龙须菜免疫活性多糖的分离纯化及结构鉴定

利用小鼠淋巴细胞增殖模型,筛选龙须菜中具有免疫活性的多糖,并对其结构进行鉴定。活性筛选与分离纯化相结合,经室温提取,DEAE-Sepharose F.F.离子柱和凝胶Sephacryl S500层析,分离纯化得到具有刺激小鼠脾淋巴细胞增殖活性的龙须菜多糖GCpF2-3B。免疫实验表明,GCpF2-3B在较低浓度10μg/mL就表现出刺激作用(增殖率135%),当浓度为50μg/mL时增殖率达到最高(195%)。高效渗透色谱HPSEC层析纯度鉴定和紫外扫描表明GCpF2-3B为均一多糖,分子量约为1.03×105Da。红外光谱扫描显示,GCpF2-3B为典型的含硫酸基团多糖,具有糖类特征峰和总硫酸基吸收峰;13C NMR谱显示GCpF2-3B主要由交替相连的(1→3)-β-D-半乳糖和(1→4)-α-L-3,6-内醚半乳糖重复二糖组成。     

具有降血压功能的益生菌的筛选

体外ACE抑制活性实验表明,实验室保存的40株乳酸菌菌株中有27株具抑制ACE的活性,其中尤以L·salivariusLa5、L·salivariusLma1、L·plantarumLP529、L·plantarumLS12、L·plantarumLS31、L·helveticusZL51最为明显。按照益生菌标准对上述6株菌的耐酸、耐胆盐、抗药性、抑菌等性能进行评价,结果表明,L·plantarumLP529、L·plantarumLS12、L·plantarumLS31、L·helveticusZL51可作为益生菌用于降血压产品。     

帘蛤科贝类rDNA内转录间隔区序列的研究

根据18SrDNA、5．8SrDNA和28SrDNA保守序列设计引物,应用聚合酶链式反应（PCR）扩增了文蛤（Meretrix meretrix L．）、青蛤（Cyclina sinensis G）、硬壳蛤（Mercenaria mercenaria L．）和江户布目蛤（Protothaca jedoensis L．）4种帘蛤科贝类的第一内转录间隔区（ITS1）和第二内转录间隔区（ITS2）序列,并进行了测序。结果表明,文蛤、青蛤、硬壳蛤和江户布目蛤的ITS1扩增产物大小分别为978bp、663bp、757bp和942bp,GC含量分别为61．55％、60．78％、62．48％和64．86％～64．97％,其中ITS1序列长度分别为900bp、585bp、679bp和864bp,是迄今已报道双壳贝类中变化范围最大的,GC含量分别为61．67％、61．03％、63．03％和65．51％～65．62％,江户布目蛤种内ITS1序列有个体差异;ITS2扩增产物大小分别为644bp、618～620bp、593bp和513～514bp,GC含量分别为61．18％、61．29％～61．81％、62．73％和61．48％61．60％,其中ITS2序列长度分别为412bp、386～388bp、361bp和281～282bp,GC含量分别为65．29％、65．21％～66．06％、67．87％和67．38％～67．62％,青蛤和江户布目蛤种内ITS2序列有个体差异。4种蛤ITS1和ITS2序列种间差异很大,有明显的长度多态性,ITS2种间序列相似度73．0％～89．1％,与ITS1的种间序列相似度48．7％～81．5％相比略高。此外,在4种蛤ITS1和ITS2序列中各发现2个与rRNA加工有关的保守区。通过对ITS1和ITS2序列的组装获得了4种蛤5．8SrRNA基因完整序列,序列长度都是157bp,GC含量57．96％～58．60％,4种蛤5．8SrRNA基因相对保守,种间序列差异度0-6．0％,共有10个变异位点,其中转换4处,颠换6处,硬壳蛤和江户布目蛤5．8SrRNA基因序列完全相同。以ITS2序列（包含5．8SrRNA和28SrRNA基因部分序列）为标记,调用北极蛤科的Arctica islandica相应序列数据作外群,构建了帘蛤科贝类的系统发育树,其拓扑结构显示江户布目蛤与硬壳蛤亲缘关系最近,青蛤与其他3物种的亲缘关系最远。     

龙须菜多糖脱硫酸化及免疫活性研究

考察了Miller等和Nagasawa等报道的脱硫酸方法对龙须菜多糖硫酸基脱除效果,并比较了脱硫酸前后多糖的免疫活性变化。实验结果显示,采用Miller等报道的方法时,以草酸作为催化剂对硫酸基脱除效果最好,脱除率达到71.4%,远好于其他种类酸催化,但多糖回收率却只有36.4%;采用Nagasawa等报道的方法时,向二甲基亚砜溶液中加入10%甲醇比加入2%吡啶或2%吡啶+2%三甲基氯硅烷具有更好的脱硫酸基效果,硫酸基脱除率达到72.9%,回收率48.9%,是本次实验中效果最好的。免疫活性实验表明,当降低龙须菜多糖硫酸基含量时,免疫活性相应降低。     

毛头鬼伞子实体中甾类化合物的结构鉴定及其抑制肿瘤细胞增殖活性的研究

从毛头鬼伞子实体中分离得到4个甾类化合物,通过波谱分析,分别鉴定为麦角甾醇(1)、啤酒甾醇(2)、麦角甾醇葡萄糖甙(3)和tuberoside(4)。4个化合物均为首次从毛头鬼伞中得到。通过体外细胞毒性筛选试验,结果表明化合物4有较强的抑制人乳腺癌细胞MCF-7和狗肾细胞MDCK增殖的活性,其抑制增殖的IC50值分别为10.9μg/mL(18.4μmol/L)和5.8μg/mL(9.8μmol/L)。化合物3对MCF-7和MDCK的抑制作用则较弱,当其浓度为10.0μg/mL(17.9μmol/L)时,对MCF-7和MDCK的增殖抑制率分别为12.5%和7.5%。     

紫芝细胞壁大分子量葡聚糖的纯化及结构鉴定

采用超微粉碎、热水浸提法从紫芝子实体水提残渣中获得细胞壁粗多糖,通过30%乙醇沉淀、20%醇洗的方法纯化出大分子量均一多糖GSCW30E-20E。苯酚硫酸法检测其多糖含量为98.03%,单糖组成分析显示其仅由葡萄糖组成,高效凝胶尺寸排阻色谱-多角度激光散射仪-示差折光检测技术测定其重均分子量为1.552×10 ⁶g/mol。通过红外光谱、甲基化及核磁共振分析对其结构进行解析,结果表明,GSCW30E-20E是一种β-D-葡聚糖,该多糖主链由β-(1,3)-糖苷键连接而成,每3个糖残基主链上通过β-(1,6)-糖苷键连有一个葡萄糖残基为支链。     

大孔树脂分离纯化虫草素及其抗纤维化作用

利用大孔树脂分离富集北冬虫夏草发酵液中的虫草素。通过筛选可知NKA-Ⅱ型大孔树脂对虫草素的吸附与解吸效果最好。发酵液经树脂吸附6 h后,再以4倍树脂体积的50%乙醇解吸3 h,所得样品虫草素含量达31.5%,经反复结晶后得到纯度>98%的虫草素。结果表明:虫草素可明显抑制TGF-β1引起的人胚肺成纤维细胞α-SMA蛋白表达量的增加,并表现出一定的浓度依赖性,提示虫草素可能具有抑制肺纤维化活性。     

TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测甲型肝炎减毒活疫苗病毒含量的研究

目的：建立一种快速定量检测甲型肝炎减毒活疫苗病毒含量的实时荧光定量RT-PCR方法。方法对Gen-Bank中登陆的甲型肝炎减毒活疫苗株（ L-A-1）和其他甲型肝炎病毒基因组全序列比较分析,根据其高度保守的5′端非编码区设计针对甲型肝炎减毒活疫苗株特异性引物与探针,对荧光定量RT-PCR反应条件进行优化,检测该方法的特异性和灵敏性,并对甲型肝炎减毒活疫苗病毒含量进行定量检测。结果该方法对甲型肝炎减毒活疫苗株高度特异,扩增片段为207 bp,不与其他肠道病毒发生非特异性反应。在104 CCID50/管～10-1 CCID50/管之间有良好的扩增曲线,检测的灵敏度可达0．1CCID50～0．01CCID50,比普通RT-PCR高100倍。结论该方法具有快速、灵敏、特异、重复性好等优点,可应用于甲型肝炎减毒活疫苗生产过程中病毒含量滴度测定及指导疫苗成品的配制。     

PBL新设计在组织胚胎学教学中的应用

鉴于现行普通PBL教学法难以在各高校全面推广,探索改进PBL教学法应用于组织胚胎学教学,对照组为传统教学法。就增强学习兴趣,提高学习主动性,提高自学能力,提高解决问题的能力这4个方面而言,改进PBL教学法极显著优于传统教学法(P<0.01)。改进PBL教学法比较适合在课时多、班级学生数多等无法推广现行PBL教学法的高等中医药院校进行。     

北虫草体外抗氧化和PC12氧化损伤修复作用的有效部位的筛选

采用系统溶剂法对北虫草子实体进行依次提取,制备得氯仿相、乙酸乙酯相和乙醇相三部位,利用化学发光法和H2O2诱导PC12氧化损伤修复模型,对三部位进行体外抗氧化活性和PC12氧化损伤修复作用测定。结果表明,乙酸乙酯相具有较强的抗氧化活性,是清除H2O2自由基和超氧自由基活性最强的部位,IC50值分别为88.5μg/mL和190μg/mL;乙酸乙酯相对由H2O2诱导的PC12细胞氧化损伤的修复作用较强,且呈现明显的浓度依赖性。无论从抗氧化活性,还是从对H2O2氧化损伤的修复作用,乙酸乙酯相均表现出了较强的作用,乙酸乙酯相是抗氧化活性和保护PC12细胞氧化损伤的主要有效部位。