些现象,并提出“萌败”这一新概念．     

脱血红素细胞色素c与膜结合及插膜时的构象研究

应用特殊的单分子层样品制备技术,分别制备了与中性、酸性磷脂膜结合的和完全插膜的鸡心脱血红素细胞色素c样品,并运用圆二色谱(CD)、表面衰减全反射Fourier变换红外光谱(ATR-FTIR)对膜上蛋白的构象进行了鉴定.研究结果表明,蛋白在与膜结合及插入阶段的构象是不同的,膜界面性质的不同也会对蛋白的构象产生不同的诱导,在酸性磷脂DSPG膜表面,该蛋白是以α螺旋和β折叠混合的构象形式结合;而在中性磷脂DSPC膜表面是以β折叠为主的构象形式结合.插入 DOPG单分子层内时则是 α螺旋为主的构象形式.