一种提高RAPD技术扩增效率的有效方法

RAPD技术是由Williams等于1990年首先创立的一种DNA分子标记技术。但是由于低的退火温度和短的引物序列等原因,常常使得RAPD技术的分辨率和可重复性低。本文介绍一种通过延长从退火到延伸的ramp时间,提高RAPD产物的分辨率和产量,由此提高RAPD技术的扩增效率的有效方法。 Abstract:The random amplified polymorphic DNA(RAPD)is a technique of DNA molecular marker,which was first established by Williams in 1990.The resolution and repetition is low because of the low annealed tempture and short primers in the RAPD.In this paper we introduce an improved method for increasing the efficiency of the technique of RAPD by prolonging the ramp time from annealing to extension and increasing the resolution and production.     

经典饲养层细胞Wnt表达的差异及其对人胚胎干细胞Wnt/β-Catenin信号通路的影响

目的:研究比较三种经典饲养层体系使用的成纤维细胞中Wnt基因的表达,及其对共培养的人胚胎干细胞的影响。方法:PCR验证19种Wnt基因在三种不同来源饲养层细胞中的表达情况,q PCR验证各组共培养人胚胎干细胞的Wnt/β-Catenin信号通路相关基因表达水平,流式检测其在不同密度饲养层条件下的增殖分化情况。结果:在全部19种Wnt基因(Wnt1,Wnt2,Wnt2b,Wnt3,Wnt3a,Wnt4,Wnt5a,Wnt5b,Wnt6,Wnt7a,Wnt7b,Wnt8a,Wnt8b,Wnt9a,Wnt9b,Wnt10a,Wnt10b,Wnt11,Wnt16)的表达检测中,昆明白小鼠来源饲养层细胞表达其中的16种,ICR小鼠来源饲养层细胞表达其中的10种,人成纤维细胞来源饲养层细胞表达其中的10种;增加饲养层细胞密度能够不同程度活化Wnt/β-Catenin信号通路下游基因的表达,并激活人胚胎干细胞中的负反馈机制;高密度小鼠饲养层条件促进人胚胎干细胞的分化,高密度人饲养层条件促进人胚胎干细胞的增殖和分化。结论:不同经典饲养层体系提供的Wnt环境不同,其培养的人胚胎干细胞状态也有差异。     

HLA-Ⅱ类基因DRα及DRB1 *0401转基因小鼠模型的遗传与繁殖

采用类系祖建系的方法 ,对HLA -Ⅱ类基因DRα 和DRB1 　 0 4 0 1转基因小鼠模型进行了繁育。通过PCR和Southernblot分子杂交的方法 ,检测小鼠尾组织的DNA样品 ,以确定DR基因的整合和复制情况。结果表明 ,HLA -Ⅱ类基因DR已稳定地遗传至第五代(F5) ;共产仔 32 6只 ,PCR检测出阳性小鼠 95只 ,阳性率为 2 9.1 %。PCR—Southern印迹杂交检测 ,发现 68只仔鼠整合有DR基因 ,总有效率为 2 0 9%。经Nothern杂交和RT -PCR检测HLA -DR基因在脾脏和肾脏中均有表达。     

铝对大鼠纹状体胆碱酯酶和神经元超微结构的影响

铝对大鼠纹状体胆碱酯酶和神经元超微结构的影响董大翠，张艳，熊希凯，陈艳贤（同济医科大学基础医学院人体解剖学教研室武汉４３００３０）铝的神经毒已逐渐引起人们的重视。铝被认为是老年痴呆的致病因素之一。为了进一步探讨铅与某些神经系统疾病的关系，本实验采用Ｗ...