精子介导GFP基因在小鼠早期胚胎中的表达

利用 DIG 末端标记技术和免疫组化技术分析了小鼠精子体外结合内化外源DNA的效率。试验结果表明,不同小鼠个体的精子结合外源DNA的阳性率有明显差异（P<0.01）,平均为13%。利用考马斯亮蓝染色评价了小鼠精子顶体反应发生的情况,筛选出TYH培养液为较合适的体外受精液。利用小鼠体外受精技术,将体外转染GFP基因并获能的小鼠精子与成熟卵母细胞进行体外受精,受精卵进行体外培养,表达GFP胎的阳性率为4.7%。验证了精子介导制备转基因小鼠胚胎的可行性,并建立了利用精子载体法制备转基因小鼠胚胎的平台。     

脑型肌酸激酶促进胶质瘤干细胞增殖

目的 探讨脑型肌酸激酶（brain-type creatine kinase, CKB）对胶质瘤干细胞（glioma stem cells, GSCs）代谢和增殖能力的影响。方法 应用代谢组学数据分析CKB的代谢底物肌酸在胶质瘤静脉与足背静脉血液样本中的含量差异;结合胶质母细胞瘤单细胞转录组测序数据分析、Western blot、qRT-PCR和免疫荧光染色等技术检测CKB在GSCs与非干性肿瘤细胞（non-stem tumor cells, NSTCs）中的表达差异;通过CCK-8实验检测敲低CKB或抑制剂环肌酸处理后GSCs和NSTCs的细胞增殖能力及磷酸肌酸对CKB敲低GSCs的细胞活力挽救能力。结果 肌酸在胶质瘤静脉较足背静脉血液样本中的含量上升;在GSCs中CKB表达显著高于NSTCs;CKB敲低或环肌酸处理显著抑制GSCs的增殖能力,而对NSTCs影响较小;磷酸肌酸能在一定程度上挽救CKB敲低导致的GSCs活力下降。结论 CKB在GSCs中表达上调,通过肌酸激酶/磷酸肌酸系统促进GSCs的增殖。     

海绵共生真菌产黄青霉LS16抗菌活性物质的分离及结构鉴定

海洋真菌能够产生大量活性独特的次级代谢产物。为了探明海绵共生真菌产黄青霉LS16发酵液中抗副溶血弧菌Vibrio parahemolyticus的活性物质,本实验对副溶血弧菌Vibrio parahemolyticus的抑菌活性进行跟踪,采用VLC（vacuum liquid chromatography）、Sephadex LH-20柱层析、薄层层析和高效液相色谱等技术,从海绵共生真菌LS16乙酸乙酯发酵液中分离纯化得到5个化合物。进一步实验证明,化合物2具有抗副溶血弧菌Vibrio parahemolyticus活性。根据该化合物的波谱数据（¹H NMR、¹³C NMR）对其化学结构进行鉴定,确定其分子式为C₁₅H₁₅NO₃,为生物碱类化合物。     

棉花类结瘤素MtN21基因家族生物信息学分析

结瘤素基因主要参与豆科植物根瘤的形成。非结瘤植物中也存在类结瘤素基因, 主要调控植物的生长发育。MtN21 (Medicago truncatula NODULIN 21)基因家族属于类结瘤素基因家族, 仅少数成员已被鉴定。以拟南芥(Arabidopsis thaliana) MtN21家族为参考, 对棉花(Gossypium hirsutum) MtN21基因家族进行了生物信息学分析, 发现棉花与拟南芥的 MtN21基因同源性较高, 有共同的跨膜结构域EamA和PLN00411; 棉花中仅含PLN00411结构域的MtN21蛋白等电点低于含EamA结构域的蛋白; 亚细胞定位主要在质膜、液泡膜和叶绿体, 少数在细胞核; MtN21蛋白具有膜内侧的磷酸化位点。研究结果表明, 棉花MtN21为跨膜蛋白, 具有转运活性, 可能在棉花生长发育和病原体免疫方面发挥一定的作用。     

高穗花报春的组织培养和快速繁殖

1植物名称高穗花报春(Primula vialii Franch.). 2材料类别种子萌发的无菌苗上胚轴. 3培养条件(1)种子萌发培养基:MS;(2)不定芽诱导和增殖培养基:MS NAA 0.2 mg·L-1(单位下同) IBA 0.5 6-BA 0.5;(3)生根培养基:1/2MS IBA 1.0.培养基中均附加3%蔗糖、0.8%琼脂,pH 5.8,在121℃下高压灭菌15 min.培养温度为(25±2)℃,光照时间为12 h·d-1,光强为80 μmol·m-2·s-1.     

取样尺度对亚高寒草甸物种多样性与生产力关系的影响

植物物种多样性与生产力之间的关系是群落生态学的一个热点问题, 目前仍存在着很多争议。为探究自然群落中二者之间的关系, 对青藏高原亚高寒草甸3个样地的自然植物群落分别进行了不同取样面积的抽样调查。结果显示, 取样样地和取样尺度均对物种丰富度有显著影响, 取样样地而非取样尺度对群落地上生物量有显著性影响。在某一时刻对某一样地进行取样, 其单位面积生产力并不因取样面积的增加而提高, 而是保持恒定的, 尽管物种数随取样面积的增加而有明显增多。物种多样性与生产力之间的回归关系因样地与取样尺度不同而不同, 有U型、单峰型、正线性相关和无相关性, 其中无相关性出现的最多。据此推测, 亚高寒草甸群落物种多样性与生产力之间不存在某种确定性关系, 或者说, 亚高寒草甸物种多样性和生产力之间不存在必然的因果联系。     

麦麸替代玉米对蛋鸡生产性能和蛋品质的影响

本试验旨在研究用部分麦麸替代基础日粮中的玉米对蛋鸡生产性能的影响。选取24周龄的海兰褐蛋鸡600只,随机分为5组,每组6个重复,每个重复20只。对照组饲喂基础日粮,试验组分别饲喂麦麸替代基础日粮中玉米的5%,10%,15%,20%的试验日粮,预饲期7 d,正式试验期35 d。结果表明:麦麸替代玉米提高了平均日采食量、平均蛋重、产蛋率、料蛋比、蛋比重和哈夫单位(P<0.05)。试验表明,麦麸替代玉米,可以提高蛋鸡生产性能,改善蛋品质,且替代10%的玉米效果最佳。     

基于功能性状及系统发育的亚高寒草甸群落构建北大核心CSCD

为了解甘南藏族自治州亚高寒草甸植物群落在坡向梯度上的构建机制,该文选取5个坡向的样地,构建了植物群落系统发育树,测定了各坡向土壤环境因子和植物叶片的功能性状,检验了叶片功能性状的系统发育信号。结果表明:坡向变化对土壤含水量、土壤养分含量影响显著。大部分植物的叶片特征在不同坡向的差异显著,叶片干物质含量在南坡、西南坡较高,比叶面积和叶片氮、磷含量在北坡和西北坡较高。叶片的磷含量具有微弱的系统发育信号,而叶片干物质含量、比叶面积、叶片的氮含量均没表现出显著的系统发育信号。从南坡到北坡,群落的系统发育结构由发散到聚集。生境过滤作用是南坡、西南坡群落构建的驱动因素,种间竞争是北坡和西北坡群落构建的主要驱动力。西坡系统发育指数相反,其构建机制比较复杂,可能是几种机制共同作用的结果。     

理性设计盐桥构建伯克霍尔德菌脂肪酶热稳定突变体

【目的】借助蛋白质工程技术提高伯克霍尔德菌ZYB002脂肪酶LipA的热稳定性,以期更好地将其应用于工业生产中。【方法】利用YASARA、Fold X、Rosetta、Gromacs等生物信息学软件,构建1个脂肪酶Lip A的热稳定性提高的微型突变体电子文库;通过对突变体的结构信息和自由能变化进行评估,筛选出潜在的有价值的突变体。继而利用基因定点突变技术,构建上述候选突变体的突变基因文库,通过实验筛选出热稳定性提高的脂肪酶LipA突变体。【结果】利用上述方法,从构建的20个脂肪酶LipA突变体中,筛选到热稳定性有显著提高的3个突变体LipA-Asn~(125)Asp、LipA-Asn~(125)Glu和LipA-Gln~(262)Glu。经55°C处理12 min后,上述3个突变体的T1250值较野生型分别提高4.0°C、5.5°C和4.4°C;在55°C下的半衰期较野生型分别提高了2.2倍、3.8倍和2.6倍。【结论】利用生物信息学软件,构建脂肪酶LipA突变体电子文库,结合蛋白质的结构信息,可以快速筛选到热稳定性提高的脂肪酶LipA突变体。