甲醛对DNA损伤的彗星实验研究

甲醛是一种遗传毒性物质。国内外学者的大量研究证实,甲醛可以引起DNA-DNA、DNA-蛋白质分子交联,但对于甲醛是否能够引起DNA 分子的断裂,学界却存在分歧。本实验以颊黏膜细胞作为实验材料,通过彗星实验对甲醛的遗传毒性——尤其是DNA 分子断裂作用进行了系统的研究。结果显示甲醛在较低浓度(5μmol/L,7.5μmol/L,10μmol/L)时具有断裂作用,在较高浓度(15μmol/L,30μmol/L,50μmol/L)时则具有交联作用。根据本实验的结果,本文还首次论证了甲醛断裂作用的断裂峰值(7.5μmol/L)。     

RNAi作用机制与抗病毒研究

RNA干扰是指导入针对特异靶基因产物的同源双链RNA可导致细胞特定基因缺失或减退的显型,是体内抵御外源感染的一种重要保护机制。目前,RNA干扰作为一种简单、有效的代替基因敲除的遗传工具,正在被用于功能基因组学、基因治疗、基因表达调控等多个研究领域。本文主要综述了RNA干扰发生的机制,并兼述其在抗病毒方面的应用。     

抗苏云金杆菌毒素Cry1Ac粉纹夜蛾细胞系的特性研究

为了从离体细胞水平探讨昆虫对苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白的部分抗性机制,本文采用活化的Cry1AC毒素对粉纹夜蛾BTI-TN-581-4细胞连续筛选86代,获得了高水平抗性细胞,研究了其某些特性。它对Cry1C产生了低水平的交互抗性,对低渗溶液的耐受性显著增强,双向电泳图谱表明抗性细胞膜蛋白组分发生了明显的变化。膜蛋白组分的变化可能导致了筛选细胞的耐低渗透压和抗Cry1C。     

适于无血清贴壁培养的抗凋亡宿主细胞系CHO-IVB2的构建

应用无血清培养基培养CHO细胞时,由于没有血清提供各种贴壁因子,细胞以悬浮的方式生长。在实际的大规模细胞培养中,CHO细胞往往以贴壁方式培养,要么贴壁于悬浮的微载体中,要么贴壁于固定的聚酯盘状介质或中空纤维中,而很少直接悬浮于培养基中。在无血清培养基中,Vitronectin单一组分可以促使CHO细胞的贴壁和扩增。通过双表达lgf-1和Bcl-2基因,已经构建了可以在无蛋白培养基IMEM中抗凋亡生长的细胞株CHO-IB3。在此基础上,构建了可以同时表达Igf-1、Vitronectin和Bcl-2三个蛋白的三顺反子表达载体pCI—NII—IVB。将该载体转染于CHO—dhfr^-细胞中,构建了一个细胞株CHO—IVB2。该细胞株可以在无蛋白培养基中抗凋亡生长,适于以贴壁的方式大规模培养,用于大量生产外源目的蛋白。     

减毒沙门氏菌为载体在Vero细胞中表达传染性法氏囊病病毒多聚蛋白基因

用长距离RT-PCR扩增了传染性法氏囊病病毒（infectious bursal disease virus, IBDV）ZJ2000株多聚蛋白基因,定向克隆入真核表达载体Pci,电转化dam^-和phoP^－双突变的减毒鼠伤寒沙门氏菌ZJ111株,并直接转染Vero细胞。RT-PCR和间接免疫荧光试验可从Vero细胞中检测到阳性信号,SDS-PAGE和West blotting均可检测到41kD的蛋白条带。结果表明减毒沙门氏菌可将外源基因导入Vero细胞,并进行转录和表达,具有免疫反应性,为进一步研制减毒沙门氏菌为载体的IBDV口服DNA疫苗打下基础。     

OMgp LRR281～228：OMgp神经突起生长抑制功能的主要结构域

OMgp(oligodendrocyte-myelin glycoprotein)可以通过与MAG、nogo-66等神经再生抑制因子竞争结合同一受体NgR而诱使生长锥溃变和抑制神经突起的生长。以前的研究表明,在OMgp与NgR结合抑制神经突起生长的过程中,OMgp的亮氨酸富含重复序列(LRR)是必需的。为进一步了解OMgp LRR在神经突起生长中的作用及其结构与功能之间的关系,采用PCR-定点突变法对OMgp LRR结构域分段删除,表达了删除不同基因片段后的OMgp LRR蛋白,通过对表达有NgR的CHO细胞(NgR-CHO)的黏附实验和对原代培养神经细胞的抑制实验对其功能进行了研究。结果显示,分别删除了OMgp 25～56、57～133、134～180位氨基酸的OMgp LRR蛋白仍具有结合NgR-CHO和抑制原代培养的神经元突起生长的作用;而删除了第181～228位氨基酸的OMgp LRR蛋白则失去了对原代培养神经元的生长抑制作用,但仍然具有结合NgR的能力。表明OMgp181～228在OMgp的功能中具有重要的意义。删除了第181～228位氨基酸的OMgp LRR蛋白可望作为OMgp的竞争性抑制剂,用于中枢神经系统损伤后神经再生的治疗。     

重组型LRP-Ⅳ——治疗阿尔采末病药物的候选者

脑内β-淀粉样蛋白（amyloid—β,Aβ）的过量积累能够引起突触传递功能的异常和神经细胞坏死,目前认为这是阿尔采末病（Alzheimer＇s disease,AD）的重要原因之一。在体内β分泌酶能够将低密度脂蛋白受体相关蛋白-1（LRP）的N-端从LRP降解下来,使之成为可溶性LRP（sLRP）,sLRP释放到血液中,可以与血液循环中的Aβ结合,然后将Aβ转移至肝脏中降解。这种LRP调控循环血液中Aβ的水平是清除血液循环中Aβ的主要方式。在AD患者体内由于sLRP含量降低,对Aβ结合能力降低,从而导致血液中游离Aβ的水平明显提高。     

水浮莲中一株西瓜枯萎病拮抗菌的分离、筛选及鉴定

从水浮莲(Pistia stratiotes L.)的叶中分离出1株对西瓜枯萎病有明显拮抗作用的内生细菌XJPL-YB-26, 其发酵液上清在280 nm处有最大紫外吸收峰。利用软件Primer 6.0 设计16S rDNA引物并对其基因组DNA进行扩增并测序得到XJPL-YB-26的部分16S rDNA序列, GenBank接收号为EU251191。经Blastn调出与菌株16S rDNA同源的序列, 并用软件MEGA 3.1按Neighbor- Joining方法构建16S rDNA系统发育树。菌株XJPL-YB-26与AB271744处于同一分支, 相似性为99%, 最终鉴定为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。     

CD68、CD133和TGF-β在肝癌及癌旁组织中的表达及其在临床转归中的意义

目的研究CD68^+肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)、CD133^+肿瘤干细胞(CSCs)及TGF-β在肝癌及癌旁组织中的表达及其在临床转归中的意义。方法选取2014年1月至2016年1月在中国医学科学院肿瘤医院综合科进行手术治疗的89例肝癌患者为研究对象。收集患者手术标本,进行免疫组化染色(IHC),采用半定量积分法对免疫组化分析正常、癌及癌旁组织中CD68^+肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)、CD133^+肿瘤干细胞(CSCs)及TGF-β表达情况,结合随访资料对其意义进行分析,其表达水平与临床病例资料之间关系采用c^2检验或Fisher确切概率法检验或Wilcoxon秩和检验,相关性分析采用Spearman检验。结果 CD68^+TAMs细胞在癌组织中阳性率为59.55%,癌旁组织为37.08%,差异具有统计学意义(Z=-3.182,P=0.001);CD133^+细胞在癌组织中阳性率为52.81%,癌旁组织中为57.30%,表达差异无统计学意义(Z=-0.558,P=0.557);TGF-β在癌组织阳性率为70.79%,癌旁组织中为56.18%,差异具有统计学意义(Z=-2.306,P=0.021)。CD68、CD133、TGF-β表达水平与患者肿瘤分化程度及淋巴结转移情况密切相关,差异具有统计学意义(P<0.05);TGF-β表达水平与Child-Pugh分级相关,差异具有统计学意义(c^2=10.930,P=0.001)。HCC癌组织中CD68与TGF-β表达,CD133与TGF-β表达之间存在正相关关系,相关系数分别为(r=0.579、0.611,P=0.026、0.020)。Kaplan-Meier生存曲线分析可知,3种分子均无表达的患者中位生存时间最长,为23.4个月,3种分子均有表达的患者中位生存期最短,仅为6.3个月(P=0.021)。结论 CD68^+TAMs细胞与CD133^+CSCs细胞之间存在相关性,二者之间具体机制有待进一步研究,以便为肝细胞癌(HCC)治疗提供有力依据。