抗TNF-α单链抗体噬菌体展示文库的建立和鉴定

应用噬菌体展示技术构建抗肿瘤坏死因子α(tumornecrosis factor α,TNF-α)单链抗体(single chain Fv,scFv)文库,从中筛选抗TNF-αscFv并进行鉴定.利用重组人TNF-α(rhTNF-α)免疫小鼠,分别扩增小鼠VH和VL基因,经重叠延伸反应将VH和VL基因拼接成scFv基因,以SfiⅠ/NotⅠ位点定向插入pCANTAB 5E噬菌粒载体,转化E.coli TG1,构建了库容为4.6×108的抗TNF-α单链抗体库.对抗体库进行3轮富集筛选后,ELISA检测阳性克隆的抗原特异性,取1株阳性克隆进行测序分析.结果表明,抗TNF-αscFv基因序列长774bp,编码258个氨基酸.将此阳性克隆转化E.coliHB2151,IPTG诱导可溶性scFv的表达,经SDS-PAGE和Western印迹分析,scFv的分子量约为28kD.经亲和纯化后的scFv可与rhTNF-α结合,并可中和由rhTNF-α引起的L929细胞毒性.本文利用噬菌体抗体库筛选到了高亲和力的抗TNF-αscFv,为研制临床免疫治疗的新型抗体奠定了实验基础.     

牛乳铁蛋白素(1-15)-蜂毒素(5-12)杂合肽基因的合成及在大肠杆菌中的表达

为了构建新型的杂合肽,设计了一种新型杂合抗菌肽牛乳铁蛋白素(1-15)-蜂毒素(5-12),由牛乳铁蛋白素(LfcinB)N端第1~15个氨基酸残基和蜂毒素(Melittin)N端第5~12个氨基酸残基组成。根据大肠杆菌密码子的偏爱性,设计合成了杂合肽LfcinB(1-15)-Melittin(5-12)的基因片段,插入到表达载体pET-32a的NcoI和SalI的酶切位点之间,构建重组表达质粒。重组表达质粒转化到Escherichia coli BL21(DE3)中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,融合蛋白以可溶形式在Escherichia coli BL21(DE3)中获得成功表达,表达量占菌体总蛋白的35%以上,每升培养物可获得35mg融合蛋白。带His标签的融合蛋白经His-Bind纯化试剂盒纯化、肠激酶切割和抑菌实验表明,杂合肽具有明显的抑菌效果。这为利用基因工程方法生产抗菌肽奠定了理论基础。     

手术治疗Pilon骨折体会（附38例报告）

目的评价手术治疗Pilon骨折的临床疗效。方法1998年6月-2006年6月应用AO技术对38例Pilon骨折行切开复位．支撑钢板及螺钉内固定治疗。术后随访1～3年,按Mazur标准进行功能评价。结果38例患者总优良率9z％,其中C1型18例,C2型15例,C3型5例。3例发生切口感染,4例出现创伤性踝关节炎。结论临床治疗效果与骨折类型及治疗方法有关,运用AO技术治疗Pilon骨折可以取得满意的疗效。     

一个三物种生态系统模型

本文利用属性集合来定义物种,对于同一物种中的不同个体,各种属性所表现出的强度不同,导致了个体之间的差异性．对一个物种而言,它具有的某方面功能是由物种的不同属性体现于这方面的能力所共同决定的．本文对具有环状捕食结构的三物种构成的生态系统,以各物种的每个属性对和捕食逃逸能力的贡献方式为基础,将属性分为四类．讨论了四类属性随时间的演化规律．从所得的结果发现,随着时间的延伸,三物种可以稳定的共存;另外,对物种捕食和逃逸有利的属性在平均意义下是进化的,而对捕食和逃逸无作用的属性却无法被淘汰．     

低温层积与外源GA3对肉苁蓉种子萌发及其内源GA和ABA含量的影响

研究低温层积对肉苁蓉种子胚率、内源赤霉素（GA）和脱落酸（ABA）含量以及外源赤霉素（GA3）对低温层积不同时间种子萌发率影响的结果表明：低温层积可以提高种子的胚率及其GA的含量,降低其ABA含量;层积120～150d的肉苁蓉种子经外源GA3处理后,其萌发率可以达到70%以上;层积120d是外源GA3促进种子萌发的临界点。     

采用TEV酶法进行整合膜蛋白拓扑学分析

为了研究膜蛋白的跨膜结构,进行拓扑学分析是十分重要的.有许多分析膜蛋白拓扑结构的方法,本文采用烟草蚀斑病毒（TEV）酶特异性切割测试蛋白中跨膜片段的前段或后端所插入的tev识别序列EXXYXQ(S/G),如果TEV酶能够切割,表明该序列位于目标蛋白的细胞 质外.将Tev识别序列ENLYFQG 分别插入到拟南芥整合膜蛋白的的跨膜区域,然后转化进入酿酒酵母中. 消解酶(zymolyase)酶破除酵母的细胞壁后,TEV酶消化球状体,最后通过Western免疫印迹法来分析结果.有关该方法的注意事项在结果中进行了讨论.     

激活类法尼醇X核内受体（FXR）可下调载脂蛋白M在HepG2细胞中的表达

类法尼醇X核内受体（farnesoid X receptor, FXR）和载脂蛋白M(ApoM)在动脉粥样硬化中发挥重要作用．为研究FXR激动剂鹅脱氧胆酸(chenodexycholic acid, CDCA)和拮抗剂Guggulsterones在人肝癌细胞株HepG2和人胎肝细胞株L02中对载脂蛋白M(apolipoprotein M, ApoM)表达的影响．本研究应用逆转录 聚合酶链反应（RT PCR）法和Western印迹法检测CDCA和CDCA加Guggulsterones处理后HepG2和L02细胞中ApoM的mRNA水平和HepG2细胞中ApoM的蛋白水平．实验结果显示：FXR天然配体CDCA以剂量依赖的方式显著降低HepG2细胞中ApoM分子（mRNA和蛋白水平）的表达,L02细胞中ApoM分子mRNA水平的表达;FXR抑制剂Guggulsterones不仅能明显阻止CDCA对ApoM表达的下调,而且可引起ApoM表达显著增加．本研究提示,FXR抑制剂Guggulsterones在抗动脉粥样硬化过程中可能发挥重要作用．     

Proton NMR investigation of heme and surrounding proton in low-spin cyanide-ligated bacterial hemoglobin fromVitreoscilla

1H NMR spectra of low-spin cyanide-ligated bacterial hemoglobin from Vitreoscilla (VtHb-CN) are reported. The assignments of the 1H NMR spectra of VtHb-CN have been made through MCOSY, NOESY, 1D TOE and SUPERWEFT experiments. Almost all resonance peaks of heme and ligated His85 are identified. The spin-lattice relaxation time T1's and the variation relationships of chemical shifts of these peaks with temperature have been acquired, from which the distances between the measured protons and Fe3 , and the diamagnetic chemical shifts have been acquired, respectively. The ionization constants of pKa's of ligated His85 are determined through pH titration of chemical shift, which is 4.95 for ligated His85 C2H proton. The lower pKa is attributed to the influence of the Fe3 of carrying positive charge and the coordination of His85 and Fe3 of heme.     

《农业与环境生物技术文摘》

《农业与环境生物技术文摘》创刊于 1993年 ,是世界著名的剑桥科学文摘 (ＣＳＡ)近 40个系列检索刊物之一。该刊内容广泛 ,涉及微生物、植物、动物有关的生物技术研究 ,其中农业应用包括动植物病害的诊断与控制 ,生物技术在动植物育种、害虫防治、土壤微生物、废弃物处理、环境污染、能源、矿物和发酵及工艺工程中的应用。该刊把农业与环境生物技术分为 12个一级类目、34个二级类目、4个三级类目 :一般热点与评述专利遗传工程　微生物、植物、动物、克隆载体生物信息学与计算机应用方法　固定、色谱、细胞培养、深低温保藏、新细胞系、免疫…