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71.
平滑肌细胞骨架结构及其信号调节途径 总被引:1,自引:0,他引:1
平滑肌细胞骨架是一个复杂的动态性网络,是细胞生命活动不可缺少的细胞结构。Rho通过活化其下游靶分子促进应力纤维的形成,其中Rho—associated coiled—coil kinase(ROCK)和Dial在该过程中起关键作用;PKC通过在细胞内不同定位的亚型使细胞骨架蛋白磷酸化,发挥其调节细胞骨架重构的作用。两条信号转导途径通过Src途径相互联系,共同参与细胞骨架动力学的调节。 相似文献
72.
73.
74.
探讨细胞代数和密度对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)表型重塑能力的影响及机制,观察血清饥饿诱导的不同代数和密度的VSMC骨架的组构特征及收缩反应性,检测细胞骨架中收缩蛋白的含量和比例变化。结果发现,低代数(3代)、高密度的VSMC经血清饥饿诱导后易于形成束状、极性排列的应力纤维,乙酰胆碱(Ach)刺激可产生明显的收缩反应。Western印迹显示,3代高密度VSMC中,平滑肌22α(SM22α)在F-肌动蛋白中的组成比例及其在F-/G-肌动蛋白的含量之比明显高于8代细胞。结果提示,SM22α在F-肌动蛋白中的分布比例可能决定了应力纤维的排布方式,是细胞获得收缩性的主要调节因素,在VSMC表型重塑过程中具有重要意义。 相似文献
75.
76.
SARS冠状病毒核心蛋白对hfgl2纤维介素基因有激活作用,采用实时荧光定量PCR和Western印迹已验证了hfgl2基因在mRNA和蛋白水平的表达.为进一步明确在SARS冠状病毒核心蛋白刺激下,hfgl2纤维介素基因5′端非编码区对转录激活起重要作用的转录调控序列,构建了一系列hfgl2 基因启动子荧光素酶报告基因质粒,将其与SARS冠状病毒核心蛋白真核表达质粒共转染CHO细胞.结果表明,转染前3个质粒hfgl2p(-1334)LUC、hfgl2p(-997)LUC、hfgl2p(-816)LUC的细胞的相对荧光素酶活性无显著改变;但转染hfgl2p( 468)LUC 质粒的细胞荧光素酶的活性较前明显降低,说明在hfgl2 基因启动子-816位至-468位(相对于转录起始点)之间存在着激活该基因的调控序列.本研究在一定程度上从分子水平揭示了SARS冠状病毒蛋白与宿主纤维介素基因之间的关系. 相似文献
77.
78.
大鼠诱导型一氧化氮合酶基因转录调控区的克隆与鉴定 总被引:2,自引:0,他引:2
采用单特异引物PCR克隆法,得到大鼠诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因转录调控区DNA片段。核酸序列分析证实,大鼠iNOS基因的5'-侧翼区含有IFN-γ和TNF-α应答元件及NF-kB结合位点的保守序列。这些保守序列的位置及排列显区别于人和小鼠的iNOS基因。电泳迁移率改变分析(EMSA)表达,VSMC受IL-1和IFN-γ刺激后,细胞核内产生某种可与iNOS基因5'-侧翼区特异结合的核蛋白因 相似文献
79.
将克隆载体平端切割后,向反应体系中加入dTTP,用TaqDNA聚合酶处理载体,使其3-端带上一个凸出的单碱基T,修饰后的载体可直接与纯化的PCR产物连接。 相似文献
80.
大鼠iNOS基因上游调控区在转录激活中的作用 总被引:2,自引:2,他引:0
为了探讨大鼠iNOS基因上游调控区不同部位在对细胞因子诱导应答中所起的作用,将调控区不同部位插入pSV0-CAT报告基因载体,转染体外培养的血管平滑肌细胞(VSMC),经IL-1β诱导后,采用氯霉素乙酰转移酶(CAT)活性测定和Northern印迹杂交,检查了调控区各部位在IL-1β诱导cat表达中所起的作用.结果表明,被转染的细胞在未经IL-1β刺激时,各种调控区序列启动cat表达的活性均很低.在IL-1β作用下,调控区远端序列(-1037~-438)、近端序列(-437~+46)和全长序列(-1037~+46)均能独立激活cat表达,其中以全长序列的作用最强,表明iNOS基因表达调控区远端和近端序列均具有启动子和增强子样功能.同时证实,远端序列和近端序列单独启动cat表达的活性分别为全长序列的91.3%和67.1%,揭示大鼠iNOS基因调控区远端序列在介导IL-1β的应答反应中发挥更重要作用. 相似文献