基于PCR技术的DNA分析测试关键要素

大多数国家对转基因生物研究与产业化日趋积极,把发展生物技术作为支撑发展、引领未来的战略选择,力求抢占新一轮经济和科技革命的先机与制高点。随之而来的是公众对转基因产品安全性的关注。转基因生物成分分析作为安全性评价的重要内容,发挥着举足轻重的作用,而基于PCR技术的转基因产品核酸成分分析是最经典、最广泛使用的方法。虽然此方法已普遍应用,但国内外鲜有较为全面的阐述此类分析测试要素的报道。为此,本综述对国内外相关方法的文献资料进行了梳理、比对和研究,结合已有的分析测试实验室的经验,提出了PCR测试体系的关键要素主要是标准和指南、方法的确认、标准物质及能力验证等四个方面,且在文中简明扼要的论述了各个部分的要点,供转基因核酸成分分析及相关领域工作者参考。     

铁代谢水平及淋巴细胞水平变化对口腔溃疡患者病情发生发展的影响

为了探讨口腔溃疡患者铁代谢水平及淋巴细胞水平变化对病情发生发展的影响,本研究选择2016年3月至2017年3月期间在我院口腔科确诊的复发性口腔溃疡患者200例作为研究对象(观察组),选择同期体检的100名健康志愿者作为对照组。通过采用比色法检测受试者的血清铁水平,采用电化学发光法检测受试者铁蛋白水平,使用流式细胞仪检测受试者的T淋巴细胞亚群(CD3~+, CD4~+和CD8~+)水平,采用多因素Logistic回归分析复发性口腔溃疡的危险因素。本研究发现观察组的血清铁和铁蛋白水平均显著低于对照组(p0.05),观察组的CD3~+、CD4~+和CD8~+水平均显著低于对照组,观察组的CD4~+/CD8~+比值显著低于对照组(p0.05),铁蛋白、血清铁、CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+为复发性口腔溃疡的独立危险因素(p0.05),其中铁蛋白和血清铁的OR值高于其他参数,其次为CD4~+。研究获得初步结论认为,复发性口腔溃疡患者的铁蛋白、血清铁、T淋巴细胞亚群(CD3~+, CD4~+, CD8~+)和CD4~+/CD8~+比值显著低于健康体检者,且上述指标均是复发性口腔溃疡的独立危险因素。     

视网膜母细胞瘤结合蛋白6真核表达载体的构建及其对NF-κB信号通路的影响简

目的：研究视网膜母细胞瘤结合蛋白6（RbBP6）对TNF-α激活的NF-KB转录活性的影响。方法：构建RbBP6的真核表达载体并在293T细胞中过表达,或利用RNA干扰技术敲低RbBP6的表达,采用NF-KB双萤光素酶报告系统检测RbBP6对TNF-α激活的NF-KB转录活性的影响。结果：过表达RbBP6对NF-KB转录活性无明显影响,而瞬时干扰RbBP6能够明显抑制NF-KB的转录活性。结论：实验结果提示RbBP6在NF-KB信号通路中可能发挥重要调控作用。     

鄂尔多斯婴儿粪便中动物双歧杆菌的分离鉴定与特性研究

目的从鄂尔多斯婴儿粪便中分离出动物双歧杆菌,并对其进行抗氧化性的研究。方法结合细菌形态学和16SrDNA序列同源性分析进行鉴定,并对其还原性和·OH自南基清除能力进行了抗氧化研究。结果该分离出的菌株为动物双歧杆菌,其还原能力与·OH自由基清除能力随着浓度的增加而增大。结论动物双歧杆菌具有抗氧化性且与菌液的浓度呈现效量关系。     

小鼠经颈外静脉右心导管法测定心室压力的实验方法研究

目的：研究可行性高的测定小鼠右心室压力的实验方法。方法：通过自制PE导管,连接powerlab多通道生物信号记录系统,经颈外静脉插管,右心导管法测定小鼠右心室压力,并借以研究肺动脉压力变化。结果：用此方法对51只小鼠进行插管,46例成功进入心室并测压,成功率90．2％。其中33只正常小鼠中,成功30例,测得压力值：收缩压（23．4±5．7）mmHg,舒张压（3．7±2．6）mmHg,平均压（12．0±3．7）mmHg;18只肺动脉高压模型小鼠中,成功16例,测得压力值：收缩压：（32．2±2．8）mmng,舒张压（3．8±2．0）mmng,平均压（14．94±2．3）mmHg。共失败5例,经解剖发现2例进入下腔静脉,2例穿破心耳,1例穿破腋静脉进入胸壁。结论：使用自制的PE导管经颈外静脉插管,右心导管法测定右心室压具有成功率高、数据更准确、操作省时、方法易普及的优点。是一种较好的对小鼠进行右心室压力测定的方法。     

辛伐他汀对IFN-y诱导的人外周血单个核细胞OX40L表达的影响

目的：探讨经IFN-y刺激后,人外周血单个核细胞OX40L表达的变化,以及辛伐他汀对单个核细胞OX40L表达的影响。方法：将实验标本随机分为2组,分别干扰素-y（IFN-y）刺激组、辛伐他汀干预组。应用RT—PCR及Western blotting技术,观察IFN-y诱导的人外周血单个核细胞OX40L表达情况及辛伐他汀对人单个核细胞OX40L表达的影响。结果：1．1000U／ml IFN-与人单个核细胞共同培养24h后,OX40LmRNA和蛋白水平的表达明显增加。2．预先给予10mol／L的辛伐他汀干预1h可以明显降低IFN-诱导的OX40L表达。结论：IFN-可诱导人单个核细胞OX40L表达。辛伐他汀可以抑制IFN-诱导人单个核细胞OX40L表达的增强,从而可能抑制了OX40L信号通路介导的与炎症有关的血管损伤,延缓动脉粥样硬化的进程。     

超声乳化白内障吸出联合房角分离术治疗原发性闭角型青光眼并发白内障的疗效观察

目的:观察超声乳化白内障吸出联合房角分离术治疗原发性闭角型青光眼(PACG)并发白内障的临床疗效和安全性.方法:将60例(63眼)PACG并发白内障患者随机分为观察组和对照组,观察组采用超声乳化白内障吸出、后房人工晶体植入联合房角分离术治疗,对照组采用超声乳化白内障吸出、后房人工晶状体植入联合小梁切除术治疗,治疗后观察和比较两组患者治疗前后眼压、视力、房角粘连度的变化及并发症的发生情况等.结果:观察组和对照组术后3天、7天和术后1、3、6月时眼压均较术前显著下降,差异有统计学意义(P＜0.01),且术后观察组眼压显著低于同期对照组患者,差异均有统计学意义(P＜0.01).观察组和对照组术后6月视力与术前比较均显著上升(P＜0.01),且观察组视力显著高于同期对照组(P＜0.01).而观察组和对照组术后6月房角粘连度均下降,与术前比较有显著性差异(P＜0.01),且观察组显著低于同期对照组(P＜0.05).对照组术后并发症的发生率为71.0％,观察组为18.8％,较对照组显著降低(P＜0.01).结论:超声乳化白内障吸出联合房角分离术治疗PACG并发白内障比超声乳化白内障吸出联合后房人工晶状体植入以及小梁切除术更加安全有效.     

定期血糖监测对糖尿病患者血糖控制及生活方式的影响

目的:探讨定期血糖监测对糖尿病血糖控制及生活方式的影响。方法:随机抽取我中心2010-2011年度确诊的老年2型糖尿病患者110例,随机分为干预组和对照组,每组各55例;2组均接受正规降糖药物治疗及生活方式指导,干预组每周进行一次血糖监测,每3个月测一次糖化血红蛋白,对照组按患者意愿测定血糖指标,通过12个月的观察,研究两组患者在血糖控制及生活方式上的差异。结果:干预组患者空腹血糖(FPG)由定期监测血糖前的(7.26±1.36)mmol/L降至(6.68±1.10)mmol/L;餐后2小时血糖(2HPG)由定期监测血糖前的(12.34±2.29)mmol/L降至(11.09±1.98)mmol/L;糖化血红蛋白由监测前的(7.99±1.61)%降至(6.60±0.87)%;差异具有显著性(P<0.05);生活方式亦有明显改善,差异具有显著性(P<0.05);而对照组的改变不如干预组。结论:通过定期血糖监测可以有效地控制血糖、糖化血红蛋白,促使老年2型糖尿病患者改变不良生活方式。     

丹江口库区水牛洼旧石器遗址发掘简报

水牛洼遗址位于湖北省丹江口市均县镇关门岩村,是汉水流域一处同时具有旧石器早期与晚期文化层的重要遗址。2010年3~4月间,吉林大学边疆考古研究中心对该遗址进行了发掘,揭露面积675m2,共获石制品301件,类型包括石核、石片、断块及工具等。地貌和地层对比显示,遗址年代大致为中更新世至晚更新世晚期。遗址可分为上、下两个文化层。上文化层出土石制品246件,属晚更新世;下文化层出土石制品55件,处于中更新世。下文化层石制品特点显示了中国南方砾石石器工业的特点,而上文化层却出现了中国北方石片石器工业的文化因素。     

表达轮状病毒nsp4基因重组腺病毒的构建与免疫评价

目的：应用非复制腺病毒表达系统构建表达人轮状病毒非结构蛋白4（NSP4）的重组腺病毒,初步评价其免疫保护效果。方法：构建含野生轮状病毒NSP4基因的穿梭质粒pshuttle-NSP4,与腺病毒骨架质粒pAdeasy经同源重组后在Ad-293细胞中包装获得pAd-NSP4重组腺病毒颗粒。电镜、RT-PCR、免疫荧光等方法鉴定病毒特征及在体外细胞中的表达。肌肉注射及滴鼻方式免疫小鼠,检测小鼠血清抗体效价及其中和保护效果。结果：获得了滴度为10^8.25CCID50/ml的重组腺病毒pAd-NSP4,免疫荧光检测到特异性目的蛋白的表达。二次免疫后肌肉注射和滴鼻小鼠的ELISA血清平均效价分别为1：320 和1：1436.8;中和抗体效价1：45.3和1：71.8。结论：表达轮状病毒NSP4蛋白的非复制型重组腺病毒颗粒具有良好的免疫原性。滴鼻途径比肌肉注射可更加有效地诱导小鼠的免疫应答。